玻璃化冷冻人卵母细胞的临床应用：附一例成功分娩

人卵母细胞冷冻保存是女性生育力直接保存的一种方法。但由于卵母细胞自身生物学特性的影响,卵母细胞冷冻的妊娠率始终不高。本院采用玻璃化技术冷冻人卵母细胞2例,1例获得临床妊娠,目前已分娩。     

不同冷冻载体对小鼠成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响

目的:探讨玻璃化冷冻小鼠成熟减数第二次分裂中期(MⅡ期)卵母细胞的最佳冷冻载体及冷冻方法。方法:用乙二醇和蔗糖为玻璃化冷冻保护剂,将小鼠成熟MⅡ期卵母细胞分为冻融、暴露和对照组。冻融组分别采用普通麦管、封闭式拉细麦管(CPS)和开放式拉细麦管(OPS)作载体,采用玻璃化快速冷冻和快速复温的方法冻存小鼠成熟卵母细胞;暴露组卵母细胞仅暴露在冷冻和复苏液中,不进行冷冻;对照组卵母细胞不接触冷冻和复苏液。观察各组处理后卵子回收、受精、卵裂等情况。结果:冻融组普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞回收率分别为92.0%、92.3%和72.3%,OPS处理卵母细胞的回收率显著低于普通麦管和CPS处理的卵母细胞(P<0.001);普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞复苏存活率分别为43.5%、72.2%和76.5%,CPS和OPS处理卵母细胞的复苏存活率显著高于普通麦管组处理的卵母细胞(P<0.001)。冻融、暴露和对照组的卵裂率分别为38.6%、69.2%和73.5%,冻融组显著低于暴露和对照组(P<0.001)。结论:CPS法在玻璃化冷冻保存成熟的卵母细胞方面有价值。     

冷冻载体对扩张期囊胚解冻结局的影响

背景：囊胚的冷冻复苏对人类辅助生殖技术的发展具有重要意义,合适的冷冻载体可以降低冷冻毒性提高冷冻效率,是改善囊胚冷冻复苏结局的研究热点之一。目的：观察不同冷冻载体对昆明小鼠扩张期囊胚玻璃化冷冻解冻结局的影响。方法：以新鲜昆明小鼠扩张期囊胚作为对照组,随机选取同期小鼠胚进行玻璃化冷冻解冻,冷冻前使用激光仪行人工皱缩,使用玻璃化法进行冷冻和解冻,按实验载体不同分为冷冻环组、闭合拉细麦管组和自制麦管叶片组;冷冻环组和自制麦管叶片组投入液氮前与冷冻保护剂接触时间〈40s,40-60s和60-90s;解冻后囊胚使用胚胎囊期培养基添加10%血清替代品进行微滴培养。比较解冻后组间囊胚丢失率、囊胚复苏率和培养24h囊胚孵出率。结果与结论：相比闭合拉细麦管组,冷冻环组和自制麦管叶片组的囊胚丢失率降低,胚胎复苏率增高（P〈0.05）,各冷冻组复苏囊胚培养24h孵出率均低于对照组（P〈0.05）。使用冷冻环载体和自制麦管叶片载体冷冻解冻囊胚,投入液氮前与冷冻保护剂接触时间90s内不同时间胚胎复苏率和孵出率的比较差异无显著性意义。结果说明冷冻环载体和自制麦管叶片载体用于昆明小鼠扩张期囊胚玻璃化解冻复苏的效果较好。     

D3胚胎玻璃化冷冻两种操作方法的比较

目的:比较两种玻璃化冷冻方法。方法:分别采用传统方法和改良方法自制麦管玻璃化冷冻。结果:两组的复苏率、妊娠率及种植率比较差异均无统计学意义。结论:改良方法可避免胚胎直接接触液氮,为玻璃化冷冻的优选方法。     

应用两种麦管系统对小鼠囊胚的玻璃化冷冻

目的比较两种麦管系统对小鼠囊胚的玻璃化冷冻比较,以期建立一种有效的囊胚冷冻方法。方法分别应用开放麦管系统和传统麦管系统对小鼠扩张囊胚进行玻璃化冷冻,比较冷冻复苏以后囊胚的存活率和孵出率。结果应用开放麦管系统冷冻的小鼠囊胚复苏后的存活率(82.3%)显著高于应用传统麦管系统者(68.6%, P<0.01)。前者冷冻的小鼠囊胚复苏后的囊胚孵出率(70.3%),也明显高于应用传统麦管系统者(57.1%, P<0.05)。结论应用开放性麦管系统进行小鼠囊胚的玻璃化冷冻是一种行之有效的冷冻方法。     

