小RNA 2’⁃O⁃甲基转移酶Henmt1在小鼠精子发生中的作用

目的：通过构建基因突变小鼠模型,研究小RNA 2’?O?甲基转移酶Henmt1在小鼠精子发生中的作用。方法：利用CRISPR/Cas9（clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR?associated protein 9）技术,构建Henmt1基因突变小鼠,通过计算机辅助精子分析、HE染色及免疫荧光检测等技术对小鼠表型进行分析。结果：成功构建Henmt1基因突变小鼠模型;生育力测试结果提示Henmt1基因突变雄鼠不育;Henmt1基因突变导致雄性小鼠精子发生阻滞;突变小鼠睾丸中逆转座子元件LINE1表达上调。结论：Henmt1对雄性小鼠精子发生有重要调控作用。     

苯甲酸雌二醇诱导不育小鼠睾丸中生精细胞增殖紊乱的研究

目的:探讨外源性雌激素苯甲酸雌二醇(EB)对诱导雄性不育小鼠中生精细胞增殖紊乱的影响。方法:60只雄性昆明小鼠随机分为3组,对照组肌肉注射150μl玉米油,EB处理组注射浓度分别为5、10 mg/kg的EB,隔天1次,持续4周。实验结束后取睾丸称其质量并计算睾丸指数;睾丸、附睾尾常规石蜡切片,HE染色;附睾尾制备精子悬液进行精子计数;免疫组化检测睾丸PCNA表达;qRT-PCR分析睾丸细胞周期蛋白A1、细胞周期蛋白B1、VASA、p53的表达变化;Western印迹检测p53及磷酸化p53蛋白表达。结果:与对照组相比,EB处理组小鼠睾丸指数显著下降[(0.56±0.09)%vs(0.43±0.08)%、(0.38±0.10)%,P0.05],精子悬液镜下观察未见精子,HE染色附睾管内未见精子;生精小管中精原细胞、初级精母细胞及支持细胞数量显著下降(P0.05)。免疫组化结果显示,与对照组相比,EB处理组生精小管中细胞PCNA阳性表达细胞数量显著下降(P0.05)。qRTPCR结果表明EB处理组PCNA、细胞周期蛋白A1、细胞周期蛋白B1、VASA mRNA表达与对照组相比显著下降(P0.05);p53表达随EB剂量升高而显著升高(P0.05)。Western印迹结果显示,与对照组相比,EB处理组p53及磷酸化p53蛋白表达水平显著升高,且存在剂量依赖效应,10 mg/kg组显著高于5 mg/kg组(P0.05)。结论:EB以剂量依赖的方式下调细胞周期相关因子表达抑制生精细胞的增殖,是导致雄性不育小鼠睾丸中生精细胞增殖紊乱的重要原因。     

外层致密纤维在Akap4基因缺陷致小鼠精子尾部多种形态异常中的作用

目的：探讨外层致密纤维(outer dense fobres，ODF)在Akap4基因缺陷引起小鼠精子尾部多种形态异常中 的作用。方法：通过基因编辑技术构建Akap4基因缺陷小鼠模型。实验分为2组：成年Akap4基因缺陷雄鼠为实验组 (n=7)，成年野生型雄鼠为对照组(n=7)，比较2组小鼠的体重和睾丸重量；采用计算机辅助精液分析(computer aided sperm analysis，CASA)检测精子活动力，改良巴氏染色(modifi ed pap staining)检测精子形态学，扫描及透射电镜观察精 子超微结构，免疫荧光检测精子尾部蛋白表达及定位，睾丸切片HE及PAS染色检测睾丸生精功能，透射电镜观察曲 精细管超微结构。结果： Akap4基因缺陷小鼠精子总活动力为8.81%，明显低于野生型小鼠(P<0.01)，且无正常形态精 子，尾部缩短与尾部卷曲比例达91.18%，明显高于野生型小鼠(P<0.01)，睾丸重量、睾丸生精功能、精子数量2组比 较差异无统计学意义(P>0.01)； Akap4基因缺陷精子的纤维鞘纵柱缺失，横肋柱结构部分残留，主段的3和8号ODF排 列紊乱，与ODF2蛋白定位结果相符；睾丸中精子纤维鞘发育障碍，无正常纤维鞘结构形成，但未见异常膨大的精子 尾部。结论：Akap4基因缺陷使纤维鞘横肋发育不良，纵肋的缺失引起3和8号ODF分离，“9+2”微管结构紊乱，使 主段管腔异常膨大，导致小鼠精子尾部多种形态异常。     

