女性致密性骨炎血清骨转换生化标志物水平变化研究

背景 致密性骨炎（OCI）和其他疾病有时难以鉴别，探讨血清骨转换生化标志物可为OCI的鉴别诊断提供依据。 目的 探索女性OCI患者的血清骨转换生化标志物的水平变化及临床意义。 方法 回顾性选取2013年6月至2022年2月在北京积水潭医院门诊及住院诊断为OCI的61例女性患者作为观察组，年龄15~50岁，平均（33.8±6.6）岁，病程2周~15年。选择同期61例女性体检健康者作为对照组，年龄15~48岁，平均（35.6±7.6）岁。比较两组一般临床资料和血清骨转换生化标志物水平，并对血清骨转换生化标志物与病情相关指标进行相关性分析。 结果 观察组血清白蛋白（45.4±2.9）g/L低于对照组（46.5±2.8）g/L（t=2.190，P<0.05）。血清骨转换生化标志物比较结果显示，观察组血清1型胶原羧基末端肽β特殊序列（β-CTX）〔0.28（0.23，0.37）μg/L〕、N-端骨钙素（OC）〔13.1（11.2，16.2）μg/L〕、25-羟维生素D3〔25-（OH）VD3〕〔（14.1±5.1）μg/L〕低于对照组〔0.36（0.29，0.48）μg/L，15.6（13.7，17.3）μg/L，（17.5±6.6）μg/L〕（Z=-2.983、-3.255，t=3.081，P<0.05）。长病程亚组OC水平〔14.6（12.4，18.5）μg/L〕高于短病程亚组〔11.7（10.2，14.0）μg/L〕（Z=-2.407，P<0.05）。多孕亚组β-CTX〔0.25（0.22，0.32）μg/L〕、OC水平〔12.2（10.3，15.0）μg/L〕低于非多孕亚组〔0.33（0.26，0.44）μg/L、13.4（12.0，18.8）μg/L〕（Z=-2.486、-1.897，P<0.05）。相关性分析显示，观察组血清1型前胶原氨基端延长肽（tP1NP）与妊娠次数、生产次数均呈负相关（rs=-0.276、-0.298，P<0.05），OC与体质指数（BMI）、视觉模拟评分法（VAS）评分、妊娠次数均呈负相关（rs=-0.284、-0.374、-0.360，P<0.05），25-（OH）VD3水平与BMI呈正相关（rs=0.275，P<0.05）。 结论 女性OCI患者血清OC、β-CTX水平明显降低，可为鉴别其他疾病提供依据；血清OC水平可以反映OCI患者的严重程度，同时OC水平与患者妊娠次数相关；tP1NP与妊娠次数、生产次数相关。     

运用液体芯片-飞行时间质谱技术建立类风湿关节炎及湿热瘀阻证血清多肽质谱分类模型

目的建立风湿性关节炎(RA)及其RA湿热瘀阻证的血清多肽质谱分类模型,为RA的临床诊断提供依据。方法 60例RA患者根据证型分为湿热瘀阻证(30例)及非湿热瘀阻证(30例),30名健康体检者为健康对照组。分别以RA患者与健康对照组相比较、RA湿热瘀阻证患者与非湿热瘀阻证患者相比较,收集患者血清标本,以磁珠法分离血清多肽后,进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行分析。通过ClinProt Tools软件进行差异分析,建立诊断模型。结果 RA血清多肽分类模型通过GA-5算法所建立分类模型为最优分类模型,由m/z分别为2 601.05、4 967.60、6 639.43、1 866.29、8 144.63的五个多肽组成,该模型识别率为94.74%,交叉验证率为81.96%,盲法验证准确率为97.50%。RA湿热瘀阻证血清分类模型由GA-7算法所建立分类模型为最优分类模型,由m/z分别为5 740.43、4 251.35、2 863.03、1 607.22、4 531.50的五个多肽组成,该模型识别率为97.50%,交叉验证率为80.05%,盲法验证准确率为90.00%。结论本研究所建立的诊断指纹图谱模型对于RA及湿热瘀阻证的临床诊治具有一定的参考价值。     

