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1.
外源性人野生型p53基因转染导致兔动脉硬化斑块的不稳定性   总被引:28,自引:3,他引:25  
目的 建立动脉粥样硬化不稳定性斑块的动物模型。方法  6 4只雄性纯种新西兰大白兔随机分成A组 (5 4只 )与B组 (1 0只 ) ,A组用球囊损伤腹主动脉 高脂喂养 1 0周 ,B组仅给予高脂喂养 1 0周。于 8周末将A组随机分为A1和A2两个亚组 ,在腹主动脉斑块形成处分别转染携带人野生型 p5 3基因或LacZ基因的重组腺病毒载体 ,2周后A1 (p5 3基因 )和A2 (LacZ基因 )组各处死1 0只 ,观察斑块自发破裂情况。分别给予余下的兔中国斑点蝰蛇毒 (CRVV)和组胺药物触发斑块破裂 ,然后将兔处死取出腹主动脉进行病理学及免疫组化检查。实验开始及处死前进行血脂检查。结果 A1组转染 p5 3阳性细胞数比其他两组明显增加 (分别为 32 4 %± 1 0 2 %,1 5 8%± 3 6 %,1 6 2 %± 6 7%,P均 <0 0 0 1 ) ,细胞凋亡率明显高于其他两组 (分别为 2 5 %± 0 8%,1 0 %±0 3%,0 9%± 0 4 %,P均 <0 0 1 ) ,斑块纤维帽显著变薄 (P <0 0 5 ) ,血管平滑肌细胞减少 ,巨噬细胞聚集 ,药物触发后有 1 2只共 2 0处发生斑块破裂及血栓形成 ,A2组中 ,药物触发后仅 5只 7处发生斑块破裂。B组未见斑块破裂及血栓形成。结论 应用外源性人野生型p5 3基因转染动脉硬化兔可导致斑块的不稳定性 ,药物触发后出现斑块破裂及血栓形  相似文献
2.
Yang C  Yang S  Du J  Li J  Xu W  Xiong Y 《中华医学杂志(英文版)》2003,116(10):1544-1548
Avascularnecrosisofthefemoralheadisadebilitatingdiseasethatusuallyleadstodestructionofthehipjointandincreasingmusculoskeletalmorbidityinyoungandmiddleagedpatients Totaljointreplacementiscommonlyusedtotreatdisablingsecondaryosteoarthrosis Althoughthemostrecentimprovementsintotalhipreplacementmaydecreasefailure,thepatientsareusuallyyoungandcurrenthipprostheseswon’tfunctionwellfortheremaininglifeexpectancyofthesepatients Thus,it’snecessarytodelayoreliminatetheneedforhipreplacementbytreatingthis…  相似文献
3.
肝癌中高表达的新基因LAPTM4B对细胞增殖及成瘤性的影响   总被引:12,自引:2,他引:10  
目的:研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响,探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法:构建真核表达质粒pcDNA3-TM4B,利用脂质体稳定转染LAPTM4B cDNA至NIH3T3细胞中,用RT~PCR、Northem和Western杂交法筛选和鉴定转染后LAPTM4B基因高表达的单克隆细胞株,研究其与细胞增殖相关的生物学特征的变化。结果:与转染空载体的对照组相比,转染了LAPTM4B cDNA的NIH3T3细胞表面发生明显变化,微绒毛的数量和长度增加,多分枝且缠绕成团。转染细胞在纤黏连蛋白、人工基膜和层黏连蛋白基质上的黏附/铺展能力增强。生长曲线显示转染细胞的生长速率增高。流式细胞仪检测显示转染细胞的S期细胞数比未转染细胞显著增多,而G0-G1期细胞数减少。Western杂交显示Cyclin E蛋白在转染细胞中的表达显著增加。转染细胞对血清的依赖性下降并具有成瘤性。结论:LAPTM4B基因能影响细胞增殖的调节,促进NIH3T3细胞的增殖,并使NIH3T3细胞具有成瘤性,在肿瘤发生过程中具有重要的作用。  相似文献
4.
VEGF165表达载体的构建及其对人胃癌生长的作用   总被引:12,自引:6,他引:6  
目的构建血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF165)真核表达载体,研究其对胃癌生成的作用. 方法用DNA重组方法,将编码VEGF165的全长cDNA克隆于pcDNA3载体中,构建VEGF165 mRNA真核表达载体;用阳性脂质体介导的基因转染技术,将重组体转入人胃癌细胞(SGC-7901)省系;观察转染细胞的细胞周期、增殖能力及致瘤生长情况等生物学指标. 结果斑点杂交、间接免疫荧光等分析显示,正义VEGF基因转染技术可使VEGF的表达得到明显地加强. 与未转染细胞相比,转染细胞的G2/M期细胞增加(0.44)而S期细胞减少(0.17),克隆形成率(9.0%)明显高于未转染细胞(4.0%). 瘤细胞接种裸鼠后33 d,过表达VEGF人胃癌细胞所致的移植瘤体积(2351±638) mm3明显大于未转染细胞所致的移植瘤体积(1534±363) mm3. 结论 VEGF可以通过加强肿瘤组织血管生成而促进肿瘤的生长,另外,VEGF的表达可能与细胞增殖能力有关.  相似文献
5.
