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1.
目的观察两种方法分离的人卵巢颗粒细胞(GCs)体外培养后的连续传代情况。方法选取行辅助生殖技术治疗的不孕患者,收集促排卵后穿刺取卵获得的卵泡液(FF),分别用密度梯度离心法和红细胞裂解法分离人GCs,进行体外培养、扩增及连续传代,并用免疫荧光法对原代及传代后GCs进行鉴定。结果红细胞裂解法获得的GCs数量较密度梯度离心法显著增多(P<0.05),密度梯度离心法分离的GCs的24 h贴壁率显著高于红细胞裂解法(P<0.05)。两种方法分离的GCs均在7 d出现短梭形改变,10 d左右开始退化。两种方法分离的原代GCs在第3~5天为快速增殖期,第7天细胞增殖达到顶峰,第10天左右细胞量下降,每个时间点密度梯度离心法处理的细胞量均显著高于红细胞裂解法(P<0.05);传代后细胞1~5 d为快速增殖期,7 d左右达顶峰,10 d左右下降,各时间点两种分离方法所获GCs传代培养的细胞量均无统计学差异(P>0.05)。两种方法分离的GCs均可进行连续传代,细胞形态无明显差异,且连续传代后的GCs仍表达卵泡刺激素受体(FSHR)。结论密度梯度离心法较红细胞裂解法可获得生长情况更为良好的原代GCs;两种分离方法所获GCs均可体外连续传代。  相似文献   
2.
目的: 体外原代培养人卵颗粒细胞,检测CuInS2/ZnS量子点的细胞毒性效应并分析其分子机制。方法: 采用透明质酸酶消化收集人超排卵外的颗粒细胞,进行体外原代培养,设立PBS对照组和低(1 μg/mL)、中(10 μg/mL)、高(100 μg/mL) CuInS2/ZnS量子点实验组,利用CCK-8法检测量子点处理后颗粒细胞活力的变化并计算半数抑制浓度(IC50);采用Annexin V/PI双染色法流式细胞术检测颗粒细胞凋亡情况;采用不同试剂盒分别检测性激素孕酮(P)和雌二醇(E2)的释放以及氧化应激相关指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)及谷胱甘肽还原酶(GSH)活性的变化。结果: 体外原代培养人卵颗粒细胞生长良好,在体外培养72 h后开始自发凋亡并黄素化。采用CuInS2/ZnS量子点处理后48 h 的IC50为66.72 μg/mL。与PBS对照组比较,高剂量量子点处理组明显抑制细胞活力(P<0.01),诱导细胞凋亡(P<0.01),增加颗粒细胞P和E2的释放(P<0.05或P<0.01),中、高剂量量子点处理后颗粒细胞中ROS水平显著增加(P<0.05或P<0.01),颗粒细胞内的MDA、T-AOC及T-SOD活性均显著降低(P<0.01),高剂量量子点作用后细胞内的GSH活性显著升高(P<0.01)。结论: 本研究成功进行了人卵颗粒细胞系的体外原代培养,发现10 μg/mL 剂量以上CuInS2/ZnS 量子点可以通过侵入颗粒细胞引起氧化损伤,促进细胞凋亡引发毒性效应,为CuInS2/ZnS量子点在临床应用中的生物安全性评估提供了有价值的信息。  相似文献   
3.
目的比较不同人卵巢颗粒细胞分离提纯方法的效果。方法收集体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者取卵后的卵泡液,分别采用密度梯度离心法、红细胞裂解法、密度梯度离心法+红细胞裂解法分离、提取黄素化颗粒细胞,比较3种方法获取的细胞数量、存活率、纯度以及生长、贴壁情况。结果密度梯度离心法获取的颗粒细胞数量最低,但体外培养生长状态良好且细胞贴壁状态最佳;红细胞裂解法获取的颗粒细胞数量均多于其他两种方法(P0.05),但细胞存活率低,体外培养生长状态欠佳、细胞贴壁差;卵泡刺激素受体(FSHR)细胞免疫组化及荧光鉴定显示3种方法获取的颗粒细胞纯度均90%。结论密度梯度离心法获取的细胞数目少,但生长状态及贴壁情况最佳,是分离提纯颗粒细胞较为理想的选择方法。  相似文献   
4.
