Boule基因在小鼠精子发生过程中的动态表达

目的:研究雄性不育相关基因Boule在小鼠出生后首个精子发生波中的动态表达,探讨Boule在精子发生过程中的调控作用。方法:运用免疫印迹法分析BOULE蛋白在多组织中的表达情况。运用实时荧光定量、免疫组织化学和免疫荧光技术检测Boule m RNA和BOULE蛋白在雄性小鼠出生后首个精子发生波各个时间点中的表达。结果:1免疫印迹法显示BOULE蛋白在睾丸中特异性高表达,在出生后16 d睾丸可被检测到,并在随后的发育中睾丸和成年睾丸持续表达;2实时荧光定量方法证实Boule m RNA在雄鼠出生后14 d睾丸中可被检测到,20 d呈现表达高峰;3免疫组织化学显示在精母细胞及圆形精子细胞胞质中存在BOULE蛋白阳性信号。结论:Boule在精子发生过程中的表达是在发育水平精密调控的,在粗线期精母细胞和圆形精子细胞阶段的特异表达提示Boule可能在精母细胞进程和圆形精子细胞中发挥作用。     

橄榄油对新生期双酚A暴露后青春期雄性小鼠生殖毒性的拮抗作用

目的研究橄榄油对新生期双酚A(bisphenol A,BPA)暴露后青春期雄性小鼠生殖毒性的拮抗作用。方法将32只清洁级新生ICR雄性小鼠随机分为4组,分别为对照(玉米油)组、橄榄油组、BPA(100μg/kg,玉米油稀释,前期实验中能明显引起精母细胞减数分裂阻滞)组、橄榄油+BPA(100μg/kg)组,每组8只。自出生第一天(PND 1)至PND 21(断乳),仔鼠每天进行颈背部皮下注射染毒,染毒容量为4μl/g,每天1次,连续染毒至断乳(PND 21)。PND 30,测定睾丸曲细精管直径、生精上皮厚度、管腔直径以及睾丸组织中Boule mRNA和蛋白的表达水平。结果与对照组相比,BPA组小鼠睾丸曲细精管直径和生精上皮厚度均显著下降,曲细精管管腔直径显著上升,差异均有统计学意义(P0.05);虽然橄榄油+BPA组与对照组相比仔鼠曲细精管直径和生精上皮厚度也有明显下降(P0.05),但与BPA组相比,曲细精管直径和生精上皮厚度均显著上升(P0.05),曲细精管管腔直径显著下降(P0.05)。与对照组相比,BPA组小鼠睾丸组织中Boule蛋白的表达下降,差异均有统计学意义(P0.05)。橄榄油+BPA组小鼠睾丸组织中Boule蛋白的表达水平高于BPA组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,BPA组和橄榄油+BPA组小鼠睾丸组织中Boule mRNA的表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05)。但橄榄油+BPA组小鼠睾丸组织中Boule mRNA的表达水平高于BPA组,差异有统计学意义(P0.05)。结论橄榄油对BPA所致雄性小鼠生殖毒性及Boule表达下降有一定的拮抗作用。     

小鼠Boule蛋白与Crem3′UTR结合并调节其表达

目的研究小鼠Boule蛋白与精子成熟相关基因Crem之间的相互作用,揭示Boule蛋白在精子发生过程中所起的作用。方法构建pGEX-Boule表达载体,将表达载体转化宿主菌(BL21)感受态细胞,诱导纯化出Boule蛋白,应用RT-PCR和凝胶滞后实验(EMSA)分析与Boule蛋白结合的mRNA。结果表达载体pGEX-Boule构建成功,纯化出GST-Boule融合蛋白,RT-PCR和EMSA实验证明Boule蛋白能够结合Crem3′UTR。结论 Boule蛋白能够结合Crem3′UTR,可能通过调控Crem蛋白的表达作用于精子发生过程。