维生素A对糖基化终末产物诱导的角膜上皮细胞损伤的作用及机制研究

目的糖基化终末产物(AGEs)在糖尿病患者在角膜外伤或接受角膜手术时极易出现角膜上皮愈合延迟甚至不愈的过程中起着关键作用,本文研究维生素A(VA)对以糖基化终末产物AGE-BSA诱导角膜上皮细胞损伤的影响及可能的作用机制。方法以HCE-2细胞为研究对象,AGE-BSA为诱导剂,试剂盒检测VA对细胞凋亡率及线粒体膜电位的影响,荧光显微镜检测细胞内凋亡小体,Western blot检测相关的蛋白表达量。结果VA抑制AGE-BSA诱导的HCE细胞凋亡,调节AGEBSA引起的凋亡相关蛋白的变化。同时,VA与JNK的抑制剂同等程度的减少AGE-BSA诱导的JNK和NF-κB的磷酸化。结论VA可能通过抑制JNK介导的NF-κB炎症通路而起到减少AGE-BSA诱导的角膜上皮细胞凋亡的作用,可以作为糖尿病患者角膜上皮损伤的保护剂。     

C1GALT1在恶性肿瘤中的相关研究进展

糖基化是蛋白质翻译后修饰的一种重要方式，而异常的蛋白质O-糖基化被认为是恶性肿瘤的一种潜在标志物。核心1β13-半乳糖基转移酶1（core 1 β1-3 galactosyltransferase 1，C1GALT1）为合成黏蛋白型O-聚糖的核心1（core 1）结构的必需酶，其作用是将半乳糖（Gal）转移至GalNAcαSer/Thr上形成Galβ1-3GalNAcαSer/Thr结构。C1GALT1在呼吸系统、胃肠系统和泌尿生殖系统等多种恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用，调控多种肿瘤相关蛋白的O-糖基化修饰，不仅参与了肿瘤的增殖、侵袭转移、放疗抵抗及耐药等恶性表型的调控，还与患者的临床病理特征及预后密切相关。本文对C1GALT1在恶性肿瘤中最新研究进展进行综述，并探讨C1GALT1作为治疗靶点的前景。      

单抗N糖分析系统适用性对照品的建立

目的建立单抗N糖分析方法的系统适用性对照品,并设定相应的系统适用性要求。方法利用液质联用(LC-MS)仪对N糖系统适用性对照品进行N糖型的表征鉴别,并对对照品进行稳定性评价。结合方法特点和验证数据,对系统适用性要求进行设定。结果建立的系统适用性对照品具有良好的稳定性,其糖型涵盖了单抗主要的N糖型种类。针对3种药典拟收录的单抗N糖分析方法,设定了以下系统适用性要求,包括:图谱与典型图谱相似、G1F(1,6)和G1F(1,3)的分离度应满足具体要求、G0F%应在规定的范围内、G0F保留时间的RSD应≤4%。结论建立了单抗N糖系统适用性对照品,可配合3种2020年版《中国药典》拟收录的N糖分析方法使用。     

高迁移速率蛋白和终末期氨基糖基化受体在退行性主动脉瓣膜钙化中的表达及临床意义

目的检测高迁移速率蛋白(high mobility group box 1 protein,HMGB1)、终末期氨基糖基化受体(receptor of advanced glycation endproducts,RAGE)在退行性主动脉瓣膜钙化(calcific aortic valve disease,CAVD)病人瓣膜中的表达,并探讨其与CAVD病人发生发展及临床特征的相关性。方法通过免疫组化法检测病人瓣膜组织中HMGB1及RAGE的表达,分析其表达与瓣膜钙化的临床特征及血清中甘油三酯、总胆固醇等表达的相关性。结果 HMGB1在CAVD病人组织中的表达率为62.3%,正常瓣膜组织为6.3%,两组比较差异有统计学意义(P0.05),RAGE在CAVD病人瓣膜中的表达率为53.6%,正常瓣膜组织为31.3%,两组比较差异有统计学意义(P0.05);相关性分析显示,CAVD病人瓣膜组织中HMGB1和RAGE的表达呈负相关(r=-0.363,P0.05)。HMGB1及RAGE的表达与总胆固醇、低密度脂蛋白、年龄、瓣膜钙化程度相关(P0.05)。结论 CAVD病人组织中HMGB1及RAGE高表达,HMGB1与RAGE的表达与瓣膜钙化程度正相关。在CAVD瓣膜组织中,HMGB1、RAGE可能是有利于临床判断CAVD程度及指导临床治疗的生化指标。     

不同证型慢性非萎缩性胃炎患者唾液淀粉酶的活性、蛋白含量、比活力及其N-糖基化程度

目的分析不同证型慢性非萎缩性胃炎患者唾液淀粉酶(sAA)的活性、蛋白含量、比活力及其N-糖基化程度。方法 68例慢性非萎缩性胃炎患者按中医辨证分为脾气虚弱组(24例)、脾虚湿热组(33例)、肝胃不和组(11例),另设健康对照组(36名),采集各组酸刺激前后的唾液,检测sAA活性、蛋白含量、比活力及其N-糖基化程度,并分析sAA活性、蛋白含量的酸刺激前后比值。结果与本组酸刺激前比较,酸刺激后健康对照组sAA活性及蛋白含量均升高,sAA比活力均明显下降(P0.05)。与健康对照组比较,酸刺激后脾气虚弱组、脾虚湿热组sAA活性比值、蛋白含量比值1及糖基化缺失的例数均增高(P0.05),酸刺激前脾虚湿热组sAA比活力高于健康对照组(P0.05)。酸刺激后,健康对照组、脾虚湿热组、脾气虚弱组的sAA比活力均较酸刺激前明显下降(P0.05),但组间比较差异无统计学意义(P0.05)。肝胃不和组的各项分析指标与健康对照组差异无统计学意义(P0.05)。结论慢性胃炎脾气虚弱证及脾虚湿热证sAA的活性、蛋白含量及N-糖基化程度发生异常改变,脾运化功能的强弱可在唾液蛋白质分泌中有较为客观的反映。     

