假丝酵母感染及其深部器官感染影像学诊断的研究进展

近年来真菌感染已成为临床上一类重要的疾病，对人类健康造成了严重的威胁。其中，假丝酵母是临床上最常见的真菌病原体，由假丝酵母引起的深部器官感染致死率高达45%。快速精准的诊断真菌感染类型，将有利于降低假丝酵母感染的病死率。利用影像学手段快速诊断真菌感染类型，将为假丝酵母感染的治疗提供重要参考，有利于早确诊早治疗，降低病死率。本文将对近年来国内外在假丝酵母的深部器官感染的流行病学、生物学特征及影像学诊断等方面的研究进展进行系统的综述，综合临床与基础研究的最新进展，为国内同行进行相关研究和医院内真菌感染的防控提供参考。     

布拉酵母联合小剂量红霉素对功能性消化不良患儿血清胃动素及胃泌素的影响

目的研究布拉酵母联合小剂量红霉素对功能性消化不良患儿血清胃动素、胃泌素的影响。方法以某医院2017年8月—2018年10月收治的90例功能性消化不良患儿为研究对象,采用随机数字法将所有患儿分为对照组(n=45)、观察组(n=45)。对照组应用小剂量红霉素对患儿进行治疗,观察组在小剂量红霉素的基础上联合布拉酵母治疗。结果观察组恶心、呕吐、嗳气、腹胀及疼痛评分[(7.68±1.78)分、(6.42±0.92)分、(8.21±1.25)分、(8.34±1.33)分、(7.24±1.63)分]均低于对照组[(10.34±1.09)分、(9.42±1.18)分、(12.71±1.43)分、(13.70±1.36)分、(15.39±1.56)分],差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后血清胃动素为(281.16±45.81)ng/L、胃泌素为(182.65±16.81)ng/L,高于对照组,总有效率(97.78%)高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论布拉酵母联合小剂量红霉素对功能性消化不良患儿治愈率显著,与其提高患儿胃动素、胃泌素的水平相关。     

富硒酵母与TACE治疗原发性肝癌临床疗效及安全性

目的观察富硒酵母与经肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗原发性肝癌的临床疗效并评价其应用安全性。方法选择我院2016年11月～2018年5月收治的89例原发性肝癌患者为本次研究对象,按照患者入院后病床单双号分为单号45例为对照组,双号44例为观察组;对照组采用TACE,观察组在对照组的基础上加富硒酵母口服,2个月后对比两组患者疗效及安全性。结果血硒含量:治疗前两组比较差异无统计学意义(P0.05),观察组治疗后血硒水平明显高于治疗前,与治疗前、对照组治疗后比较,差异有统计学意义(P0.05);血清VEGF水平:治疗前两组差异无统计学意义(P0.05),观察组治疗后明显高于治疗前,差异有统计学意义(P0.05),但与对照组治疗后比较相对较低,差异有统计学意义(P0.05);KPS评分:治疗前两组比较差异无统计学意义(P0.05),治疗后观察组下降幅度低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);两组不良反应情况比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论富硒酵母联合TACE治疗原发性肝癌能够有效改善患者低硒状态,抑制血清VEGF水平,控制肿瘤进展,且无严重不良反应,安全性高,值得临床推广应用。     

赤芝FPS基因酵母单杂交文库构建及其上游转录因子的筛选

目的筛选赤芝三萜合成途径中法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的上游调控转录因子。方法首先克隆了FPS基因启动子,并连接至pAbAi质粒构建诱饵载体pAbAi-FPS。将pAbAi-FPS转化Y1H酵母感受态细胞构建诱饵菌。采用SMART技术构建赤芝酵母单杂交cDNA文库,再将纯化的双链cDNA、pGADT7-Rec共转化诱饵菌株,筛选FPS上游的转录调控因子。结果构建了含pAbAi-FPS的诱饵载体并筛选出诱饵菌株,构建了cDNA文库并转化诱饵菌株,筛选出阳性克隆37个,得到作用FPS基因上游的转录调控因子18个,包括转录因子3个、核糖体蛋白5个及其他家族蛋白10个。结论筛选出转录因子GlSNF2、GlMHR和GlZn2Cys6为调控FPS表达的候选基因,为深入研究FPS基因的表达调控机制奠定了研究基础。     

芪玉三龙汤调节Beclin1,Atg5,LC3B表达以抑制肺癌肿瘤生长机制

目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(autophagy related genes,Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,LC3B)表达的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞(lewis lung cancer cell,LLC)构建肺癌移植瘤小鼠模型,造模成功后随机分为模型组、芪玉三龙汤组、顺铂组及联合组,每组18只移植瘤小鼠。模型组每日按照生理盐水20 mL·kg~(-1)灌胃;芪玉三龙汤组每日按照80. 48 g·kg~(-1)灌胃;顺铂组在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液(DDP)0. 4 mL;联合组每日按80. 48 g·kg~(-1)灌胃给药,并分别在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液0. 4 mL;连续治疗21 d剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态学改变。免疫组化检测肿瘤组织中Beclin1,LC3B蛋白表达和定位。蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Beclin1,Atg5,微管相关蛋白1轻链3-I(LC3B-Ⅰ)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)蛋白表达,并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织Beclin1,Atg5 mRNA转录水平。结果:芪玉三龙汤具有温和的移植瘤抑制作用,抑瘤率为31. 2%;镜下观察芪玉三龙汤组肿瘤组织可见片状坏死的肿瘤细胞;免疫组化及Western blot实验表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够上调Beclin1,Atg5,LC3B蛋白的表达(P 0. 01),并且能促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ;Real-time PCR结果表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够促进Beclin1,Atg5 mRNA的转录(P 0. 01)。结论:芪玉三龙汤对肺肿瘤生长具有温和地抑制作用,其作用机制可能与上调自噬关键分子Beclin1,Atg5,LC3B表达,促进LC3B-Ⅰ向LC3B-Ⅱ转化有关。     

