吗啡对C6胶质瘤细胞嘌吟核苷酸代谢相关酶基因表达的影响

目的：研究吗啡对C6胶质瘤细胞嘌呤核苷酸合成代谢与分解代谢的影响。方法：吗啡（10μg/ml培养基）作用于C6胶质瘤细胞6h、12h、24h、48h、72h；纳络酮（1μmol/L）作用于C6胶质瘤细胞1h后，加吗啡（10μg/ml）作用24h。提取细胞总RNA，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）及腺苷激酶（AK）的基因转录产物；采用反转录-聚合酶链反应及Southern(RT-PCR-Southern)杂交方法检测黄嘌呤脱氧酶（XD）/黄嘌呤氧化酶（XO）基因转录产物。结果：C6胶质瘤细胞暴露于吗啡μ,12,24,48,HGPRT基因表达均明显降低；而C6胶质细胞AK基因表达在暴露于吗啡24h明显降低；HGPRT与AK基因表达又分别于吗啡作用胶质瘤细胞72h和48h回升；纳络酮不能阻断吗啡对HGPRT与AK基因表达降低的作用。吗啡作用于C6胶质瘤细胞与相应时段对照组相比，XD/XO基因转录产物均明显增多；纳络酮能够阻断吗啡对XD/XO基因表达增强的作用。结论：吗啡通过其他非μ受体途径介导对C6胶质瘤细胞嘌呤核苷酸补救合成关键酶HGPRT与AK基因表达降低的作用；吗啡通过μ受体途径介导对C6胶质瘤细胞嘌呤核苷酸分解代谢关键酶XD/XO基因表达增强的作用。  

经胼胝体-穹窿间入路切除内侧型丘脑胶质瘤

目的 探讨一种切除内侧型丘脑胶质瘤的手术入路。方法 对8例内侧型丘脑胶质瘤患者进行了肿瘤切除手术，肿瘤切除的方法采用的是经胼胝体-穹窿间入路。对患者进行3—12个月随访。结果 显微镜下近全切除5例，大部切除3例，术后效果满意。随访结果，1例患者术后3个月因肿瘤复发而死亡。其他7例患者随访6～12个月，均恢复正常生活。结论 该手术入路利用大脑自然裂隙到达并切除内侧型丘脑胶质瘤，暴露好，不易造成穹窿、丘脑、中脑、大脑内静脉、丘纹静脉等重要结构的损伤，术后并发症少。  

榄香烯对大鼠胶质瘤C6细胞Bcl-2家族基因及蛋白表达的影响

目的探讨莪术提取物-榄香烯诱导大鼠胶质瘤C6细胞系凋亡机制及其对Bcl2家族基因及蛋白质表达的影响。方法应用RTPCR、Westernblot方法检测榄香烯在0、20、40、60、80μg/ml浓度及作用时间为12、24、36、48、72h时处理的大鼠胶质瘤C6细胞系,利用流式细胞仪观察细胞的凋亡、细胞增殖的变化和Bcl2家族基因及蛋白质表达的变化。结果经榄香烯20、40、60、80μg/ml处理大鼠胶质瘤C6细胞48h后,单视野细胞计数分别为(536±9)个、(375±10)个、(246±9)个、(112±10)个,与浓度为0μg/ml时单视野细胞计数(625±12)个相比体外增殖抑制效应比差异有统计学意义(F=1292.416,P<0.05)。经不同浓度榄香烯处理后C6细胞凋亡率分别增加到(27±2)%、(29±4)%、(32±3)%、(35±5)%,同时有亚二倍体凋亡峰,即Ap峰出现。榄香烯可明显下调Bcl2/Bclx/l基因及蛋白质表达,且该作用呈浓度、时间依赖性,而对Bax基因及蛋白质无明显影响。结论下调Bcl2/Bclx/l基因及蛋白质表达可能是榄香烯诱导凋亡、抑制C6细胞增殖的主要机制。  

