基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白技术检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA方法的建立

目的建立一种基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas13a)的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)检测方法。方法提取2017年6月至2020年10月于首都医科大学附属北京佑安医院就诊的4例乙型肝炎患者肝脏总DNA后,使用HindⅢ内切酶和质粒安全性ATP依赖DNA酶(PSAD)分别进行酶切;根据松弛环状DNA(rcDNA)和cccDNA的结构差异,设计特异性扩增HBV cccDNA的引物,对酶切后的产物进行滚环扩增(RCA)和PCR扩增;并筛选crRNA,建立基于CRISPR/Cas13a技术的HBV cccDNA检测新方法。结果利用α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)和HBV表面抗原(HBsAg)引物对双重酶切后的产物进行扩增,验证产物中HBV基因组的存在;利用HBV cccDNA和HBV rcDNA引物对PSDA酶切后的产物扩增,验证了产物中只存在HBV cccDNA;利用RCA后的阳性样本作为模板梯度稀释,然后进行PCR扩增转录后使用CRISPR/Cas13a检测,计算出检测下限为10拷贝/μl。结论本研究建立了RCA-PCR-CRISPR-Cas13a的新型检测方法,可对HBV cccDNA进行高灵敏度和高特异性检测,为乙型肝炎患者抗病毒治疗评估、治疗终点的确定以及调整治疗方案提供了有效的监测手段。     

微型种植体支抗在口腔正畸治疗中的应用效果

目的观察微型种植体支抗治疗口腔畸形的效果。方法收集我院2015年9月至2016年9月66例进行口腔正畸治疗患者,观察使用微型种植体支抗治疗患者口腔畸形的不良反应、术后磨牙位置、上中切牙倾角情况及凸距差。结果患者不良反应发生率为3.03%,术后磨牙位置为(3.56±0.03)mm,上中切牙倾角为(28.78±2.62)°,上中切牙凸距差为(4.72±0.64)mm。结论在治疗患者口腔正畸中使用微型种植体支抗,效果显著,具有临床使用及推广价值。     

巩膜外黄斑外垫压术治疗硅油填充术后复发性超高度近视黄斑裂孔性视网膜脱离

目的　探讨巩膜外黄斑外垫压术治疗硅油填充术后复发性超高度近视黄斑裂孔性视网膜脱离（macular hole retinal detachment，MHRD） 的可行性及疗效。方法　回顾性分析 2016年6月至2018年1月玻璃体切割硅油填充术后的复发性超高度近视MHRD患者10例（10眼），所有患者均由同一术者行巩膜外黄斑外垫压术，将MEDPOR种植体+人造血管+环扎条带制成的“三明治加压块”固定垫压于黄斑区，术后行眼眶CT检查明确加压块位置。术后6~12个月取出硅油。术后随访18个月，观察并记录术后并发症、视网膜脱离复位、黄斑裂孔闭合情况、术后视力、眼轴长度等指标。结果　眼眶CT显示10眼加压块均位于黄斑区；末次随访 SD-OCT示10眼视网膜完全复位，7眼黄斑裂孔完全闭合，3眼黄斑裂孔部分闭合；9眼术后最佳矫正视力（best corrected visual acuity，BCVA）较术前提高，1眼提高不明显；术前患者 BCVA为（1.55±0.26）LogMAR，术后3个月BCVA为（0.99±0.05）LogMAR，与术前比较差异有统计学意义（P<0.001）；术前患者眼轴长度为（31.27±1.18）mm，术后3个月为（28.81±0.87）mm，与术前比较差异有统计学意义（P<0.001）。所有患眼均未发生眼底出血、眼内炎、涡静脉回流障碍、眼前部缺血综合征等并发症。结论　巩膜外黄斑外垫压术是治疗硅油填充术后复发性超高度近视MHRD安全有效的手术方法，能提高视网膜解剖复位率、黄斑裂孔闭合率和视力。     