重建端粒酶活性延长ptsA58H质粒转染的人胚肌腱细胞寿命   总被引:12,自引:0,他引:12  
Xie HQ  Qu Y  Li XQ  Qin TW  Yang ZM 《中国医学科学院学报》2002,24(3):276-280,I002
目的 探讨以重建细胞端粒酶活性,达到延长经ptsA58H质粒转化的人胚肌腱细胞系(THETC)可行性。方法 构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)cDNA的质粒pGRN145,体外转染THEC;通过形态学观察、平板克隆形成率检测、软琼脂培养、不同培养条件下细胞生长曲线的测定,免疫组化法染色分析胶原分泌类型,hTERT mRNA表达及端粒重复序列扩增-PCR法检测细胞端粒酶活性等,对转染前后的细胞生物学特性进行比较。结果 经pGRN145质粒体外转染的THETC(telT)有端粒酶活性表达,并继续保持旺盛的增殖能力,寿命延长。telT保持原有的温度依赖性及血清营养依赖性生长的特点,并正常分泌Ⅰ型胶原,无恶性转化趋向。结论 重建端粒酶活性进行延长THETC寿命,为建立组织工程标准细胞系提供了新的实验手段。  相似文献
6.
重组质粒电穿孔转染条件探讨   总被引:11,自引:0,他引:11  
目的:为优化电穿孔转染质粒的条件,提高转染率。方法:以不同条件用电穿孔方法将重组质粒PLXSN-S转入p815、pA317、HepG2、EL4等真核细胞,探讨电压,电容及电转缓冲液温度对转染率的影响。结果(1)低电压(200~300V),高电容(900~1000uF)能高效转染实验所用真核细胞;(2)冰浴可提高转染率;(3)电击时间以15~30ms较合适。结论:电穿孔是一种高效的基因转染方法,通过优化其条件,可以提高转染率。  相似文献
7.
生长抑素受体2基因转染抑制胰腺肿瘤细胞生长机制的探讨   总被引:11,自引:0,他引:11  
目的探讨生长抑素受体2(SSTR2)基因转染抑制体内胰腺肿瘤生长的效果及其机制.方法利用lipofectAMINE将人类SSTR2全长 cDNA转染导入胰腺癌细胞株PC-3中,G418筛选出阳性克隆;免疫组织化学SABC法和RT-PCR检测生长抑素受体2的稳定表达.分别将表达生长抑素受体2的PC-3细胞 (实验组) 和空载体对照组及阴性对照组的PC-3细胞异种移植到无胸腺小鼠体内.TUNEL法测定这些细胞形成的胰腺肿瘤细胞凋亡指数(AI);免疫组织化学SP法测定凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,以及肿瘤微血管密度(MVD).另外,比较3组裸鼠之间胰腺肿瘤的大小和重量.结果实验组胰腺肿瘤细胞AI(3.39%±0.84%)显著高于空载体对照组(0.69%±0.08%)和阴性对照组(0.68%±0.09%)(P<0.05).与空载体对照组和阴性对照组相比,实验组Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白的表达则显著升高(P<0.05);实验组MVD(6.3±1.7)显著低于空载体对照组(12.6±1.7)和阴性对照组(13.5±1.9)(P<0.05).另外,实验组胰腺肿瘤的大小和重量也显著低于空载体对照组和阴性对照组(P<0.05).空载体对照组与阴性对照组之间未观测到任何有差异的指标(P>0.05).结论大多数人胰腺癌细胞中缺失SSTR2基因,生长抑素受体2在胰腺癌细胞中的再表达能诱导肿瘤凋亡,抑制肿瘤新生血管形成,最终明显抑制胰腺肿瘤的生长,而凋亡可能通过Bcl-2蛋白的下调及Bax蛋白的上调来调节.  相似文献
8.
抑癌基因p27对肾癌细胞系GRC-1生长的抑制作用   总被引:10,自引:6,他引:4  
目的:探讨p27基因对肾癌GRC-1细胞系生长的抑制作用,为肾癌发生机制的研究和基因治疗提供理论依据。方法 采用基因转染技术,将p27 cDNA转染到肾癌GRC-1细胞系中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响。结果 转染p27基因的肾癌细胞生长受到抑制,其在软琼脂上克隆形成能力降低了大约4倍。对细胞周期分析表明,处在G0-G1期的细胞由32.2%增加到66.9%,经Dot blot和Western blot杂交证实,p27 mRNA表达有明显差异(P<0.01),p27的蛋白表达量有明显差异(P<0.01),说明p27蛋白具有生长抑制功能,其作用点为G1-S。结论 提高肾癌细胞中p27的表达,能抑制肿瘤细胞的生长,导入p27基因是一种治疗肾癌的新途径。  相似文献
9.
10.
Bax蛋白稳定高表达肝癌细胞的建立及其凋亡   总被引:8,自引:4,他引:4  
目的 建立稳定高表达 Bax蛋白的肝癌细胞 .方法 用脂质体介导的基因转染法分别将含人 bax c DNA的p BK- bax和 p BK- CMV空载体质粒导入人肝癌细胞系 HCC-92 0 4细胞中 .经 G- 4 18筛选获得细胞克隆 .ABC法和图像定量分析检测 Bax蛋白在细胞中的表达情况 .HE染色观察细胞形态学变化 .TU NEL 法检测细胞凋亡发生情况 .结果 转染后用 G- 4 18筛选 2 wk,获得了细胞克隆 .转染 p BK- bax细胞的 Bax蛋白表达强度明显强于转染 p BK- CMV或未转染的 HCC- 92 0 4细胞 (P<0 .0 5 ) ,而转染 p BK- CMV的细胞与未转染的 HCC- 92 0 4细胞的 Bax蛋白表达强度未见明显差异 .p BK- bax转染的细胞有的可见细胞固缩、变圆、浓染和“出泡”等凋亡形态学变化 ,并且其 TU NEL 指数明显高于转染 p BK-CMV或未转染的 HCC- 92 0 4细胞 (P<0 .0 5 ) .结论 获得了稳定高表达 Bax蛋白的肝癌细胞 .bax基因转染的 HCC-92 0 4细胞凋亡率明显增高  相似文献
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