何首乌等位基因特异性PCR鉴别方法研究

目的建立一种快速鉴别何首乌真伪的方法。方法通过何首乌及其混伪品的psb A-trn H基因序列,寻找SNP位点并设计特异性引物,对来自于不同产地的何首乌及其3个同属混伪品进行PCR扩增,优化反应体系条件,并对此方法进行考察。结果建立了何首乌特异性PCR的方法,在退火温度48℃、循环次数30时仅有何首乌能扩增得到191 bp的特异性条带,伪品则无。结论等位基因特异性PCR鉴别何首乌真伪方法简单、可靠。     

The Ethanol Extract from Lonicera japonica Thunb. Regresses Nonalcoholic Steatohepatitis in a Methionine- and Choline-Deficient Diet-Fed Animal Model

Nonalcoholic steatohepatitis (NASH) is characterized as fat accumulation in the hepatic tissue associated with various degrees of inflammation and progressive fibrosis. The potent anti-inflammatory and ethnopharmacological properties of Lonicera japonica Thunb. (Caprifoliaceae) make it an excellent source of novel medicinal targets for the treatment of NASH. The aim of the study was to investigate the effects of L. japonica ethanol extract (LJEE) on NASH in mice. C57BL/6J mice were fed with methionine-choline-deficient diet (MCDD) for eight weeks to promote the development of NASH. After development of the model, the mice were administered LJEE once daily via oral gavage at doses of 100, 200, or 300 mg/kg for another four weeks. Simultaneous treatments with LJEE (300 mg/kg/day) resulted in pronounced improvements in liver steatosis, ballooning degeneration, and inflammation. LJEE prevented MCDD-induced plasma level increases in aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase. LJEE significantly reduced hepatic malondialdehyde level and ameliorated hepatic inflammation and fibrosis in MCDD-fed mice, which were associated with down-regulation of cytochrome P450 2E1 suppression of multiple proinflammatory and profibrotic genes. LJEE can prevent hepatic steatosis by reducing hepatic peroxisome acyl-CoA:diacylglycerol acyltransferase 2 expression, as well as by inducing proliferator-activated receptor α expression. In addition, the LJEE treatments caused significant reduction in the phosphorylated form of Jun N-terminal kinase along with an increase in the phosphorylated level of extra cellular signal-regulated kinase 1/2. Our study demonstrated the protective role of LJEE in ameliorating nutritional steatohepatitis.     

赤芍的抑菌作用及其防治慢性牙周炎的机制研究

目的 研究赤芍提取物对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.g）、具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum，F.n）和伴放线聚集杆菌（Actinobacillus Actinomycetes，A.a）的抑菌作用，并通过网络药理学方法分析赤芍防治慢性牙周炎（chronic periodontitis，CP）的潜在分子机制和药理活性。方法 采用倍比稀释法测定赤芍提取物对3种牙周致病菌（P.g、F.n、A.a）的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）及最低杀菌浓度（minimal bactericidal concentration，MBC）。借助TCMSP数据库获取赤芍化学成分及作用靶点，通过Genecards等数据库获取CP疾病靶点，韦恩分析取交集。利用Cytoscape 3.7.2软件构建赤芍防治CP的“成分-靶点-疾病”网络，采用STRING数据库构建蛋白互作网络（Protein protein interaction network，PPI network），并进行基因本体（Gene Ontology，GO）和京都基因和基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）富集分析。结果 赤芍提取物对P.g、F.n、A.a的MIC分别为2.0、4.0、4.0 g/L，MBC分别为4.0、8.0、8.0 g/L。分析获得赤芍活性成分29个，CP疾病靶点2 132个，交集靶点89个。赤芍治疗CP的主要活性成分有黄芩苷、鞣花酸等，关键靶点包括白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）等。GO富集分析得到蛋白质异构化活性等126个GO条目，KEGG富集分析得到丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase，MAPK）等110条通路。结论 赤芍提取物对3种牙周致病菌均有不同程度的抑菌作用，初步阐述了赤芍的主要成分、作用靶点和相关通路在防治CP中具有重要的研究价值，为进一步深入临床研究提供实验依据和理论支持。     

基于多指标的半夏产地加工去皮前加工工艺研究

目的研究半夏Pinelliae Rhizoma产地加工去皮前的处理方法及工艺参数,为保证半夏药材质量提供关键的技术参数。方法分别采用"自然发汗""拌石灰粉""拌石灰水"3种方法处理,在各法处理第2、4、6、8天取样、去皮。以样品外观性状、叶绿素含量、去皮率、得率、浸出物和琥珀酸含量为指标进行综合评价。结果以样品性状及叶绿素含量为指标评价时,半夏质量以拌石灰水法为最佳,其次为拌石灰粉;以样品去皮率、得率及浸出物和琥珀酸含量为评价指标时,以拌石灰粉处理4 d的样品较好。按总评归一法综合评分,确定拌石灰粉处理4 d为最佳处理方法。结论半夏产地加工去皮前以拌石灰粉(每100 kg鲜半夏用石灰为10 kg)处理4 d为最佳,该方法简便,药材质量好。     

