Eotaxin和CCR3在哮喘豚鼠肺和骨髓组织的表达及调控

目的:通过观察哮喘豚鼠肺和骨髓组织Eotaxin/CCR3表达的变化及糖皮质激素对其影响,探讨哮喘及激素干预的可能机制。方法:用卵白蛋白(OVA)致敏法制备豚鼠哮喘模型,分为正常对照组、哮喘组和激素干预(治疗组)组,瑞氏染色计数骨髓涂片和外周血涂片中白细胞比例,免疫组织化学技术检测骨髓中CCR3的表达;制备豚鼠肺组织病理标本,苏木精-伊红染色,原位分子杂交技术检测肺组织中Eotaxin mRNA,免疫组织化学技术检测Eotaxin在肺组织中的表达。结果:哮喘组骨髓涂片及外周血涂片中嗜酸粒细胞(EOS)比例显著高于对照组及治疗组(P<0.01);与对照组比较,哮喘组肺组织中Eotaxin阳性细胞数与Eotaxin mRNA表达明显增强(P<0.01),且两者呈正相关性(r=0.804,P<0.01)。哮喘组肺组织Eotaxin的表达与EOS的数量呈显著正相关(r=0.795,P<0.01)。哮喘组骨髓涂片中CCR3阳性细胞比例显著高于对照组及治疗组(P<0.01),哮喘组骨髓涂片中CCR3阳性细胞比例和外周血EOS比例呈显著正相关(r=0.736,P<0.05),治疗组与哮喘组比较骨髓中CCR3阳性细胞的比例有显著性下降(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05)。结论:哮喘豚鼠肺组织中Eotaxin和骨髓CCR3表达增强,为EOS从骨髓快速募集到肺组织提供了可能,激素通过下调肺组织Eotaxin及骨髓CCR3的表达,发挥抗EOS性气道炎症的作用。     

儿童哮喘患者血清Eotaxin、ECP的测定及其临床意义

目的 探讨嗜酸粒细胞趋化酞（Eotaxin）、嗜酸粒细胞阳离子蛋白（ECP）在儿童支气管哮喘发病机制中的作用。并评价其反映哮喘气道炎症的临床价值。方法 收集23例哮喘急性发作患者、22例哮喘缓解期患者及17名健康儿童的外周血标本。用ELISA法测定血清Eotaxin的水平。以Pharmacia CAP系统检测血清中ECP的含量。结果 哮喘急性发作患儿血清中Eotaxin、ECP水平明显高于缓解期患儿和健康对照组，Eotaxin、ECP水平的升高程度与病情严重程度相关，且两者相互之间呈正相关。结论 Eotaxin在哮喘的发病过程中对气道的嗜酸粒细胞炎症有影响作用。ECP可作为支气管哮喘气道炎症发生发展的重要指标之一。动态监测血清Eotaxin、ECP的变化。可以较好地反映气道嗜酸粒细胞炎症的反应过程。     

The effect of pharmacological PI3Kγ inhibitor on eotaxin-induced human eosinophil functions

BackgroundAsthma is characterized by chronic inflammation caused by activation of immune cells including Th2 lymphocytes and eosinophils. Phosphoinositide 3-kinase (PI3K) γ deficient asthmatic mice did not develop lung eosinophilia, although the detailed mechanisms are not well known. A CC chemokine eotaxin (CCL11) plays a prominent role in developing eosinophilic inflammation through CCR3. In this study, we tested the roles of PI3Kγ in eotaxin-induced eosinophil functions using a pharmacological inhibitor.MethodHuman peripheral blood eosinophils were isolated by CD16-negative selection method. The effect of AS605240, synthetic PI3Kγ inhibitor on eotaxin-induced adhesion, chemotaxis, and degranulation were studied using intracellular adhesion molecule-1 (ICAM-1)-coated plates, Boyden chamber system, ELISA for eosinophil-derived neurotoxin (EDN) levels in the culture supernatant, respectively. CCR3 expression levels and extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) phosphorylation were assessed by flowcytometry. Involvement of PI3Kγ in spontaneous apoptosis was studied using flowcytometry.ResultsAlthough AS605240 did not affect the eosinophil spontaneous apoptosis, eotaxin-induced chemotaxis, adhesion to ICAM-1 coated plate, and EDN release were inhibited by AS605240. AS605240 also inhibited the eotaxin-induced ERK1/2 phosphorylation without down-regulation of surface CCR3 expression.ConclusionThese results indicate that PI3Kγ inhibitor attenuates eotaxin-induced eosinophil functions by suppressing the downstream signaling of CCR3 without significant cytotoxicity. PI3Kγ plays an important role in the development of eosinophilic inflammation and blockade of PI3Kγ might be a therapeutic strategy for treatment of eosinophil-related diseases including asthma.     