悬浮法培养C6胶质瘤细胞系和该细胞系中脑肿瘤干细胞的分离

目的研究应用无血清培养基悬浮法培养C6胶质瘤细胞系的方法;并分离该细胞系中的脑肿瘤干细胞,观察其生长方式和分化特征.方法应用培养大鼠神经干细胞的培养基和培养方法,在无血清培养基中采用悬浮法培养大鼠C6胶质瘤细胞系;再将分离获得的悬浮生长的脑肿瘤干细胞接种于含血清培养基,观察其分化;应用有限稀释和单克隆形成实验确定该细胞系中肿瘤干细胞的比例.结果C6胶质瘤细胞系中有约1.18%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由漂浮的细胞球;这种细胞球具有人脑肿瘤干细胞球的特征,并可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,贴壁分化后细胞形态与直接在含血清培养基中培养的C6胶质瘤细胞系无明显差别.结论C6大鼠胶质瘤细胞系中含有比例较低的、具有增殖和分化能力脑肿瘤干细胞(约1.18%),该细胞系可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系.  

端粒酶抑制剂联合辐射对人胶质瘤细胞存活的影响

目的 :观察端粒酶抑制剂AZT联合60 Coγ 射线对人脑胶质瘤细胞U2 5 1端粒酶活性及细胞存活的影响 ,探讨AZT的放射增敏作用。方法 :实验分 4组 :A、空白对照组 ;B、放射组 ;C、加药组 ;D、加药放射组。用克隆形成分析法观察AZT对U2 5 1细胞放射敏感性的影响 ,通过拟合生存曲线计算放射增敏比SERD0 、SERDq、SERSF2 。用端粒重复序列扩增 (telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP) PCR ELISA方法检测端粒酶活性的动态变化。结果 :照射前经 0 .8mmol·L-1AZT处理 2 4h明显降低了 2Gyγ 射线照射后U2 5 1细胞的存活分数 ,SERD0 、SERDq、SERSFM2 分别为 1.2 94 ,1.2 5和 1.36 5 ;表明AZT具有放射增敏的作用 (P <0 .0 5 )。端粒酶活性分析显示A、B、C、D组细胞的端粒酶活性分别为 1.5 6 3± 0 .0 2 2 ,1.92 3± 0 .188,1.0 5 7± 0 .12 6 ,1.2 0 9± 0 .15 3,各组之间差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :AZT能明显抑制 2Gy照射诱导的U2 5 1细胞端粒酶活性升高 ,并显著增加U2 5 1细胞的放射敏感性 ;AZT的放射增敏作用可能与端粒酶活性受抑制有关。  

苦参碱对BT325胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的　观察苦参碱对人胶质瘤细胞株BT32 5体外增殖的影响 .方法　应用MTT比色法检测不同浓度苦参碱对BT32 5细胞的增殖抑制 ,应用流式细胞仪观察苦参碱对BT32 5细胞周期的影响 ,采用透射电镜观察瘤细胞形态学改变 .结果　苦参碱对BT32 5细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性 ,当浓度为 0 5g·L- 1 时 ,对BT32 5增殖的抑制率最大 ,达到 (32 1±1 1) % .流式细胞仪分析显示 ,用 0 5g·L- 1 苦参碱培养 72h ,BT32 5细胞出现典型凋亡峰 ,凋亡细胞占细胞总数 2 3 9% .透射电镜观察 ,发现有凋亡细胞存在 ,表现为细胞皱缩 ,染色质边集 .结论　苦参碱对人胶质瘤细胞系BT32 5的增殖具有明显的抑制作用 ,并能诱导其发生凋亡 .  