蛇足石杉HsCAO2基因的克隆、生物信息学分析及载体构建

目的 为筛选高活性的蛇足石杉铜胺氧化酶（copper-containing amine oxidase,CAO）,通过生物工程方法实现石杉碱甲（huperzine A,HupA）的合成、为加快新药创制进度提供理论依据。方法 基于蛇足石杉转录组测序得到的CAO序列片段,利用cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends,RACE）技术,扩增、拼接并验证获得该基因的全长cDNA序列,并将其命名为HsCAO2。结果 通过RACE技术得到HsCAO2的cDNA全长为2696 bp,CDS为2199 bp,编码732个氨基酸。氨基酸序列同源性比对发现,HsCAO2具有保守的氨基酸位点和Cu²⁺结合位点;进化树分析结果表明,HsCAO2与蛇足石杉中的另一个CAO（HsCAO1）同源性最高,达91.67%;蛋白质结构分析结果表明,HsCAO2也可能在生物体里以同源二聚体的形式存在。在此基础上,进一步分别构建了超表达载体pOX-HsCAO2和体外蛋白表达载体pET-28a （+）-HsCAO2。结论 HsCAO2很可能是蛇足石杉中的一个新的功能性CAO,且超表达载体和体外蛋白表达载体的成功构建为进一步研究其功能奠定了基础。     

苗药八爪金龙转录组测序与次生代谢产物合成相关基因的挖掘

目的对八爪金龙根进行转录组测序,挖掘次生代谢合成相关基因,探索八爪金龙次生代谢产物生物合成的分子基础。方法采用IlluminaHi Seq4000高通量测序技术,对八爪金龙根进行转录组测序。使用Trinity软件对获得的Unigenes数据进行过滤组装,运用KEGG数据库对Unigenes进行注释。结果共获得52249条Unigenes,其中31391条被公共数据库成功注释,1507条Unigenes被注释到次生代谢产物合成。通过对转录组数据深入挖掘发现,参与八爪金龙苯丙素生物合成的Unigenes共有126条,参与萜类化合物骨架生物合成的Unigenes数量为73条,参与黄酮类化合物生物合成Unigenes有58条,参与次生代谢后修饰的Unigenes共有253条。筛选出9条Unigenes编码4个与八爪金龙香豆素生物合成的关键酶,23条Unigenes编码8个与黄酮生物合成的关键酶,39条Unigenes编码19个与萜类生物合成的关键酶,140条CYP450基因和113条UGT基因可能参与次生代谢物的修饰。微卫星识别软件(microsatellite identification tool,MISA)分析发现八爪金龙转录组包含17 400个简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)。结论通过高通量转录组测序,初步揭示了参与八爪金龙次生代谢产物合成相关的基因,为进一步研究八爪金龙次生代谢产物合成途径关键酶的功能及其调控机制奠定了基础。     

半夏全球生态适宜性分析与品质生态学研究

目的 通过分析全球范围内半夏生态适宜产区,对半夏合理生产布局开展科学规划。方法 采用药用植物全球产地生态适宜性区划信息系统（GMPGIS）,以半夏道地产区、野生分布区的标本采样点气候因子值和土壤类型为依据,通过生态相似性原理,分析得出半夏全球内最大生态相似度区域。结果 半夏为广布种,在全球范围内适宜生长的面积占全球陆地面积的13.84%,适宜生长地区主要包含北美洲中部、亚洲东部及欧洲中南部。生态适宜区的国家主要包括美国、中国、加拿大、巴西等;中国适宜半夏生长的省份包括云南、四川、广西、陕西、湖南、湖北、河北、贵州等。研究结果基本包含了目前半夏栽培产区及道地产地。结论 研究结果可为半夏全球范围种质资源保护、引种栽培及高品质半夏药材生产提供参考。     

Immunomodulatory Activity of the Glycoprotein Isolated from the Chinese Yam (Dioscorea opposita Thunb)

The yam (Dioscorea opposita Thunb) is a well‐known edible food and widely used as the traditional Chinese medicine. The present investigation was designed to evaluate the immunomodulatory activity of glycoprotein (DOT) from yam and explore its possible molecular mechanisms. Results showed that the DOT could improve the cell immunity, humoral immunity and phagocytic system function of the normal mice. The DOT could also increase the production of TNF‐α, interleukin‐6 and nitric oxide and enhance the pinocytosis function of macrophages. Furthermore, the DOT increased phosphor‐p38, JNK, ERK1/2 and nuclear factor kappa B (NF‐κB) p65 protein expression in peritoneal macrophages. Taken together, our data suggest that DOT could be used as a potential immunostimulant and exert its immunomodulatory activity via mitogen‐activated protein kinases and NF‐κB signal pathways. Copyright © 2017 John Wiley & Sons, Ltd.     

连翘的化学成分研究

目的对连翘Forsythia suspensa的化学成分进行研究。方法通过大孔吸附树脂、Sephadex LH-20、反相HPLC等多种色谱进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果从连翘的50%乙醇提取物中分离得到了13个化合物,分别鉴定为毛柳苷(1)、连翘酯苷E(2)、quinolacetic acid(3)、黄瑞烷酮(4)、千里光内酯(5)、cleroindicin C(6)、4-羟基-4-异丙基-1-环己烯甲酸(7)、oleuropeic acid(8)、rel-(1S,2S,4S)-trihydroxy-p-menthane(9)、壬二酸(10)、2-羟基-丁二酸-4-内酯(11)、glochidioboside(12)、(+)-异落叶松脂醇-9-O-β-D-葡萄糖苷(13)。结论化合物5~13为从连翘属中首次分离得到。     

基于中医药美白理论的白及研发思考

白及是传统美白方中的主要药物。从中医药美白理论、中医美白历史沿革、美白药理作用机制,以及白及"以白治黑"相关的化学成分、白及美白研究现状等多个角度,系统阐述了白及美白的传统理论基础和现代药理研究概况,并初步提出白及美白产业化研发思路。为中药白及美白产品开发和产业化提供思路和参考。