三种不同伤椎置钉方案在胸腰椎爆裂性骨折行椎弓根钉内固定手术的疗效比较

目的探讨在后路短节段椎弓根钉棒内固定手术治疗胸腰椎爆裂性骨折中,伤椎置钉与否以及置钉长度对疗效的影响。方法自2012年4月-2016年4月,纳入92例胸腰椎爆裂性骨折患者,采用随机数字表法将其分为三组:A组27例,伤椎不置钉处理; B组35例,伤椎置入短钉; C组30例,伤椎置入长钉。三组均予以后路短节段椎弓根钉棒内固定手术治疗。术后随访2年以上,对三组的疗效指标进行对比。结果三组患者术后神经功能均有较好的恢复,组间无显著性差异(P0.05)。三组术后伤椎前缘高度和后凸Cobb角均得到良好矫正,但A、B组均显著优于C组(P0.05);术后2年时,两项指标均有一定的矫正度丢失率,A组显著大于B、C两组(P0.05)。三组术后的椎管面积均有所改善,A、B两组改善率显著大于C组(P 0.05)。术后随访期间,A组内固定失败总发生率为14.81%,显著高于B组5.72%和C组的3.33%(P0.05)。结论经伤椎置钉可显著降低矫正度丢失率和内固定失败率;但伤椎置入长钉时,其矫正效果和椎管面积恢复效果均差于短钉。     

短管兔耳草化学成分的研究

目的研究短管兔耳草Lagotis brevituba Maxim的化学成分。方法短管兔耳草70%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、MCI柱和制备液相色谱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到10个化合物,分别鉴定为3,4-二甲氧基苯甲醛(1)、3,4-二甲氧基苯丙酸(2)、阿魏酸甲酯(3)、邻苯二甲酸二丁酯(4)、木犀草素(5)、柯伊利素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、香叶木素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、4-p-香豆酸-O-α-D-吡喃葡萄糖苷(8)、4-p-香豆酸-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、6-O-[α-L-(3-3,4-二甲氧基肉桂酰)-吡喃鼠李糖基]-梓醇(10)。结论化合物2～4、8～10为首次从该属分离得到,化合物1～4、8～10为首次从该植物中分离得到。     

甲状腺乳头状癌组织常染色体和性染色体STR基因座变异分析

目的：探讨甲状腺乳头状癌组织中短串联重复序列（STR）基因座变异规律以及显微切割技术在肿瘤组织鉴定中的应用，为甲状腺乳头状癌组织的个体识别及亲缘关系鉴定提供依据。方法：收集43例人甲状腺乳头状癌和癌旁正常组织经激光显微切割获取肿瘤细胞和间质细胞，采用Chelex-100法提取DNA，分别采用Goldeneye^® DNA 22NC、Goldeneye^® DNA 27YB和Goldeneye^® DNA 17X试剂盒进行常染色体和性染色体STR基因座PCR扩增，ABI 3500遗传分析仪检测进行STR分型。结果：甲状腺乳头状癌组织肿瘤间质细胞与对应癌旁组织的STR分型一致。43例癌组织的肿瘤细胞有9例STR基因座发生了变异，在常染色体和X染色体联合检测的37个STR基因座共检出11次变异（常染色体变异7次，X染色体变异4次），其中等位基因增加3次，部分杂合性丢失6次，出现新等位基因2次，并且同一甲状腺乳头状癌肿瘤细胞可同时发生多种变异。Y染色体STR基因座没有检出变异。结合实验结果与患者临床资料分析，STR基因座的变异与甲状腺乳头状癌患者的临床分期、性别无明显相关关系，与患者的年龄正相关，差异具有统计学意义（P < 0.05）。结论：甲状腺恶性肿瘤组织常染色体和X染色体STR基因座存在变异，而且变异更可能发生在年龄大的甲状腺乳头状癌组织中，在司法鉴定中进行STR分型时应谨慎判型。显微切割技术可准确分离间质细胞，是解决此类恶性肿瘤组织检材涉及的案件进行身源鉴定的有效手段。