建立大鼠C6脑胶质瘤模型与观察颅内肿瘤生长

建立大鼠Ｃ６脑胶质瘤模型，行一般观察和ＭＲＩ检查以确定颅内肿瘤生长情况，寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标。方法体外培养大鼠Ｃ６胶质瘤细胞，应用立体定向法将含１０ｇ．Ｌ＾－１琼脂糖和１＊１０＾６Ｃ６细胞悬液１０μＬ注入大鼠了尾状核。接种后行一般观察和ＭＲＬ检查，对５组接种大鼠分别在第１０，１５，２０，２５日和自然死亡前做主动脉多聚甲醛灌注固定，对脑组织和肿瘤标本进行切片观察和ＨＥ染色。结果５０只接  

脑胶质瘤中SLC5A8和TMS1/ASC基因启动子区甲基化及mRNA表达的研究

目的研究肿瘤抑制基因SLC5A8和TMS1／ASC在胶质瘤中的启动子区甲基化和mRNA表达情况，探讨其与临床情况之间的关系。方法通过甲基化聚合酶链反应（MSP）检测SLC5A8和TMS1／ASC基因在88例胶质瘤组织、10例正常脑组织及胶质瘤细胞株U251和SHG-44中的DNA甲基化情况；通过传统逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和实时定量PCR检测SLCSA8和TMS1／ASC的mRNA表达情况；检测去甲基化试剂5-氮杂脱氧胞苷（5-Aza-CdR）作用于细胞株后，对基因DNA甲基化和mRNA表达的影响。结果在88例胶质瘤中，SLC5A8启动子区的甲基化发生率为70．45％（62／88），其甲基化率随胶质瘤恶性程度的增加而增高；TMS1／ASC启动子区的甲基化发生率为51／88（57．95％），其甲基化率随胶质瘤恶性程度的增加而降低。10例正常脑组织中均未检测到SLC5A8和TMS1／ASC基因的甲基化。在各级别胶质瘤中SLCSA8和TMS1／ASC的mRNA与正常脑组织相比均表达下调，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。在U251和SHG-44胶质瘤细胞株中均检测到SLC5A8和TMS1／ASC基因的甲基化，去甲基化试剂5-Aza-CdR均能重新激活SLC5A8和TMS1／ASC基因的表达。结论SLC5A8和TMS1／ASC基因在胶质瘤中的启动子区甲基化导致其mRNA表达下调，其甲基化的发生率及mRNA表达与胶质瘤的恶性程度密切相关。  

岛叶病变的显微外科手术治疗

目的 探讨经侧裂间入路手术治疗岛叶病变２对减少邻近脑组织损伤、降低术后并发症的意义。方法 采用常规额颞开颅显微镜下由浅至深分离侧池蛛网膜，松解额颞叶连系，直接暴露岛叶病变，并行显微手术切除。结果 １５例患者全切除１０例，近全切除５例，术后影像证实均无铁脑组织损伤征象，亦无失语、记忆力下降等表现。１５例随访１￣３个月，无癫痫发作，无明显记忆力下降及失语秀丽，手术效果显著。结论 经侧裂间入路是一种有效  

槲皮素对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用

目的：研究类黄酮化合物槲皮素（quercetin,QUE）对体外培养的大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用。方法：按QUE浓度分成10、25、50、75及100 μmol·L^-15个处理组和空白对照组（生理盐水）及溶剂对照组（二甲亚砜），大鼠脑胶质瘤C6细胞在RPMI 1640培养基中生长达1×10⁶·mL^-1后，在96孔板中分别加入上述浓度的QUE继续培养，每组设3复孔，作用24、48及72 h，采用MTT比色法检测QUE对大鼠脑胶质瘤C6细胞的增殖抑制情况，流式细胞术（FCM）对50及100 μmol·L^-1的QUE作用48 h的大鼠脑胶质瘤C6细胞进行周期分析,免疫组化法检测50 μmol·L^-1的QUE作用48 h 的p53和bcl-2基因产物。结果：与空白对照组比较，QUE处理组随药物浓度增加和作用时间的延长，A值减小(P<0.05)，对C6细胞的增殖抑制作用增强，使停滞在G₀／G₁期的细胞增加(P<0.01)，而S和G₂/M期细胞减少(P<0.05)。P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论：QUE对C6细胞增殖抑制作用具有浓度、时间依赖性，通过P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少诱导细胞凋亡来实现。