酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠肝脏线粒体能量代谢及其机制的影响

目的 研究酸枣仁汤对老年慢性睡眠剥夺模型大鼠肝脏线粒体能量代谢的影响及作用机制。方法 将50只雄性Wistar大鼠随机分为正常组，模型组、舒乐安定组（0.18 mg·kg^-1·d^-1），酸枣仁汤低、高剂量组（6.48，12.96 g·kg^-1·d^-1），除正常组外，其余各组均皮下注射D-半乳糖，于末次给药后进行多平台水环境睡眠剥夺，造模结束后各组开始灌胃给药，连续给药7 d。采用透射电镜观察肝脏线粒体形态，采用比色法检测大鼠肝脏三磷酸腺苷（ATP）含量的变化，采用比色法检测大鼠肝脏线粒体呼吸链还原型辅酶Ⅰ（复合物Ⅰ），琥珀酸氧化还原酶（复合物Ⅱ），细胞色素C氧化还原酶（复合物Ⅲ），细胞色素C氧化酶（复合物Ⅳ）活性，采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肝脏柠檬酸合酶（CS），异柠檬酸脱氢酶（IDH），负责编码ATP合成酶F0亚基的一段核基因（ATP5F1）蛋白的表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠肝脏内线粒体损伤较严重，线粒体发生肿胀、变形，嵴断裂并且数量有一定的减少，与模型组比较，舒乐安定组、酸枣仁汤高剂量组线粒体损伤减轻，肿胀、变形情况显著减少，嵴断裂减少，其中酸枣仁汤高剂量改善较为明显。与正常组比较，模型组大鼠肝脏ATP含量显著降低（P<0.01），线粒体呼吸链复合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ活性均显著降低（P<0.01），IDH，CS，ATP5F1蛋白表达均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，酸枣仁汤高剂量组肝脏ATP含量显著升高（P<0.01），线粒体呼吸链复合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ活性均明显升高（P<0.05，P<0.01），IDH，CS，ATP5F1蛋白表达均显著升高（P<0.01），舒乐安定组肝脏ATP含量明显升高（P<0.05），线粒体呼吸链复合物Ⅰ，Ⅲ活性显著升高（P<0.01），CS，ATP5F1蛋白表达均显著升高（P<0.01），酸枣仁汤低剂量组肝脏线粒体呼吸链复合物Ⅰ，Ⅲ活性明显升高（P<0.05，P<0.01），ATP5F1蛋白表达明显升高（P<0.05）。结论 酸枣仁汤可以改善老年慢性睡眠剥夺引起的肝脏能量代谢异常，其机制可能与上调线粒体电子链酶活性，CS，IDH及ATP5F1蛋白表达有关。     

大鼠胸段脊髓损伤后后肢神经肌肉的自然变化

目的:观察大鼠完全性脊髓损伤后损伤平面以下周围神经和骨骼肌的自然变化,为脊髓损伤治疗与康复相关基础研究提供科学依据。方法:将50只健康成年雌性SD大鼠随机分为对照组(A组)5只、假手术组(B组)10只和脊髓损伤组(C组)35只,B组行单纯椎板切除术;C组在椎板切除基础上用横断法制成T10完全脊髓损伤模型。分别对3组大鼠术前,B组术后1、2周,C组术后1、2、4、12、24周进行BBB评分,并检测腓肠肌的运动单位计数(motor unit number estimation,MUNE);再于各时间点处死大鼠,取坐骨神经和腓肠肌内侧头,应用光镜和透射电镜观察坐骨神经-运动终板-腓肠肌的形态变化。对3组所有结果进行对比分析。结果:C组术后各时间点的BBB评分与术前及A组、B组比较差异均有统计学意义(P0.05),C组术后4周时的BBB评分与其他时间点比较差异均有统计学意义(P0.05)。C组术前MUNE数值与A组、B组比较差异无统计学意义(P0.05);C组术后各时间点与术前比较差异均有统计学意义(P0.05),术后4周与24周比较差异无统计学意义,其余各时间点比较差异均有统计学意义(P0.05)。A组和B组术后1、2周时坐骨神经有髓神经纤维髓鞘外形正常。C组术后1、2周时与A组、B组无明显差异;4周时部分有髓神经纤维髓鞘崩解、板层分离;12周时髓鞘崩解明显增多,高倍电镜观察见崩解的髓鞘板层清晰;24周时有髓神经纤维髓鞘崩解、融合,新生神经纤维管细壁薄,无髓神经纤维增多,高倍电镜观察见崩解的髓鞘板层模糊。A组肌细胞肌束膜及肌内膜边界清晰,肌细胞核位于肌膜下方。B组术后1、2周时与对照组无明显区别。C组术后1、2周时,除肌细胞截面积轻度缩小外,与对照组无明显不同;4周时肌细胞截面积缩小,局部肌细胞破坏;12周时多数肌细胞边界模糊,细胞核相对聚集,结缔组织增生明显;24周时肌细胞融合,细胞核密集,融合细胞间可见大小不一空隙,结缔组织增生更加明显。A组和B组术后1、2周运动终板结构清晰完整。C组术后1、2、4周时运动终板结构较A组、B组无明显差别;术后12周时相对完好运动终板与破坏运动终板并存,高倍电镜下观察见突触前膜、突触间隙、突触后膜层次分明,各层结构内可见细小颗粒,突触间隙内可见多个类圆形突触小泡,肌板清晰,同时也可见突触皱褶及突触前、后膜不可辨,肌板结构不清晰;术后24周时找不到运动终板。结论:大鼠完全横断性脊髓损伤后损伤平面以下周围神经和骨骼肌形态结构随时间退变程度逐步加重甚至消失;损伤后12周时已有明显变化,24周时出现显著的结构损害和功能丧失。     