小鼠精原细胞分选方法改良的研究

目的:通过特异抗体结合的磁珠分选,改进小鼠未分化和分化中两类精原细胞分选方法。方法:利用Thy1和c-Kit两个特异抗体结合的磁珠分选技术,分别将出生后7 d雄性小鼠睾丸中的Thy1~+细胞和c-Kit~+细胞分别做为未分化和分化中的精原细胞分选出来,利用免疫荧光技术和流式细胞术,检测两种精原细胞的纯度,利用实时荧光定量PCR检测两种精原细胞中Gfrα1、Plzf、c-kit和sohlh2 mRNA的表达差异来鉴定两种精原细胞,并将Thy1~+细胞进行原代细胞培养。结果:Thy1~+细胞和c-Kit~+细胞的分选纯度分别达到(85.6±8.35)%和(89.40±2.77)%(P0.01)。Thy1~+细胞中Gfrα1和Plzf基因的相对表达量分别可达到c-Kit~+细胞的(9.47±1.29)、(4.40±0.59)倍,而在c-Kit~+细胞中kit和sohlh2基因的相对表达量分别可达到Thy1~+细胞的(7.38±1.07)、(3.88±0.28)倍(P0.01)。原代培养后,可见细胞状态良好,能够顺利的自我增殖,并具有精原干细胞增殖特征。结论:利用Thy1和c-Kit两个特异抗体结合的磁珠分选技术可以有效地将未分化和分化中的精原细胞分选出来,并将未分化的精原细胞进行体外培养。     

鳖甲肽脂质体药代动力学及肝靶向分析

目的:制备含DiR碘化物荧光染料的长循环脂质体(DiR-SSL),采用SD大鼠和BALB/c裸鼠进行荧光成像的体内靶向性研究,利用空白SSL包封含5-羧基荧光素(5-FAM)的鳖甲肽(HGRFG-5-FAM,HF)制备HGRFG-5-FAM-SSL(HFL),研究HF及HFL分别给药于大鼠的药代动力学。方法:采用薄膜分散法制备DiR-SSL及HFL,取2组SD大鼠分别尾静脉注射HF及HFL,其HF质量浓度及剂量一致,于不同时间点采血,利用多功能微孔板检测仪分析HF血药浓度,计算药代动力学参数;将DiR-SSL尾静脉注射于BALB/c裸鼠,分别于1,2,5,7,24 h活体成像,读取荧光强度值;取正常SD大鼠尾静脉注射DiR-SSL,24 h后解剖心、肝、脾、肺、肾于荧光成像系统成像并读取荧光强度值,将肝组织冷冻切片进行激光共聚焦扫描。结果:HF注射到SD大鼠体内,其半衰期(T_(1/2))仅0.826 h,而HFL在相同剂量下,T1/2和药时曲线下面积(AUC_(0-∞))分别为HF的16.253,11.899倍;在BALB/c裸鼠活体成像中,荧光主要集中于肝脏位置,随着时间增加荧光强度逐渐减弱;SD大鼠各脏器中的DiR-SSL荧光在肝脏中最强,注射24 h后DiR-SSL仍能在肝脏储留。结论:SSL递药系统能显著延长HF在SD大鼠体内的T_(1/2)。SSL递药系统具有肝靶向作用,提示该系统可作为药物载体进行肝靶向递药。     

局麻药与奥硝唑-甲磺酸培氟沙星联用的抑菌效果

目的：探讨口腔科4种常用局麻药分别与奥硝唑-甲磺酸培氟沙星联合的抑菌效果。方法：采用琼脂纸片扩散法，检测局麻药以0、5％、10％、15％、20％体积比例与奥硝唑-甲磺酸培氟沙星液混合制备的药敏纸片所形成的抑菌环直径变化（每张滤纸片所含奥硝唑-甲磺酸培氟沙星纯药物总量一致）。结果：所有药敏纸片形成的抑菌环相互问无统计学差异（P〉0．05）。结论：4种局麻药的分别与奥硝唑-甲磺酸培氟沙星联合的抑菌效果无影响，可以混合应用。     