卫星搭载玉米雄性不育突变系的遗传稳定性研究

目的 通过卫星塔载玉米种子选育雄性不育突变体，定向培育成新不育系供生产应用。方法 利用卫星搭载飞行15d的川丹9号玉米种子返地种植后，选育出不育突变体，并通过直接杂交获得了不育系，结果 不育材料花粉败育彻底，不育性状表现稳定，呈现出由隐性单基因控制的核不育的遗传特点。结论 雄性不育突变体的出现与卫星搭载有关，为基因突变的结果。     

水稻线粒体基因组翻译产物与细胞质雄性不育性

引言 近年来,许多研究表明,植物细胞质雄性不育性与线粒体基因组存在某种关系。分析玉米、高粱、甜菜、小麦和烟草等作物的线粒体基因组翻译产物,发现不育细胞质与正常细胞质在蛋白质水平上存在差异。在水稻,有人对BT型雄性不育材料作了类似的研究,但我国应用最广泛的野败型雄性不育材料至今仍未见报道。     

大豆光敏不育系88-428的小孢子和花粉发育的细胞学观察

以普通栽种黄圆豆为对照,对作为保持系88-428的花粉发育全过程及其药壁组织的情况进行了系统的研究.结果表明：①可将这一过程划分为7个时期,即小孢子母细胞形成期、小孢子母细胞减数分裂期、单核早期、单核中期、单核晚期、二胞花粉早期、二胞花粉晚期;②作为保持系的88-428与黄圆豆相比,存有较高的败育率,表现为低不育.     

小鼠精子发生过程中雄激素受体对靶基因Septin7的表达调控

目的:探讨雄激素受体(AR)对睾丸Sertoli细胞中Septin 7基因表达的影响。方法:分别采用实时荧光定量PCR及Western blot,检测睾丸Sertoli细胞AR特异性敲除(S-AR-/y)和野生型小鼠(WT)睾丸Sertoli细胞中SEPTIN 7的表达,并观察雄激素对过表达AR的Sertoli细胞系TM4中SEPTIN 7表达的影响。结果:与WT小鼠相比,S-AR-/y中Septin 7 mRNA表达水平升高(P0.05);雄激素显著降低TM4中SEPTIN 7表达(P0.05)。结论:Septin 7可能是睾丸Sertoli细胞中AR调控的靶基因。该研究对阐明雄激素及其受体调节精子发生的分子机理具有重要意义。     

利用转录组数据挖掘枸杞雄性不育相关基因

目的 探知宁夏枸杞Lyciumbarbarum雄性不育发生涉及的相关基因。方法 以雄性不育品种“宁杞5号”和正常可育品种“宁杞1号”单双核花粉时期花药为材料,构建c DNA文库,Illumina HiSeq2500高通量平台进行转录组测序。结果 组装得到14 154条Unigenes序列,在错误发现率（false discovery rate,FDR）<0.05且差异倍数（fold change,FC）≥2的条件下,获得3012个差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）,其中,有2327个DEGs在NCBI的非冗余蛋白质数据库（non-redundant protein databasse,NR）、基因本体数据库（gene ontology,GO）、直源同源群集数据库（clusters of orthologous groups,COG）、基因功能和代谢途径数据库（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）、真核同源群数据库（eu Karyotic orthologous Groups,...     

贝奥雄性不育灭鼠剂的实验观察

为进一步了解首批贝奥雄性不育灭鼠剂的灭鼠效果，选用KM小鼠进行120天的试验观察。对照、实验组各分成三群。结果：对照组共繁殖后代248只，实验期间死亡雄鼠1只，雌鼠3只；实验组无繁殖现象，实验期间先后死亡雄鼠10只，雌鼠6只。实验表明，贝奥雄性不育灭鼠剂具有明显的不育性和致死性双重灭鼠效能。