Ⅲ~Ⅳ期糖尿病肾病不同中医证型的血清蛋白组学研究

目的:探索Ⅲ~Ⅳ期糖尿病肾病(DN)患者血清差异蛋白,同时筛选不同中医证型的血清差异蛋白。方法:收集Ⅲ~Ⅳ期DN患者70例(气阴两虚证19例,脾肾气虚证18例,血瘀证16例,湿热证17例),同时选择健康受试者35例(健康对照组),应用表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测各组血清蛋白指纹图谱,并对差异蛋白峰进行对比分析。结果:1) DN组与健康对照组之间共有9个蛋白峰存在显著差异,质荷比(M/Z)分别为2042.57、3291.28、4986.15、5312.69、5564.09、9861.47、10786.53、13392.89、17395.27;2)气阴两虚证与脾肾气虚证之间共有4个蛋白峰存在显著差异,M/Z分别为2994.77、4986.15、7937.25、2758.91;3)气阴两虚证与血瘀证之间共有4个蛋白峰存在显著差异,M/Z分别为4986.15、16982.62、6819.69、9947.36;4)气阴两虚证与湿热证之间共有3个蛋白峰存在显著差异,M/Z分别为4986.15、11741.33、7001.54;5)脾肾气虚证与血瘀证之间共有3个蛋白峰存在显著差异,M/Z分别为3448.22、8063.43、9787.21;6)脾肾气虚证与湿热证之间共有5个蛋白峰存在显著差异,M/Z分别为2144.34、3992.01、8871.35、10568.32、14643.47;7)血瘀证与湿热证之间共有6个蛋白峰存在显著差异,M/Z分别为4233.15、5771.32、5987.18、8496.76、6651.25、13551.94。结论:Ⅲ~Ⅳ期DN组与健康对照组血清蛋白表达存在差异,该差异或可作为相关临床诊断的标志物,对探索DN的发病机制具有重要的参考价值;在不同中医证型之间能够找到差异血清蛋白,可能反映"证"的实质内涵,对今后建立诊断决策模型具有积极意义。     

毛霉目病原真菌的实验室鉴定及体外抗真菌药物敏感 性分析

摘要:目的以分子测序为参考 ,评估形态学、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对毛霉目真菌的鉴定能力,分析毛霉目真菌对两性霉素B、泊沙康唑的体外药敏特点。方法收集 2018年1月-2022年2月广东省人民医院25例毛霉病住院患者标 本,进行镜检并对培养的茵落行形态学鉴定、质谱鉴定、分子测序和体外药敏试验。结果KOH 湿片法阳性率(76%)高于革兰染色法(32%),差异有统计学意义(P<0.05);形态学鉴定可将68%的菌株鉴定到属水平,3株鉴定错误,2株无法鉴定;将所 有菌株进行质谱鉴定,单用IVD和RUO数据库鉴定率分别为56%和44%,两库联合可将鉴定率提高为64%。毛霉目真菌对两性霉素B的抑制50%菌株生长的最小抑菌浓度(MIC3o)为1μg/mL,根霉属相比其他属对两性霉素B表现出较高的MIC 值,其中2株MIC>32 μg/mL,另2株MIC为8 μg/mL;根霉属对泊沙康唑的MICso为0.5 μg/mL,横梗霉属MICgo为4 μg/ mL,小克银汉霉属MICg0为2 μg/mL,有部分菌株表现出较低MIC值,同样亦有部分菌株对泊沙康唑表现出较高的MIC 值。结论 将传统镜检、培养与质谱技术和分子技术相结合,尽量将毛霉目真菌准确鉴定到种,并积极开展毛霉体外药敏试验,可为临床治疗提供参考依据。     

MALDI-TOF-MS检测分枝杆菌属正确率的荟萃分析

目的对MALDI-TOF MS快速检测分枝杆菌属的正确率进行荟萃(meta)评价。方法收集1990-2015年,国外公开发表的关于MALDI-TOF MS检测分枝杆菌的文献,按meta分析的要求对文献进行检索、筛选,对纳入的文献进行质量评价,对符合条件的研究进行meta分析。结果共有11篇文献纳入,对各文献的研究进行数据提取后合并MALDI-TOF MS鉴定分枝杆菌属的正确率,结果正确率为91%。结论 MALDI-TOF MS对分枝杆菌属的鉴定有较好的准确性。     

早期矽肺损伤的蛋白质组学研究及 α 晶状体球蛋白 B 的表达与验证

目的：建立二氧化硅诱导早期肺损伤大鼠肺组织的二维凝胶电泳图谱,筛选在此过程中起关键作用的靶 蛋白分子并进行验证。方法：制作二氧化硅诱导大鼠早期肺损伤模型(实验组),通过HE染色观察肺部形态变化,用 双向凝胶电泳法建立二维凝胶图谱,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定差异表达蛋白 分子,用Western印迹验证差异表达蛋白分子在肺组织中的表达。结果：成功制作二氧化硅早期肺损伤模型,建立实 验组及对照组肺组织二维凝胶电泳图谱,二者蛋白表达及分布存在差异,发现差异点40个,选取重复性好,在凝胶 上位置和表达适中的共20个进行MALDI-TOF-MS鉴定及数据库搜索并筛选,鉴定出差异蛋白13种,包括α晶状体球蛋 白B、间隙蛋白I、肥大细胞蛋白酶等,进一步用Western印迹证实实验组α晶状体球蛋白B表达明显增加,与蛋白质组 学结果一致。结论：α晶状体球蛋白B在早期矽肺组织中表达明显升高,提示其可能在矽肺的发生发展中起关键作用。     

