早期电针干预对SAMP8小鼠学习记忆能力和海马磷酸化Tau蛋白水平的影响

目的:探讨早期电针"百会""大椎""肾俞"穴对快速老化小鼠(SAMP8小鼠)学习记忆能力和海马磷酸化Tau蛋白表达的影响,为临床电针治疗阿尔茨海默病(AD)时间点的选择提供参考。方法:将36只3月龄SAMP8小鼠随机分为模型组、3月龄电针组、9月龄电针组,每组12只;以12只同龄正常老化SAMR1小鼠作为空白对照组。3月龄电针组及9月龄电针组分别于小鼠3月龄及9月龄时予电针"百会""大椎""肾俞"穴治疗(连续波,2 Hz,1.5~2 mA),20 min/次,每日1次,8 d为一疗程,疗程间隔2 d,共治疗3个疗程。每组小鼠在水迷宫检测学习记忆能力结束后统一于10月龄取材;免疫组织化学法、免疫蛋白印迹法(Western blot)检测小鼠海马磷酸化Tau蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检测小鼠海马Tau mRNA表达。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.01),原平台象限停留时间较短,跨越平台次数减少(P<0.01),海马磷酸化Tau蛋白及Tau mRNA表达较高(P<0.01);与模型组比较,3月龄电针组及9月龄电针组小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),原平台象限停留时间延长,跨越平台次数增多(P<0.05),小鼠海马磷酸化Tau蛋白及Tau mRNA表达降低(P<0.05);与9月龄电针组比较,3月龄电针组小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),原平台象限停留时间延长,跨越平台次数增多(P<0.05),海马磷酸化Tau蛋白及Tau mRNA表达降低(P<0.01)。结论:早期电针干预能更有效地改善SAMP8小鼠学习记忆能力并降低其海马磷酸化Tau蛋白水平。     

沉默GOLPH3基因表达逆转人结肠癌细胞顺铂耐药的研究

背景与目的：化疗是结肠癌的重要治疗方法之一，其方案常含有铂类药物，而化疗耐药会影响结肠癌疗效和预后，其发生机制与基因异常表达有关。高尔基磷酸化蛋白3（Golgi phosphoprotein 3，GOLPH3）是一个癌基因，在结肠癌组织中存在过表达，可促进结肠癌细胞的增殖，与预后不良相关。目前，GOLPH3基因的高表达与结肠癌对铂类耐药的相关性尚不明确。探讨沉默GOLPH3基因逆转人结肠癌HT29细胞对顺铂的化疗耐药效应和机制。方法：HT29细胞分为5组。① 对照组：人结肠癌HT29细胞；② 转染组：siRNA-GOLPH3转染HT29细胞；③ 实验组1：经顺铂处理的HT29细胞；④ 实验组2：经顺铂处理的siRNA-GOLPH3转染HT29细胞；⑤ 实验组3：经顺铂和细胞外调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated protein kinases，ERK）1/2抑制剂PD98059处理的HT29细胞。四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法、平板克隆形成实验检测各组结肠癌HT29细胞增殖及克隆形成能力。蛋白质印迹法（Western blot）检测GOLPH3、P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）、ERK1/2和pERK1/2蛋白的表达。结果：经顺铂处理后，实验组1、实验组2的细胞在波长490 nm处的吸光度（D）值均显著低于对照组（P<0.05），实验组2的D₄₉₀值显著低于实验组1（P<0.001）；实验组1和实验组2的细胞集落数均显著低于对照组（P<0.01），实验组2的细胞集落数显著低于实验组1（P<0.001）。实验组1的P-gp、GOLPH3、pERK1/2蛋白表达量显著高于实验组2（P<0.01）；实验组3的P-gp蛋白表达量较实验组1显著降低（P<0.01）。结论：沉默GOLPH3基因可通过抑制丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶（mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase，MAPK/ERK）信号通路逆转HT29结肠癌细胞对顺铂化疗的耐药性。     

胶质瘤中MKK7与c-Jun磷酸化的表达及其相关性

目的 探讨胶质瘤中MKK7和c-Jun磷酸化（p-c-Jun）的表达及意义，分析两者表达的相关性。方法 选取弥漫型星形细胞瘤（15例）、少突胶质细胞瘤（5例）、间变性星形细胞瘤（11例）、间变性少突胶质细胞瘤（8例）、胶质母细胞瘤（53例）及其瘤旁正常脑组织（25例）共117例，采用免疫组织化学法检测MKK7、c-Jun及p-c-Jun的表达。体外培养神经胶质瘤细胞株U87，用脂质体转染MKK4-siRNA、MKK7-siRNA和对照siRNA，48 h后Western blot检测MKK7、c-Jun及p-c-Jun的表达水平。结果 胶质母细胞瘤中p-c-Jun及MKK7的表达均明显高于其他组织学类型胶质瘤及胶质母细胞瘤瘤旁正常脑组织中的表达（P=0.000, P=0.000）。随着胶质瘤WHO分级的升高，p-c-Jun及MKK7的表达增高，且与WHO分级呈明显正相关（r=0.494, P=0.000; r=0.606, P=0.000）。胶质瘤及胶质母细胞瘤瘤旁正常脑组织中MKK7与p-c-Jun的表达存在正相关关系（r=0.387, P=0.000）。沉默神经胶质瘤细胞株U87 MKK7表达抑制了c-Jun磷酸化水平。结论 MKK7可以通过调控JNK/c-Jun活性进而促进胶质母细胞瘤的发生。     