封闭式麦管玻璃化冷冻法用于人早期胚胎冷冻效果观察

目的探讨封闭式麦管玻璃化法用于人早期胚胎（以下简称胚胎）冷冻的效果。方法将接受体外受精-胚胎移植（IVF—ET）患者移植后第3天的胚胎分别采用封闭式麦管玻璃化法（玻璃化组）及程序化慢速冷冻法（程序化组）冷冻,比较两组胚胎存活率、完全胚胎存活率、继续卵裂率及植入率、妊娠率和流产率等。结果玻璃化组的胚胎存活率、完全胚胎存活率、植入率明显高于程序化组,周期取消率明显低于程序化组（P均〈0．05）;继续卵裂率、临床妊娠率、流产率,两组比较均元显著性差异（P〉0．05）。结论封闭式麦管玻璃化法用于人早期胚胎冷冻可简化冷冻程序,更好地保存胚胎复苏后的发育潜能。     

睾丸精子和附睾精子冷冻保存研究

目的 探讨以0.25ml麦管为载体,Irvine为精子冷冻保护剂的方法在睾丸精子和附睾精子冷冻复苏中的应用.方法 收集2019年7月至2020年12月期间诊断性睾丸/附睾穿刺术后剩余的睾丸精子悬液样本10份和附睾精子悬液样本20份,以0.25ml麦管为载体,Irvine为精子冷冻保护剂进行冷冻复苏,评估冷冻复苏效果.结果 冷冻前10份睾丸精子悬液样本活动精子数目为5～8条/(200HP,40个视野).复苏后1份睾丸精子悬液样本活动精子数目为5条/(200HP,80个视野),5份睾丸精子悬液样本活动精子数目为3～4条/(200HP,80个视野),4份睾丸精子悬液样本活动精子数目为1～2条/(200HP,80个视野).冷冻前20份附睾精子悬液样本精子活动率为(13.65±9.06)％,复苏后精子活动率为(6.85±4.61)％,显著性下降(t=6.521,P<0.001),复苏率为(49.88±7.96)％.结论 以0.25ml麦管为载体,Irvine为精子冷冻保护剂的方法在睾丸精子和附睾精子冷冻复苏中有较好的复苏率,材料来源方便,冷冻复苏操作简便,储存空间小等优势适合实验室日常工作需要.     

冷冻载体对扩张期囊胚解冻结局的影响

背景:囊胚的冷冻复苏对人类辅助生殖技术的发展具有重要意义,合适的冷冻载体可以降低冷冻毒性提高冷冻效率,是改善囊胚冷冻复苏结局的研究热点之一。目的:观察不同冷冻载体对昆明小鼠扩张期囊胚玻璃化冷冻解冻结局的影响。方法:以新鲜昆明小鼠扩张期囊胚作为对照组,随机选取同期小鼠胚进行玻璃化冷冻解冻,冷冻前使用激光仪行人工皱缩,使用玻璃化法进行冷冻和解冻,按实验载体不同分为冷冻环组、闭合拉细麦管组和自制麦管叶片组;冷冻环组和自制麦管叶片组投入液氮前与冷冻保护剂接触时间<40s,40-60s和60-90s;解冻后囊胚使用胚胎囊期培养基添加10%血清替代品进行微滴培养。比较解冻后组间囊胚丢失率、囊胚复苏率和培养24h囊胚孵出率。结果与结论:相比闭合拉细麦管组,冷冻环组和自制麦管叶片组的囊胚丢失率降低,胚胎复苏率增高(P<0.05),各冷冻组复苏囊胚培养24h孵出率均低于对照组(P<0.05)。使用冷冻环载体和自制麦管叶片载体冷冻解冻囊胚,投入液氮前与冷冻保护剂接触时间90s内不同时间胚胎复苏率和孵出率的比较差异无显著性意义。结果说明冷冻环载体和自制麦管叶片载体用于昆明小鼠扩张期囊胚玻璃化解冻复苏的效果较好。     

常用实验动物带血管蒂全卵巢灌注及冷冻保存方法

目的 采用独创的已获专利授权的灌注针和灌注技术,对常用实验动物（成年兔、豚鼠和大鼠）的带血管蒂全卵巢进行灌注,研究可调节灌注针是否适用于不同体型动物全卵巢的灌注,同时采用经典的冷冻方案进行冷冻及解冻。 方法 分别取6只性成熟雌性中国大耳白兔、6只Dunkan Hartley系豚鼠、6只SD大鼠各12个带血管蒂全卵巢进行实验。 结果 计数兔、豚鼠、大鼠3种动物卵巢组织HE染色切片中形态正常的原始卵泡率,结果显示差异均无统计学意义（P＞0.05）;血管损伤主要在远卵巢端,3种动物近卵巢端的各组动脉、静脉均未见明显损伤。 结论 通过调节麦管针的粗细可用于灌注大小不同的动物卵巢,初步证实了相同的灌注压力（60 mmHg）和灌注速率(1 ml/min)同时适用于不同体积的兔、豚鼠和大鼠卵巢。