目的探讨针灸联合活血祛痰膏方对PCOS患者卵巢早衰颗粒细胞STMN1和DENND1A基因表达的影响。方法选取2017年8月-2018年8月在襄阳市中医医院接受治疗的PCOS患者90例,按奇偶数字表随机分为两组,每组45例。A组予以活血祛痰膏方治疗,B组予以活血祛痰膏方联合针灸治疗。对比两组患者治疗前后STMN1、DENND1A表达情况,性激素水平,中医症候评分。结果治疗前,两组患者STMN1和DENND1A表达水平,血清卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、黄体酮(P)水平,中医症候评分比较差异均无统计学意义(均P <0. 05);治疗后,两组患者STMN1和DENND1A表达水平,血清FSH、E2、LH、P水平,中医症候评分比较差异均有统计学意义(均P<0. 05)。在两组中,治疗后患者STMN1和DENND1A表达水平,血清FSH、E2、LH、P水平,中医症候评分均低于治疗前(均P<0. 05)。结论 PCOS患者卵巢早衰颗粒细胞中可见STMN1、DENND1A高表达,活血祛痰膏方联合针灸治疗后,STMN1、DENND1A表达水平下降,患者性激素水平及中医症候评分随之改善。  相似文献   
5.
  目的  探讨多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)大鼠模型及肥胖PCOS大鼠模型卵巢组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)的表达,以及PCOS 发生的可能机制。  方法  SD大鼠30只,随机分为对照组、PCOS组及肥胖PCOS组,PCOS两组大鼠每日一次予脱氢表雄酮〔DHEA,60 mg/(kg·d)〕溶于0.2 mL注射用大豆油中皮下注射,共21 d,制备PCOS模型,肥胖PCOS模型组大鼠在DHEA制模基础上加入高脂饮食,每组大鼠各10只。造模前(0 d)和造模后第22天称体质量,取腹主动脉血检测血清睾酮(testosterone,T)水平,取大鼠卵巢组织,HE染色观察组织形态学改变,免疫组织化学染色和Western blot检测PGC-1ɑ蛋白表达。  结果   造模前3组大鼠体质量差异无统计学意义,造模后第22天,大鼠增加的体质量以及大鼠血清 T 质量浓度,均为肥胖PCOS组>PCOS组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。大鼠卵巢组织HE染色结果显示,对照组大鼠卵巢组织镜下可见不同发育时期的卵泡和少量黄体,颗粒细胞排列多为4~6层;PCOS组及肥胖PCOS组大鼠卵巢组织中未成熟的小卵泡数量明显增加,颗粒细胞1~3层排列、较松散,部分卵泡闭锁,肥胖PCOS组大鼠卵巢闭锁卵泡直径增大,颗粒细胞层数减少,卵母细胞消失等现象更明显。免疫组化染色结果显示,对照组大鼠卵巢组织PGC-1ɑ蛋白阳性表达主要分布于卵丘及颗粒细胞。从PGC-1ɑ蛋白在卵巢组织的表达平均灰度均值来看,PCOS组(0.53±0.06)和肥胖PCOS组(0.36±0.03)均低于对照组(0.75±0.03),差异有统计学意义(P<0.05),肥胖PCOS组PGC-1ɑ表达低于PCOS组(P<0.01)。Western blot检测结果与免疫组化染色结果一致。  结论  PGC-1ɑ表达降低与高脂环境下卵巢颗粒细胞损伤有关。PGC-1ɑ在卵巢卵泡的颗粒细胞中表达降低可能是PCOS发生发展的重要原因。  相似文献   
6.