联合应用重组可溶性IL-13受体α2及可溶性IL-5受体对支气管哮喘小鼠BALF嗜酸粒细胞凋亡及Eotaxin的影响

目的 联合应用重组可溶性IL-13受体α2(sIL-13Rα2)及重组可溶性IL-5受体(sIL-5R)治疗支气管哮喘(简称哮喘)小鼠模型,观察对支气管肺泡灌洗液(BALF)嗜酸粒细胞(EOS)凋亡率以及嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)水平的影响并探讨其相关机制.方法 将50只BALB/c小鼠随机分成5组:正常对照组、哮喘组、sIL-13Rα2治疗组、sIL-5R治疗组及联合治疗组.鸡卵白蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型.sIL-13Rα2治疗组、sIL-5R治疗组及联合治疗组每次激发前30 min分别腹腔注射sIL -13Rα2100 μg、sIL-5R 100 μg及sIL-13Rα2、sIL-5R各100 μg干预,正常对照组及哮喘组生理盐水代替.应用流式细胞术(FCM)检测各组BALF中EOS凋亡率,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定Eotaxin水平.结果 ①与正常对照组比较,哮喘组BALF中EOS数目百分比、Eotaxin水平均显著升高(P值均＜0.01),EOS凋亡率明显下降(P＜0.01).②与哮喘组比较,sIL-13Rα2治疗组、sIL-5R治疗组及联合治疗组BALF中EOS数目百分比及Eotaxin水平均明显降低(P值均＜0.01),EOS凋亡率明显增高(P＜0.05).③与单独治疗组比较,联合治疗组效果更佳(P＜0.05).结论 联合应用sIL-13Rα2及sIL-5R能够明显增加哮喘小鼠EOS凋亡,明显降低Eotaxin水平,可明显减少EOS肺部浸润,改善气道炎症,较单用更具有临床应用价值.     

SB328437干预小鼠变应性鼻炎模型的实验研究

目的探讨趋化因子受体3(CCR3)拮抗剂SB328437在小鼠变应性鼻炎模型中的防治作用。方法将30只6～8周BALB/c小鼠随机分为变应性鼻炎组(A组)、SB328437治疗组(B组)和正常对照组(C组),每组10只。以卵清白蛋白(OVA)致敏建立变应性鼻炎模型,B组每次激发前0.5h以SB328437 0.8 mL腹壁皮下注射,10μL滴鼻。比较各组小鼠变应性鼻炎症状评分、鼻黏膜嗜酸性粒细胞(EOS)计数、血清IgE含量以及鼻黏膜CCR3荧光强度。结果A、B、C组的症状评分分别为(7.6±1.9)、(0.7±0.6)和(0.5±0.3)分,A组与B、C组的差异均有统计学意义(P值均<0.01),B组与C组的差异无统计学意义(P>0.05)。A、B、C组的EOS计数分别为7.8±1.8、1.6±0.9和0.5±0.3,A组与B、C组的差异均有统计学意义(P值均<0.01),B组与C组的差异无统计学意义(P>0.05)。A、B、C组血清总IgE分别为(120.59±7.92)、(71.77±6.54)和(18.68±4.76)ng/mL,3组间的差异有统计学意义(P<0.01)。B组鼻黏膜CCR3荧光强度低于A组。结论SB328437可抑制小鼠变应性鼻炎,有可能成为变应性鼻炎免疫治疗的一种新方法。     

Eotaxin突变体的构建及表达

目的 获得人嗜酸粒细胞趋化因子Eotaxin N末端突变体并构建其原核表达载体.方法 用点突变的方法,在PT-Eotaxin的基础上用Met替代(单个)Eotaxin N-端肽氨基酸残基,获得突变体Met-Eotaxin,使用定向克隆技术将Met-Eotaxin克隆到原核表达载体PET30a 上,获得其表达载体.结果 获得了8个新的Eotaxin N-端突变体Met-Eotaxin及其原核表达载体.结论 Eotaxin N-端突变体Met-Eotaxin及其原核表达载体的构建,为突变体表达和生物学活性检测,筛选CCR3拮抗剂奠定了基础.     

肺吸虫病患儿血清Eotaxin和IL-5水平测定及其临床意义

目的　探讨肺吸虫病患儿血清中嗜酸性粒细胞特异性趋化因子 (Eotaxin)、IL - 5水平与发病及治疗效果之间的关系。方法　采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法检测肺吸虫病患儿治疗前后及正常人群血清中的Eotaxin、IL - 5水平及嗜酸性粒细胞 (EOS)计数情况。结果　治疗前肺吸虫病患儿外周血Eotaxin、IL - 5水平及EOS计数均高于正常对照组 ,差异有显著性 (P均 <0 .0 0 1 ) ;随着治疗的深入 ,外周血中的IL - 5水平显著降低 ,每个治疗疗程结束后IL - 5水平与治疗前相比差异有统计学意义 (P分别 <0 .0 5 ,<0 .0 1 ,<0 .0 0 1 ) ;治疗 3周后观察 ,肺吸虫病组与正常对照组间IL - 5水平已无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ;而治疗前后外周血Eotaxin水平及EOS计数经统计学处理无显著差异 (P均 >0 .0 5 )。肺吸虫病患儿血清中Eotaxin水平与EOS计数间存在正相关(r=0 .4 2 5 ,P <0 .0 0 1 ) ,而IL - 5水平与EOS计数间无相关性 (r=0 .0 33,P >0 .0 5 )。结论　血清IL- 5水平可以作为判断肺吸虫病患者发病及疗效判定的指标 ,结合肺吸虫抗体可对疾病的状况作出更为准确的评估。     