镧盐处理后骨髓基质干细胞内超微结构及镧元素分析

目的:探讨镧离子(La3 )能否进入体外成骨化诱导的骨髓基质干细胞(BMSCs)并对其超微结构与金属成分产生影响。方法:取杂种犬第3代体外成骨化诱导培养的BMSCs,于培养基中分别加5.564×102、5.564、5.564×10-2μg/mlLa3 干预,设无La3 干预对照组。用透射电镜(TEM)、电子探针波谱(EM-WS)及高分辨透射电镜能谱(HRTEM)观察BMSCs超微结构与金属成分。结果:TEM下观察3种浓度La3 作用后BMSCs溶酶体内有电子致密物质存在,对照组无此现象;3组BMSCs的部分细胞器有轻微变性现象,与对照组相似;EMWS检测到5.564×102μg/ml的La3 作用后BMSCs中有镧元素存在;3种浓度La3 作用后HRTEM检测BMSCs内均未测出镧元素。结论:一定浓度下La3 可能进入BMSCs。     

下颌骨牵张成骨对下牙槽神经影响的实验研究

目的　观察狗双侧下颌骨牵张成骨术中不同时间点的下牙槽神经的电生理功能及组织学结构的变化。方法　实验组 :12只狗行保留下牙槽神经的双侧下颌骨截断术 ,装上自制的口内牵张器 ,于术后第 8天开始牵张 ,1mm/d ,共 10d ,牵张长度约 10mm。分别在牵张中第 6天、牵张完毕后固定 2周及 8周时各处死 4只动物。分别在术前及术后的不同时期用电生理方法检测双侧下牙槽神经的传导功能 ,并于处死前取出双侧下牙槽神经进行组织病理学及超微结构组织学检查。对照组 :4只狗 ,其中 2只狗作为对照组 ,未行手术 ;另 2只狗为手术对照组 ,进行与实验组相同的骨切开截断术 ,上牵张器 ,但未行牵张和固定 ,于操作完毕时取出双侧下牙槽神经作为术后的组织学结构标本。结果　实验组动物的下牙槽神经在光镜下显示部分神经纤维稍肿胀变粗 ;电镜下显示部分神经纤维髓鞘的板层松解及脱髓鞘现象 ;电生理结果显示 ,神经传导的速度于截断术后的不同时期均低于术前 ,但仅术后第 8天 (即牵张前 )的传导速度与术前的传导速度差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　对狗的双侧下颌骨进行牵张成骨时 ,可一过性引起下牙槽神经损伤。其损伤的主要原因是手术过程所致。在适当的牵张速率、牵张长度和牢固的固定条件下 ,下颌骨的牵张成骨术对下牙槽     

山羊颞下颌关节盘细胞透射电镜观察

目的 用透射电镜的方法对两只1月龄健康山羊四只颞下颌关节盘的细胞及胶原结构进行了观察.方法 切取山羊双侧颞下颌关节盘,经组织学处理后行透射电镜观察细胞和胶原超微结构特征.结果 颞下颌关节盘由不均分布的细胞和胶原纤维组成,细胞有成纤维细胞样细胞和软骨细胞样细胞两种,其中成纤维细胞样细胞较软骨细胞样细胞占优势.成纤维细胞样细胞表现有细长的突起,核大,梭形或不规则形,细胞器较少.软骨细胞样细胞胞核呈圆形或椭圆形,周围少有电子透射区,细胞膜不明显,胞突少见.胶原纤维由平行排列的有周期性横纹特征的胶原原纤维组成.结论 颞下颌关节盘细胞有成纤维细胞样和软骨细胞样细胞两种,前者占优势,胶原原纤维表现有周期性横纹特征.这为颞下颌关节盘组织工程研究中细胞来源及表型分析奠定了一定基础.     