解偶联蛋白1基因多态性与2型糖尿病心脑血管并发症的相关性

目的探讨解偶联蛋白1(UCP1)基因多态性与2型糖尿病(T2DM)心脑血管并发症的相关性。方法选取2019年7月—2020年7月住院治疗的T2DM 440例,根据有无心脑血管并发症分为观察组(T2DM合并心脑血管并发症)221例和对照组(单纯T2DM)219例。比较两组一般资料,UCP1在rs45539933、rs10011540及rs1800592位点的基因型分布与等位基因频率;通过多因素Logistic回归分析评估T2DM发生心脑血管事件的危险因素。结果观察组病程长于对照组,糖化血红蛋白水平高于对照组,而血清高密度脂蛋白胆固醇水平低于对照组(P<0.01)。观察组C/C基因型分布及C碱基频率均高于对照组(P<0.05)。C/C基因型是T2DM患者发生心脑血管并发症的危险因素(P<0.05)。结论UCP1基因多态性与T2DM心脑血管并发症的发生显著相关。     

煮炸鹿茸加工过程中晚期糖基化终产物生成规律及动力学分析

目的研究煮炸鹿茸加工过程中晚期糖基化终产物的生成规律及动力学参数。方法通过构建葡萄糖与赖氨酸模拟煮炸鹿茸加工过程美拉德(Maillard)反应体系,分别采用紫外-可见分光光度法和UPLC-MS/MS法测定体系褐变指数和典型晚期糖基化终产物(羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸)含量变化,探讨晚期糖基化终产物的生成规律和动力学参数。结果鹿茸加工过程中煮炸时发生褐变反应,生成羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸反应的活化能分别为5.07、40.44、78.47 kJ/mol,且均为零级反应;烘烤时相应反应的活化能分别为6.72、89.34、164.77 kJ/mol,也均为零级反应。相对于生成羧甲基赖氨酸而言,生成羧乙基赖氨酸所需能量更高,反应更难发生。结论烘烤过程温度变化对晚期糖基化终产物的动力学参数影响显著高于煮炸过程,长时间较高温度的烘烤使鹿茸中产生了较多的晚期糖基化终产物,这些结果为鹿茸加工过程中晚期糖基化终产物的阻断、抑制策略提供了理论基础,对生产绿色安全的鹿茸及加强中药安全具有重要意义。     

石斛多糖对SHR氧化应激反应和晚期糖基化终产物代谢的影响

目的探讨石斛多糖对自发性高血压大鼠(SHR)氧化应激和晚期糖基化终产物(AGE)代谢的药效及其剂量。方法提取石斛多糖,将SHR大鼠随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组四个组,对照组给予开水,低剂量组、中剂量组和高剂量组分别给予石斛多糖100 mg/d、300 mg/d、500 mg/d,干预2个月,比较干预后各组超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、AGE、可溶性AGE受体(sRAGE)和全长AGE受体(RAGE)mRNA水平。结果对照组SOD、CAT和MDA平均水平分别为(111.26±23.36)U/L、(59.58±13.48)U/L和(19.77±1.61)μmol/L,低剂量组为(151.18±23.76)U/L、(63.36±12.40)U/L和(10.95±2.07)μmol/L,中剂量组为(177.03±29.00)U/L、(76.35±11.20)U/L和(8.83±1.91)μmol/L,高剂量组为(182.77±21.62)U/L、(85.83±11.58)U/L和(6.94±1.84)μmol/L。与对照组比较,低剂量组SOD水平较高,MDA水平较低,差异有统计学意义(P<0.01),中剂量组和高剂量组SOD、CAT水平较高,MDA水平较低,差异有统计学意义(P<0.01)。对照组AGE、sRAGE和RAGE mRNA平均水平分别为(6.43±0.78)mg/L、(1.09±0.18)mg/L和(0.94±0.11),低剂量组为(6.40±0.80)mg/L、(1.41±0.19)mg/L和(0.90±0.08),中剂量组为(5.99±0.67)mg/L、(1.70±0.20)mg/L和(0.84±0.15),高剂量组为(4.67±0.69)mg/L、(1.95±0.22)mg/L、(0.54±0.10)。与对照组比较,低剂量组、中剂量组sRAGE水平较高,差异有统计学意义(P<0.01),高剂量组AGE、RAGE mRNA水平较低,sRAGE水平较高,差异有统计学意义(P<0.01)。石斛多糖对MDA、SOD、AGE、sRAGE和RAGE mRNA平均水平有剂量效应关系,纠正SHR氧化应激功能紊乱的有效剂量为300 mg/d;纠正SHR晚期糖基化终产物及其受体功能紊乱的有效剂量为500 mg/d。结论石斛多糖可有效缓解SHR的氧化应激功能紊乱,降低AGE水平,提高sRAGE水平,降低RAGE基因的活化,对缓解SHR的血管重塑有积极的作用。其药效有剂量效应关系,中等剂量可有效改善氧化应激症状,高剂量能改善AGE其受体症状。