丹参酮ⅡA-甘草酸自组装纳米胶束的制备及体外抗脑胶质瘤评价

  目的  将丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA, Tan ⅡA)封装于甘草酸(Glycyrrhizic acid, GL)中自组装得到胶束, 考察其制备工艺并对产物进行表征, 同时进行体外抗胶质瘤细胞活性评价。  方法  采用薄膜分散法制备载丹参酮ⅡA-甘草酸自组装胶束(Tan ⅡA-GL/Micelle, TGM)。测定TGM的粒径、多分散系数以及Zeta电位；透射电子显微镜观察TGM的形态特征；高效液相色谱法测定TGM的包封率；透析袋法考察TGM的药物释放情况。倒置荧光显微镜考察TGM体外跨血脑屏障(Blood-brain barrier, BBB)的能力; 定量考察细胞摄取的具体机制; MTT法考察游离Tan ⅡA、游离GL和TGM分别对鼠源性脑胶质瘤细胞GL261的细胞毒性; 流式细胞仪检测游离Tan ⅡA、游离GL及TGM对GL261的细胞凋亡作用。  结果  薄膜分散法是制备载丹参酮ⅡA-甘草酸自组装胶束的最佳工艺方法; TGM粒径约为(121.87±5.85)nm, Tan ⅡA包封率为(88.54±14.27)%, 呈类球形形态, 制剂均一稳定; 可在5 h左右释放包载药物。TGM具有良好的跨BBB能力; 脑胶质瘤细胞摄取自组装胶束的机制为通过网格蛋白介导的胞吞来进行制剂的摄取; 对于脑胶质瘤细胞GL261具有良好的细胞毒性; 细胞凋亡实验结果表明, TGM相较于Free TanⅡA、Free GL组显著提高细胞凋亡水平, 促细胞凋亡率分别由12.28%、13.32%上升至31.16%。  结论  GL与Tan IIA通过自组装形成了纳米胶束，有效克服TanⅡA生物利用度低、水溶性差等缺点。TGM可有效跨越BBB，通过网格蛋白介导的胞吞途径被脑胶质瘤细胞摄取，具有良好的细胞毒性与促细胞凋亡能力。      

藏药细叶亚菊的质量标准研究＊

目的 建立细叶亚菊的质量标准，为其质量控制和合理开发利用提供科学参考。方法 采用性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱法（TLC）对细叶亚菊进行定性分析；参照《中国药典》（2020年版）通则方法对细叶亚菊水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物进行含量检查；利用高效液相色谱法（HPLC）测定细叶亚菊中绿原酸、异绿原酸A的含量。结果 确定了细叶亚菊的药材性状及显微特征。TLC鉴别显示，供试品（细叶亚菊药材）与对照品（绿原酸、异绿原酸A）在相应位置上均显示相同颜色的荧光斑点。13批细叶亚菊水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的含量分别为8.55%-13.07%、6.81%-12.68%、1.11%-3.53%、8.41%-11.64%；绿原酸、异绿原酸A的含量范围分别为0.072%-0.440%、0.283%-1.324%（n=3）。结论 本研究建立的方法准确稳定，可为细叶亚菊的质量控制提供参考。暂规定细叶亚菊水分不得过12.0%，总灰分不得过10.0%，酸不溶性灰分不得过2.5%，水溶性浸出物不得少于8.0%，绿原酸不得少于0.2%，异绿原酸A不得少于0.6%。     

基于PERK-eIF2α-CHOP通路调控巨噬细胞胆固醇稳态及冠心康含药血清干预机制研究＊

目的 观察具有益气化痰活血作用的冠心康对人单核/巨噬细胞株THP-1细胞PERK-eIF2α信号通路及相关活化转录因子（ATF）和C/EBP同源转录因子（CHOP）的影响，探究冠心康对胆固醇在巨噬细胞内质网中的代谢稳态调节及作为“脂毒”流出后异常沉积的相关作用。方法 采用100 ng·mL^-1 PMA及80 μg·mL^-1氧化低密度脂蛋白诱导THP-1细胞株，构建巨噬细胞模型，并随机分为模型组、冠心康组、辛伐他汀组、正常组。分别采用10%小牛血清及含药血清干预模型细胞72 h后收集细胞。HE染色观察巨噬细胞病理形态变化，同时进行胆固醇及脂滴含量测定。分别采用Real-time PCR及Western blot法检测各组细胞PERK、eIF2α、ATF、CHOP mRNA及蛋白的表达。结果 HE染色观察到模型组细胞内呈现较多红色脂滴，经胆固醇含量测定，明显高于正常组，脂滴含量测定与前者一致（P<0.01）。模型组细胞ATF、CHOP基因表达水平均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，冠心康组和辛伐他汀组细胞ATF、CHOP基因表达水平均显著降低（P<0.01）。PERK磷酸化以及CHOP蛋白表达水平在冠心康和辛伐他汀干预组表现为显著下调，与模型组比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 冠心康可能通过调控PERK-eIF2α-CHOP通路相关基因及蛋白，减少泡沫细胞形成，从而减轻内质网应激，维持细胞内胆固醇稳态，减少细胞内胆固醇沉积。     