板桥党参通过PP2A信号通路改善AD模型大鼠认知功能障碍

目的探讨板桥党参(BCP)对冈田酸(OA)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠认知功能的保护作用及其可能机制。方法将SD大鼠随机分为DMSO组﹑OA组﹑BCP低、中、高治疗组,每组分1周和2周组灌胃。水迷宫训练5 d,训练结束24 h后造模,DMSO组大鼠双侧脑海马各注射10%DMSO 1.5μL,OA组和BCP治疗组同位置注射OA(0.392 mmol·L~(-1))1.5μL。造模后,水迷宫测试观察大鼠空间学习能力;Western blot检测各组海马PP2A活性、Tau蛋白磷酸化水平及突触蛋白表达情况;尼氏染色观察大鼠海马CA1﹑CA3区尼氏小体变化情况。结果水迷宫实验发现,BCP能改善AD大鼠空间记忆障碍;Western blot结果显示,BCP能提高PP2A活性,增加突触蛋白表达量,同时减少Tau蛋白磷酸化水平。尼氏染色提示,BCP治疗组尼氏小体数量增加。结论 BCP能上调PP2A活性,降低Tau蛋白的磷酸化水平,同时提高突触相关蛋白表达水平,修复受损神经元。     

负荷渐增式训练对老年小鼠骨骼肌卫星细胞AMPK磷酸化的影响

目的 探讨负荷渐增式训练对老年小鼠骨骼肌卫星细胞腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）磷酸化的影响。方法 实验小鼠分为 3 组：青年对照组（YC组，n=12）、老年对照组（OC组，n=12）与老年运动组（OT组，n=12）。OT组进行负荷渐增式训练，流式细胞分选技术分离CD45-/CD31-/Sca1-/VCAM(CD106)+细胞群体，分选细胞通过desmin、Myod肌原性染色以及成肌分化诱导培养进行肌卫星细胞鉴定，免疫组化结合Western blotting方法检测肌卫星细胞p-AMPK水平。结果 YC组骨骼肌卫星细胞AMPK及p-AMPK表达水平显著高于OC组（P<0.05）；OT组与OC组AMPK表达无明显变化（Ｐ>0.05），而OT组p-AMPK表达水平显著高于OC组（P<0.05）。结论 负荷渐增式训练可促进老年小鼠骨骼肌卫星细胞AMPK磷酸化，改善老年小鼠骨骼肌能量代谢。     

创伤性脊柱骨折合并脊髓损伤患者血清pNF-H动态变化及其与脊髓损伤程度的相关性

目的 探讨创伤性脊柱骨折合并脊髓损伤患者血清磷酸化高分子量神经微丝蛋白(pNF-H)动态变化与脊髓损伤程度的相关性.方法 回顾性分析2017年1月—2019年1月平煤神马医疗集团总医院脊柱外科收治的创伤性脊柱骨折患者94例,其中合并脊髓损伤48例(脊髓损伤组),男性35例,女性13例;年龄18～60岁,平均50.7岁;致伤原因:道路交通伤20例,摔伤16例,高处坠落伤7例,砸伤5例.单纯脊柱骨折46例(单纯骨折组),男性30例,女性16例;年龄18～60岁,平均50.8岁;致伤原因:道路交通伤18例,摔伤13例,高处坠落伤8例,砸伤7例.选取同期笔者医院进行体检的健康者40例作为健康对照组,男性30例,女性10例;年龄18～60岁,平均50.8岁.比较各组间伤后12h、24h、3d、7d、14d血清pNF-H浓度变化;并分析脊髓损伤组不同美国脊髓损伤协会(ASIA)神经功能分级患者12h、24h、3d、7d、14d时血清pNF-H浓度变化,采用Spearman检验分析血清pNF-H动态变化与ASIA神经功能分级的相关性.结果 伤后12h、24h、3d、7d、14d,脊髓损伤组血清pNF-H浓度高于相应时间点单纯骨折组、健康对照组(P<0.05),单纯骨折组血清pNF-H浓度高于相应时间点健康对照组(P<0.05).不同ASIA分级患者不同时间点血清pNF-H浓度比较差异有统计学意义(P<0.05);在12h、24h、3d、7d、14d时A级患者血清pNF-H浓度高于B、C、D级(P<0.05),B级患者血清pNF-H浓度高于C、D级(P<0.05),C级患者血清pNF-H浓度高于D级(P<0.05);血清pNF-H与A-SIA分级存在负相关(r=-0.951,P<0.05).结论 创伤性脊柱骨折合并脊髓损伤患者血清pNF-H浓度随时间变化,而ASIA分级越严重血清pNF-H浓度越高.     