大鼠正畸牙齿移动过程中牙周组织超微结构的改变

目的：研究正畸牙齿移动过程中牙周组织超微结构的改变情况。方法：施加外力使大鼠上颌第一磨牙向近中移动后，处死大鼠制备第一磨牙标本，进行透射电镜观察。结果：大鼠受正畸力作用后，组织各种生理、病理反应更加明显，压力侧破骨细胞增多，线粒体、溶酶体增多，高尔基体发达，成纤维细胞排列紊乱、变性、萎缩甚至坏死。张力侧成骨细胞、成纤维细胞的胞浆内高尔基体、内质网丰富，分泌功能旺盛。结论：正畸力引起牙周组织细胞功能的旺盛，改建活跃。     

川芎嗪对大鼠癫痫放电时神经元超微结构变化的研究

目的：研究川芎嚓(TMP)对大鼠癫痫放电时其大脑神经元超微结构的变化。方法：使用青霉素致癫大鼠模型。采用BL-410生物机能实验系统记录腹腔注射不同剂量川芎嗪对双侧大脑皮层癫痫放电，观察川芎嗪对癫痫放电频率及振幅的影响。并用透射电镜观察大脑皮层神经元超微结构的变化。结果：与生理盐水对照组比较，川芎嗪可使大鼠癫痫放电频率减慢，振幅降低。并且随着频率的减慢和振幅的降低。大脑皮层神经元超微结构形态也恢复正常。结论：川芎嗪能明显抑制大鼠癫痫放电。并使神经元内的细胞器结构恢复正常。     

老年性上睑下垂提上睑肌腱膜的病理学观察

目的通过研究老年性上睑下垂提上睑肌腱膜的病理结构的改变,探讨老年性上睑下垂的发病机制。方法选自我科2011年6月至2013年6月就诊的老年性上睑下垂患者30例,根据下垂量分为轻度、中度、重度,将提上睑肌缩短手术中取得的提上睑肌腱膜组织,进行HE染色、弹性蛋白(Elastin)及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9免疫组织化学染色检查,并行透射电镜超微结构观察。结果术中可见患眼提上睑肌腱膜变长、变薄,有的出现裂孔,部分或全部从睑板表面断裂,有的出现脂肪样变性;HE染色可见患眼提上睑肌肌浆内出现大量脂肪样变性;免疫组织化学染色结果示Elastin含量下降,与下垂程度呈负相关(r=-2.782,P=0.002),MMP-9的含量增加,与下垂程度呈正相关(r=4.376,P=0.030);透射电镜显示成纤维细胞的细胞膜局部有缺损、外形不规则,胞质肿胀,内质网扩张、脱颗粒,胶原纤维周围可见脂滴。结论老年性上睑下垂的提上睑肌腱膜变薄或破裂,脂肪样变和肌纤维萎缩,Elastin含量下降,胶原纤维分裂,呈现退化改变。     

石榴皮提取物鞣质对耐药鲍氏不动杆菌超微结构变化的电镜观察

目的观察石榴皮提取物鞣质对产金属β-内酰胺酶(MBL)和非产MBL鲍氏不动杆菌(ABA)的体外抑菌活性及其在透射电镜下细菌细胞形态超微结构的变化,为高耐药ABA感染的治疗提供试验依据。方法采用石榴皮提取物鞣质对产MBL和非产MBL的高耐药ABA进行药物敏感试验,用透射电镜观察经药物在体外作用后的ABA细胞的超微结构。结果石榴皮提取物鞣质对高耐药的ABA抑菌圈直径在10~19mm,产MBL与非产MBL的MIC均为15.6mg/ml,两者差异无统计学意义;产MBL与非产MBL的ABA经药物在体外作用后超微结构均发生了明显改变,表现为菌体塌陷、细胞融合成团、呈现肿胀裂解、细菌细胞壁结构破损及胞浆内容物溢出等现象。结论石榴皮提取物鞣质对高耐药的ABA有较好的抑菌作用,且不受产MBL影响,因此,探索鞣质中药制剂,为临床治疗耐药ABA引起的感染提供了新的途径。     

粒细胞集落刺激因子对脑小血管病大鼠神经保护机制的研究

目的观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对脑小血管病的神经保护作用,并探讨其可能机制。方法采用完全随机化方法将自发性高血压大鼠分为治疗组和模型组,另选择Wistar大鼠作为对照组。治疗组皮下注射G-CSF 50μg·kg~(-1)·d~(-1),连续7 d;模型组和对照组分别皮下注射等量生理盐水。采用免疫组化法检测基底节区血管内皮生长因子(VEGF)、血管性血友病因子(vWF)表达水平;TUNEL法检测神经元凋亡情况;透射电镜观察微血管超微结构变化。结果治疗组和模型组VEGF表达水平均高于对照组,且治疗组高于模型组,3组间比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗组vWF表达水平低于对照组,但较模型组有所增加,3组间比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗组细胞凋亡率高于对照组,但较模型组有所降低,3组间比较差异有统计学意义(P0.05)。透射电镜下可见模型组微血管结构破坏及内皮细胞损伤明显,而治疗组和对照组微血管结构变化及内皮细胞损伤不明显。结论 G-CSF可能通过增加VEGF表达水平,促进脑小血管内皮细胞修复,减少神经元凋亡,从而减轻自发性高血压大鼠脑小血管病损伤。