急性缺血性脑卒中患者血清Janus蛋白酪氨酸激酶2和细胞因子信号转导抑制因子1水平及其与肠道菌群、免疫功能的关系研究

目的分析急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK)2、细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)水平及其与肠道菌群、免疫功能的关系。方法选择2020年2月至2023年2月宜昌市中心人民医院收治的AIS患者106例为AIS组,另选取同期在宜昌市中心人民医院进行体检的健康者106例为对照组。比较两组血清JAK2、SOCS1水平和肠道菌群(乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠埃希菌、肠球菌)数量及免疫功能指标(CD_(3)+、CD_(4)+、CD_(8)+T淋巴细胞百分比);采用Pearson相关分析探讨AIS患者血清JAK2、SOCS1水平间的相关性及二者与肠道菌群数量、免疫功能指标的相关性。结果AIS组血清JAK2水平高于对照组,SOCS1水平低于对照组(P<0.05)。AIS组乳酸杆菌、双歧杆菌数量低于对照组,大肠埃希菌、肠球菌数量高于对照组(P<0.05)。AIS组CD_(3)+、CD_(4)+T淋巴细胞百分比低于对照组,CD_(8)+T淋巴细胞百分比高于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,AIS患者血清JAK2水平与血清SOCS1水平呈负相关(P<0.05);AIS患者血清JAK2水平与乳酸杆菌数量、双歧杆菌数量、CD_(3)+T淋巴细胞百分比、C_(D4)+T淋巴细胞百分比均呈负相关,与大肠埃希菌数量、肠球菌数量、CD_(8)+T淋巴细胞百分比均呈正相关(P<0.05);AIS患者血清SOCS1水平与乳酸杆菌数量、双歧杆菌数量、CD_(3)+T淋巴细胞百分比、CD_(4)+T淋巴细胞百分比均呈正相关,与大肠埃希菌数量、肠球菌数量、CD_(8)+T淋巴细胞百分比均呈负相关(P<0.05)。结论AIS患者血清JAK2水平升高,SOCS1水平降低,且二者间呈负相关;此外,血清JAK2、SOCS1水平均与肠道菌群数量及免疫功能指标存在相关性,即随着血清JAK2水平升高、SOCS1水平降低,乳酸杆菌数量、双歧杆菌数量、CD_(3)+T淋巴细胞百分比、CD_(4)+T淋巴细胞百分比逐渐降低,大肠埃希菌数量、肠球菌数量、CD_(8)+T淋巴细胞百分比逐渐升高。     

关节镜下半月板成形术对膝关节半月板损伤患者血清疼痛因子、一氧化氮、透明质酸及关节活动度的影响

目的探讨关节镜下半月板成形术(AMP)对膝关节半月板损伤患者血清疼痛因子、一氧化氮(NO)、透明质酸(HA)及关节活动度的影响。方法选取2019年5月—2020年12月收治的90例膝关节半月板损伤为研究对象,根据治疗方法不同分为对照组和治疗组,每组45例。对照组接受保守治疗,治疗组行AMP治疗。比较两组的临床疗效,治疗前后的血清前列腺素E₂(PGE₂)、5-羟色胺(5-HT)、NO、HA、疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分和膝关节活动度。记录两组治疗并发症发生情况。结果治疗组疗效优良率高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组血清PGE₂、5-HT、NO、HA水平均较治疗前下降,且治疗组低于对照组(P<0.05)。治疗后1、2、3、4周,两组VAS评分均较治疗前降低,且治疗组低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组膝关节屈伸活动度均较治疗前升高,且治疗组高于对照组(P<0.05)。两组并发症发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论AMP对膝关节半月板损伤疗效良好,可减少疼痛因子生成,控制NO、HA水平,提高关节活动度。     

基于数据挖掘分析 ULBP2在结直肠癌中的表达及预后意义

摘要:目的 利用 Oncomine、TCGA(TheCancerGenomeAtlas)等公共数据库,分析 UL16结合蛋白2(ULBP2)基 因在结直肠癌中的表达及临床意义。方法 通过 Oncomine数据库检索关于 ULBP2基因转录组 mRNA 信息,分析 ULBP2在不同类型肿瘤中的表达情况;TCGA 数据库分析 ULBP2基因与结直肠癌的预后关系;利用String数据库分析 ULBP2与上下游蛋白的相互作用及功能富集分析。结果 Oncomine数据库中共有352项关于 ULBP2基因的研究结 果,其中有统计学差异的结果有23项,涉及到结直肠癌和结直肠正常组织的研究数据集共有10项,其中结直肠癌组织 中 ULBP2基因的表达显著高于结直肠正常组织(P<0.05);对 TCGA 数据库结直肠癌数据进行生存分析,结果表明在 结直肠癌患者中 ULBP2基因高表达组的生存率明显低于低表达组(P<0.05)。结论 大数据分析结果表明,ULBP2基 因在结直肠癌组织中呈现高表达,并与患者的预后相关,可能作为其潜在的治疗靶点。