胆维丁乳对酵母多糖所致多器官功能障碍综合征小鼠肾脏作用的研究

目的研究胆维丁乳对酵母多糖所致多器官功能障碍综合征小鼠肾脏的作用。方法选取C57BL/6源性的野生小鼠36只,随机分为对照组、胆维丁乳组、酵母多糖组、胆维丁乳+酵母多糖组,每组9只,室温饲养,按组别分别自由饮水或添加胆维丁乳喂养14 d。2周后,酵母多糖组、胆维丁乳+酵母多糖组腹腔注射酵母多糖混悬液,对照组、胆维丁乳组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液,18 h后处死各组小鼠,分别进行HE染色,观察肾脏组织病变情况;Western blot技术检测炎症因子蛋白表达;用TRizol法按照试剂说明书提取总RNA,用反转录试剂盒将RNA反转录成c DNA;采用SPSS 16.0进行统计学处理。结果胆维丁乳+酵母多糖组小鼠炎症因子IL-6、IL-18蛋白及mRNA的表达、尿素及肌酐水平高于酵母多糖组(P<0.05),且肾脏组织病理学改变较严重。结论对于正常生长的小鼠,给予胆维丁乳不会加重小鼠的肾脏负担;对于已经发生急性肾损伤的小鼠,胆维丁乳的摄入会加重肾脏损伤。     

8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷对非白假丝酵母的抑菌作用

目的探索分析8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷抗非白假丝酵母的作用,拓宽其应用范围。方法将近平滑假丝酵母、克柔假丝酵母、光滑假丝酵母的标准菌株及临床菌株选为待试菌株,测定8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷、黄芩苷及伊曲康唑对待试菌株的抑菌圈直径。结果除伊曲康唑对部分待试菌株耐药外,3种药物对待试菌株存在一定的抗菌作用。8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷对近平滑假丝酵母标准菌株、近平滑假丝酵母临床菌株、克柔假丝酵母临床菌株的抑菌圈直径分别为(29.44±5.27)mm、28.00(25.00,30.00)mm、18.00(15.00,24.00)mm,大于黄芩苷;对光滑假丝酵母临床菌株的抑菌圈直径为25.00(20.00,28.00)mm,大于伊曲康唑(P<0.05)。其对光滑假丝酵母的标准菌株、临床菌株的抑菌圈直径分别为(25.56±4.64)mm、25.00(20.00,28.00)mm,小于黄芩苷;对克柔假丝酵母的标准菌株、临床菌株的抑菌圈直径分别为(18.89±3.33)mm、18.00(15.00,24.00)mm,小于伊曲康唑(P<0.05)。结论 8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷对近平滑假丝酵母标准菌株、近平滑假丝酵母临床菌株、克柔假丝酵母临床菌株的抗菌作用优于黄芩苷,对光滑假丝酵母临床菌株的抗菌作用优于伊曲康唑;其对光滑假丝酵母的标准菌株、临床菌株的抗菌作用弱于黄芩苷,对克柔假丝酵母的标准菌株、临床菌株的抗菌作用弱于伊曲康唑。     

寻找受体分子研究方法的进展

配体与受体间的识别及相互作用是分子发挥其功能的重要途径,具有重要的生物学意义。但是,寻找某一分子的受体并不容易,往往成为研究的瓶颈所在。目前寻找及验证某一对配体/受体分子及其对应关系的方法有很多,包括免疫共沉淀、噬菌体展示、酵母双杂交、分子模拟、谷胱甘肽巯基转移酶pull-down、串联亲和纯化等。该文对这些方法的基本原理、简要步骤及优缺点进行综述,为相关研究提供依据。     

采用重叠PCR构建高灵敏度酵母细胞传感器评估遗传毒性化合物

采用重叠PCR（overlap PCR）方法构建了pdr5与snq2基因敲除组件,研究了pdr5、snq2基因突变对酵母细胞传感器评估遗传毒性的影响。考察了野生型、pdr5单基因突变、snq2单基因突变与pdr5、snq2双基因突变酵母细胞传感器暴露于系列浓度甲磺酸甲酯（MMS）、甲磺酸乙酯（EMS）、顺铂、4-硝基喹啉-N-氧化物（4NOQ）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、羟基脲、水杨酸和葡萄糖溶液24 h后的细胞生长抑制情况与16 h后的荧光诱导情况。研究结果表明,overlap PCR方法能够高效率构建基因突变酵母细胞传感器;snq2单基因突变与pdr5、snq2双基因突变细胞传感器检测遗传毒性的准确度为100%,高于野生型与pdr5单基因突变细胞传感器（87.5%）;pdr5、snq2双基因突变酵母细胞传感器表现出最高的遗传毒性检测灵敏度,为构建高准确度与灵敏度的酵母细胞传感器提供了思路与方法,为酵母细胞膜转运蛋白基因pdr5与snq2的进一步功能研究奠定了基础。