T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇全抗原的合成及鉴定

目的分别合成T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的全抗原。方法采用琥珀酸酐法对分子结构进行修饰,产生易反应的官能团,并与载体蛋白偶联,从而具备免疫条件,用高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪MALDI-TOF检测偶联物及偶联蛋白的分子量,用商品化的T-2和DON免疫试剂盒与偶联物进行棋盘滴定验证。结果T-2和DON的全抗原及BSA的分子量分别为67641.6、66680.4、66297.7,偶联物与免疫试剂盒中T-2和DON的抗体均呈阳性反应。结论合成的T-2、DON全抗原为相应抗体的制备和免疫学方法的建立奠定了基础。     

新发展晚期血吸虫病患者血清肽谱分析

目的:分析新发展晚期血吸虫病患者血清多肽,筛选有潜在应用价值的标志蛋白,为其诊断与发病机制研究奠定基础?方法:采集新发展晚期血吸虫病患者与健康人血清,利用包被有弱阳离子的磁珠富集纯化血清多肽,应用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱(MALDI-TOF-MS)Flex分析技术结合Mascot生物信息学分析血清多肽指纹图谱?结果:与健康对照组比较,在0.8~13.0 ku区段,新发展晚期血吸虫病患者血清中m/z 2 082?4 282多肽表达上调(P < 0.01),2 661?2 991?3 241?5 337?5 906多肽表达下调(P < 0.05);常规晚期血吸虫病患者血清中m/z 2 662?4 209?5 337与5 906处显著下调,2 082处显著上调?结论:m/z 3 241?4 282血清差异多肽对新发展晚期血吸虫病患者的诊断可能具有潜在应用价值,对该病发生发展的机制也奠定了理论基础?     

蛋白质组学技术分析小鼠中脑能量代谢蛋白

目的：采用蛋白质组学技术鉴定小鼠中脑部位与能量代谢相关的蛋白,探讨这些蛋白与神经性疾病的关系。方法提取小鼠中脑蛋白质,采用双向电泳分离,切取蛋白点进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定。结果双向电泳技术结合 MALDI-TOF MS 成功鉴定出24个与能量代谢相关蛋白。结论建立了小鼠中脑部位蛋白质的鉴定方法,为探讨这类蛋白质在神经系统疾病中的作用奠定了基础。     

急性肝衰竭大鼠肝脏的蛋白质组学研究

目的 筛选急性药物性肝衰竭大鼠肝脏组织的差异表达蛋白质.方法 将24只SD大鼠分为两组 ,12只通过腹腔注射10 g/L的D-氨基半乳糖建立大鼠急性肝衰竭模型(实验组) ,12只腹腔注射生理盐水作为对照组.提取两组大鼠肝脏组织的蛋白质 ,定量后进行IEF和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)双向凝胶电泳(2-DE)分离 ,通过软件找到差异蛋白点并使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)进行鉴定.结果 成功鉴定出27个有效的差异蛋白质点 ,其中实验组较对照组上调15个 ,下调12个.结论 急性药物性肝衰竭模型大鼠肝脏酪蛋白激酶Iα(CKⅠα)、酪氨酸蛋白激酶(PTK)、增殖细胞核抗原(PCNA)等蛋白的表达较正常大鼠存在显著差异.     

弱碱性树脂吸附-解吸苦味酸

考察了水中苦味酸在弱碱性离子交换树脂D301R上的吸附与解吸。研究了吸附热力学、动力学特性及吸附机理。结果表明,树脂在pH=2.7～10.2时,吸附能力最好。等温平衡吸附遵循Freundlich模型。吸附过程为吸热、熵增的自发过程。吸附动力学符合Lagergren准二级速率方程,颗粒内扩散为吸附速率的主要控制步骤,吸附速率常数为7.23×10-5～1.20×10-4g/（mg.min）,吸附活化能为19.4 kJ/mol。树脂上吸附的苦味酸可用HNO3＋丙酮混合液定量洗脱,洗脱率达99%。静态吸附和脱附的比较结果证实了吸附过程中存在不可逆化学吸附。树脂对苦味酸的吸附主要是通过静电吸附、酸碱络合吸附、氢键吸附等协同作用来完成的。     

HBV相关性肝细胞癌及肝硬化患者外周血单个核细胞质谱分析

目的:建立HBV相关性肝细胞癌(HCC)及肝硬化(LC)患者外周血单个核细胞(PBMC)的双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定其差异表达的蛋白质.方法:利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离HBV相关性HCC(n=16)及LC患者(n=12)PBMC的总蛋白质,凝胶经蓝银显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点.结果:得到了分辨率较高、重复性较好的HBV相关性HCC及LC患者PBMC双向凝胶电泳图谱,HBV相关性HCC及LC患者PBMC凝胶的平均蛋白质点数分别为1186±43及1013±41;组内的平均匹配率分别为91.6%,90.2%.对27个差异蛋白质点进行了质谱分析,鉴定出16个蛋白质,在HBV相关性HCC患者PBMC中表达明显增强的有热休克蛋白质(HSP)27、ras癌基因家族(RAB14)、肌动蛋白、α1-抗胰蛋白及RNA结合蛋白调节亚基等13个蛋白点;而PDX6、HSPA8及锰超氧化物歧化酶(MnSOD)在HCC患者PBMC中低表达.这些差异蛋白质点包括蛋白质合成与分解、分子伴侣、解毒和DAN修复相关蛋白质、三大代谢相关酶类、细胞结构相关蛋白质以及信号传导相关蛋白质六类.结论:建立了分辨率高且重复性较好的HBV相关性HCC及LC患者PBMC双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出了一些与HBV相关性HCC癌变相关的差异表达的蛋白质.