点突变Uchl1不影响小鼠卵母细胞成熟

目的 通过观察突变蛋白与野生蛋白过量对卵母细胞成熟过程的影响,分析Uchl1在小鼠卵母细胞离体成熟中发挥的作用及其作用方式。方法 通过原核重组蛋白技术制备点突变（C90S和I93M）和野生型Uchl1蛋白,通过蛋白微量注射技术将突变蛋白与对照蛋白注射到未成熟卵母细胞,或体外培养液中添加突变蛋白与野生型蛋白,分析野生型Uchl1过量,或突变Uchl1-I93M蛋白添加,或泛素水解酶活性缺失的Uchl1-C90S突变蛋白添加,对于卵母细胞体外成熟的影响。结果 显微注射UCHL1融合蛋白的各组之间以及与注射PBS之间, GVBD率差异没有达到统计学显著性;同时培养液中添加Uchl1的GST融合蛋白,相对于无注射对照组,也没有统计学显著差异（P>0.05）。注射GST-C90S融合蛋白组少量GV期卵母细胞体外发育为MII期卵母细胞后呈现极体偏大于对照组。I93M点突变小鼠与WT小鼠比较,GV期卵母细胞体外GVBD率无显著差异。结论 在小鼠卵母细胞中,添加外源性Uchl1,或者有毒性作用的I93M突变体,或者水解酶活性结构改变的C90S突变体,均不影响卵母细胞成熟的GVBD进程。即使构建的I93M点突变小鼠卵母细胞GVBD率无异常。但是,其水解酶活性位点突变影响极体的形成。     

腺样囊性癌细胞系中肿瘤干细胞的生物学特性初探

目的：对腺样囊性癌细胞系ACC-2中不同表型的肿瘤细胞生物学特性进行分析和研究,为肿瘤干细胞学说提供实验依据。方法：采用单细胞体外培养法,了解腺样囊性癌细胞(ACC-2)的分裂、增殖特点；采用免疫组化方法,检测ACC-2细胞表面CD44和CD24表达的差异性；应用免疫磁珠技术,分离不同表型的ACC-2细胞后,以裸鼠成瘤试验了解不同表型ACC-2细胞的成瘤能力。采用SPSS10．0统计软件包对所得数据进行X~2检验。结果：体外单细胞培养的ACC-2,仅有4．5%可持续分裂、增殖。CD44-和CD44 /CD24 细胞在体外培养条件下均无长期存活能力。不同表型的ACC-2动物成瘤试验结果显示,CD44 /CD24-亚群的ACC-2细胞最低成瘤接种细胞数显著低于常规ACC-2细胞,CD44-和CD44 /CD24 细胞则均无成瘤能力。免疫组化染色证实,CD44 /CD24-肿瘤细胞具有分化为其他表型肿瘤细胞的能力。结论：细胞表面抗原为CD44 CD24-的肿瘤细胞仅占ACC-2肿瘤细胞的极少部分,这些细胞具有极强的增殖能力和分化为其他表型肿瘤细胞的能力。ACC-2肿瘤细胞的增殖和成瘤能力源于CD44 / CD24-细胞亚群。未分离的ACC-2细胞与CD44 /CD24-ACC-2细胞在与细胞分化、凋亡、黏连、信号传导等有关的基因上存在差异。提示ACC-2中存在肿瘤干细胞,而CD44 /CD24-是ACC-2肿瘤干细胞必须兼备的表面标志。     

幽门螺杆菌对4种抗菌药物的敏感性检测及意义

目的 检测H．pylori(幽默门螺杆菌)对阿莫西林、克拉霉素、左旋氧氟沙星和替硝唑的敏感性。方法 琼脂稀释法检测药物最低抑菌浓度。结果 52株临床分离菌株中,替硝唑耐药菌株90．4％(47／52),阿莫西林耐药菌株11．5％(6／52),克拉霉素耐药菌株25％(13／52),左旋氧氟沙星耐药菌株1．9％(1／52)。对阿莫西林、克拉霉素和替硝唑同时耐药的9．6％(5／52),这些菌株对左旋氧氟沙星均敏感。结论 本地区H．pylori耐药菌株多见,替硝唑在体外对幽门螺杆菌几乎没有抗菌活性,左旋氧氟沙星是一种可供选择的治疗幽门螺杆菌感染的药物。