目的观察去血清饥饿法对卵巢颗粒细胞自噬因子LC3和Beclin-1表达的影响。方法用去血清的培养液诱导处于对数生长期的颗粒细胞,0、4、12、24 h后用单丹磺酰戊二胺(MDC)荧光染色法检测自噬体的形成,反转录-聚合酶链反应(RT-PCT)和Western blot方法分别检测颗粒细胞微管相关蛋白1轻链3(MAPLC3)和Beclin-1 mRNA和蛋白的表达。结果随着去血清时间的延长,MDC阳性细胞数及自噬泡数量增多;4 h后LC3-Ⅱ及Beclin-1mRNA表达开始增加,且随着时间增加有增加趋势[LC3-Ⅱ:(0.21±0.02)、(0.45±0.12)、(0.60±0.05)、(0.74±0.03),P0.05;Beclin-1:(0.20±0.06)、(0.37±0.11)、(0.52±0.07)、(0.69±0.07),P0.05];4 h后蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,Beclin-1蛋白表达亦增加,且随时间增加有增加的趋势[LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ:(0.12±0.05)、(0.32±0.09)、(0.63±0.07)、(0.92±0.04),P0.01;Beclin-1:0,(61±0.01)、(0.83±0.11)、(1.09±0.05)、(1.35±0.10),P0.05]。结论去血清饥饿可诱导颗粒细胞自噬的发生,这可能与卵泡发育和闭锁的发生、发展有关。  相似文献   
7.
目的通过过氧化氢(H2O2)处理体外培养的小鼠原代颗粒细胞(mGC),探讨JAK2/STAT3信号通路在H2O2抑制mGC增殖中的作用。方法应用H2O2、JAK2抑制剂AG490(不同浓度、不同作用时间)处理mGC;用CCK-8、增殖细胞核抗原蛋白(PCNA)水平检测细胞增殖情况,RT-PCR检测JAK2mRNA水平,Western blot检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、Cyclin D1的蛋白表达水平。结果 H2O2与AG490均以剂量和时间依赖方式降低mGC活率。750μmol/L的H2O2处理mGC 24h明显降低细胞活率(P0.01),降低PCNA蛋白水平(P0.01),并下调JAK2mRNA和蛋白表达水平(P0.01);80μmol/L的JAK2抑制剂AG490可降低细胞活率(P0.01),且使细胞中的p-JAK2、JAK2、STAT3、p-STAT3、PCNA、Cyclin D1表达均下降(P0.05)。结论 H2O2抑制mGC增殖可能与JAK2/STAT3信号通路有关。  相似文献   
8.
9.
10.
目的 探讨白藜芦醇是否可以拮抗过氧化氢诱导的卵泡颗粒细胞氧化应激损伤。方法 收集体外受精/单精子卵泡浆内注射(IVF/ICSI)患者捡卵后卵泡液中的颗粒细胞并进行培养。将培养后的颗粒细胞分为4组:对照组,损伤模型组,10 μmol/L白藜芦醇组和50 μmol/L白藜芦醇组。采用CCK-8法测定细胞活性,硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量,水溶性四氮唑-1(WST-1)法测定超氧化物歧化酶(SOD)水平,竞争ELISA 法测定孕酮分泌量,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞仪测定细胞凋亡,Western blotting测定Bcl-2、Caspase-3和沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)蛋白表达。结果 与对照组比较,损伤模型组的细胞活性、SOD水平、孕酮分泌量和Bcl-2蛋白表达均明显降低,而MDA含量、细胞凋亡率和Caspase-3凋亡蛋白表达均明显增加(P<0.05)。与损伤模型组比较,10 μmol/L白藜芦醇组各项指标未显示出统计学差异;而50 μmol/L白藜芦醇组的细胞活性、SOD水平、孕酮分泌量和Bcl-2及SIRT1蛋白表达均明显升高,MDA含量、细胞凋亡率和Caspase-3凋亡蛋白表达均明显下降(P<0.05)。结论 50 μmol/L白藜芦醇可以通过增加SIRT1的活性,增强颗粒细胞的抗氧化及抗凋亡能力,改善颗粒细胞的功能。  相似文献   
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