基于泛素-蛋白酶体途径探讨远志散“益气化痰开窍”治疗阿尔茨海默病的科学内涵＊

阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease，AD）是一种常见的神经系统退行性疾病，磷酸化Tau蛋白异常聚集所形成的神经纤维缠结（Neurofibrillary tangles，NFTs）是AD的典型病理特征，直接参与AD的发生发展。因此，AD的治疗可从调节磷酸化Tau蛋白异常聚集入手。中医学认为“痰浊”是导致AD发生的重要病理因素之一，“正气亏虚，痰浊蒙窍”是AD的核心病机。“痰浊”与磷酸化Tau蛋白异常聚集密切相关，磷酸化Tau蛋白异常聚集可归属“痰浊”的范畴。化痰开窍与减少磷酸化Tau蛋白聚集在AD的治疗中有不谋而合之处。泛素-蛋白酶体系统（Ubiquitin-proteasome system，UPS）是细胞内蛋白降解的主要途径，参与AD进程中磷酸化Tau蛋白的降解。UPS功能受损是磷酸化Tau蛋白异常聚集和AD发生的重要原因。本文试图从中医“痰”的视角认识磷酸化Tau蛋白异常聚集，探讨中医“痰浊”与现代医学磷酸化Tau蛋白异常聚集的相关性，并从UPS视角提出益气化痰开窍法治疗AD的作用机制假说，推测UPS可能是远志散益气化痰开窍干预AD的主要途径，精确调控UPS可能是未来研究防治AD的新视角，为科学阐释通过调控UPS蛋白降解途径治疗AD的作用机制提供新思路。     

线粒体氧化磷酸化抑制剂FCCP体外对人精子动力学和线粒体功能的影响

目的通过线粒体氧化磷酸化(OXPHOS)特异性抑制剂FCCP对人精子活动力及其线粒体功能影响的研究,探讨氧化磷酸化在精子能量代谢中的作用。方法选择来自捐精志愿者的正常精液8份,优选后制备精子悬液,将每份精子悬液分为4组,分别与终浓度为0μmol/L(对照组)、2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L的FCCP共孵育1h、3h、5h,以精子动力学参数、线粒体膜电位、精子细胞内ATP含量、精子质膜完整性作为评价指标,分析比较各组间的差异。结果 (1)各组精子活动率和其他各项运动参数随着FCCP浓度增高呈下降趋势:孵育1h后,与对照组相比,仅10μmol/L组的精子活动率、前向运动百分率和精子头侧摆幅度(ALH)显著下降(P0.05),其余指标无显著性变化,而其余浓度处理组的各指标变化均无统计学意义(P0.05);孵育3h后,10μmol/L组的精子活动率、前向运动百分率、平均路径速率(VAP)、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)、ALH和鞭打频率(BCF)均显著降低(P0.05),5μmol/L组的ALH和BCF指标显著下降(P0.05);孵育5h后,与对照组相比,10μmol/L组的前述指标继续显著性下降(P0.05),5μmol/L组的精子活动率和前向运动百分率也出现显著降低(P0.05),而2.5μmol/L组各指标差异均无统计学意义(P0.05)。(2)精子线粒体膜电位(MMP)和ATP含量随FCCP浓度增加逐渐降低,10μmol/L组的MMP和ATP含量显著低于对照组(P0.05)。(3)质膜完整性比较中,10μmol/L组比对照组显著降低(73.94%vs.84.53%)(P0.05)。(4)随着FCCP孵育时间延长,各组精子活动率和前向运动百分率呈下降趋势。结论不同浓度的FCCP体外处理精子后,精子活动率和其他各项运动参数,以及反映线粒体活性的线粒体膜电位和ATP含量呈浓度依赖性下降,FCCP所抑制的线粒体氧化磷酸化是精子能量代谢的重要途径。     

PI3K/Akt通路在缺氧活化钙敏感受体介导的A549细胞转移中的作用

目的探讨PI3K/Akt信号通路在缺氧活化钙敏感受体(calcium sensing receptor,Ca SR)介导的A549及A549/DDP细胞转移中的作用。方法将处于对数生长期的A549及A549/DDP细胞随机分为对照组、缺氧组、缺氧+Gd Cl_3(Ca SR激动剂)组、缺氧+NPS2143(Ca SR抑制剂)组、缺氧+LY294002(PI3K通路抑制剂)+Gd Cl_3组。应用Western blot分析不同处理情况下,Ca SR、MMP-2及p-Akt蛋白在A549、A549/DDP细胞的表达水平;采用细胞划痕及Transwell小室方法,检测不同处理因素对细胞迁移和侵袭能力的影响;应用ELISA法,分析不同处理因素对A549及A549/DDP细胞分泌MMP-2蛋白的影响。结果与对照组比较,缺氧能够增强A549及A549/DDP细胞Ca SR的表达,增强细胞迁移能力,提高细胞及培养液中MMP-2蛋白表达水平、促进Akt蛋白的磷酸化,NPS2143能减弱缺氧的作用,Gd Cl_3放大缺氧的作用,而LY294002抑制缺氧和Gd Cl_3的上述作用。结论缺氧活化Ca SR促进A549及A549/DDP细胞转移,其机制可能涉及PI3K/Akt通路。