致敏血清诱导大鼠气道平滑肌细胞嗜酸粒细胞趋化因子的表达及机制探讨

目的观察气道平滑肌细胞经哮喘致敏血清刺激后嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）的表达变化,并探讨其可能的机制。方法贴壁法体外培养大鼠气道平滑肌细胞。建立大鼠哮喘模型,采血收集致敏血清。用致敏血清刺激体外培养的气道平滑肌细胞,或同时予以致敏血清和地塞米松干预。采用酶联免疫吸附法测定培养液上清中Eotaxin水平,放射免疫法测定细胞内环磷酸腺苷（cAMP）表达,逆转录聚合酶链反应半定量检测细胞中Eotaxin mRNA表达。结果致敏血清干预后,细胞培养上清Eotaxin水平和细胞内Eotaxin mRNA表达均较正常对照组显著升高[（107.09±7.12）ng/L比（0.63±0.56）ng/L,P〈0.05;1.39±0.04比0.05±0.01,P〈0.05],细胞内cAMP表达显著降低[（17.58±3.62）ng/L比（32.39±3.36）ng/L,P〈0.05]。地塞米松与致敏血清同时干预后,上清中Eotaxin水平[（64.18±4.04）ng/L]和胞内Eotaxin mRNA（0.77±0.19）表达较哮喘组显著降低,细胞内cAMP表达显著升高[（58.99±5.94）ng/L]（P〈0.05）。上清Eotaxin水平与胞内cAMP水平呈负相关（r=-0.788,P〈0.01）。结论气道平滑肌细胞在致敏状态下Eotaxin基因和蛋白表达均显著增强,可能作为炎性自分泌细胞分泌炎症因子,通过cAMP信号途径参与哮喘的发生。     

姜黄素对哮喘大鼠IL-5、Eotaxin 水平及NF-κB表达的影响

目的 探讨姜黄素对支气管哮喘（简称哮喘）大鼠血清、支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-5 及肺组织中 Eotaxin、NF-κB表达的影响.方法 将36只大鼠随机分为正常对照组、哮喘组、姜黄素组,用卵白蛋白（OVA）制备哮喘大鼠模型,正常对照组用0.9%氯化钠溶液代替OVA进行致敏和激发.以ELISA法检测各组大鼠血清及BALF中IL-5的浓度以及计数BALF中嗜酸细胞（EOS）的绝对值及百分比,同时以免疫组化方法检测Eotaxin、NF-κB等在肺组织中的表达.结果 血清及BALF中IL-5浓度的改变与NF-κBp65、Eotaxin蛋白表达的改变：哮喘组及姜黄素组均显著高于正常对照组（P＜0.01）,姜黄素组显著低于哮喘组（P＜0.01）.肺组织细胞NF-κB p65的表达与EOS绝对计数、IL-5的表达及Eotaxin的表达均呈显著正相关（r=0.928、0.905、0.850,均P＜0.01）.结论 姜黄素能抑制NF-κB的活性,通过抑制NF-κB向核内转移与DNA的结合而减少IL-5及Eotaxin的合成,从而发挥抗哮喘作用.     

血清Eotaxin的变化在毛细支气管炎和哮喘病中的作用和意义

目的探讨嗜酸性粒细胞超化因子（Eotaxin）的血清表达变化在毛细支气管炎和哮喘病中的作用和意义。方法随机将80例患儿分为毛细支气管炎组（毛支组）40例（其中单发组20例及多发组20例）,哮喘组40例,另选择正常健康儿童20例作为对照组。以上各组均采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）测定其血清Eotaxin水平,并进行对比分析。结果毛支组、哮喘组急性期血清Eotaxin水平高于对照组（P〈0．01）;在急性发作期,毛支单发组血清Eotaxin水平明显低于哮喘组（P〈0．01）,而毛支多发组与哮喘组比较,差异无显著性（P〉0．05）。毛支单发组在缓解期的血清Eotaxin水平低于哮喘组（P〈0．01）,与对照组水平接近且差异无显著性（P〉0．05）;毛支多发组缓解期Eotaxin值与哮喘组比较,差异无显著性（P〉0．05）。结论Eotaxin参与毛细支气管炎和哮喘病的病理过程,随着喘息发作的频率表达增加,测定其血清Eotaxin浓度可能将作为预测毛细支气管炎发展成哮喘的高危因素之一。