sEHi对颈动脉狭窄患者晚期内皮祖细胞功能的影响

目的研究不同浓度可溶性环氧化物水解酶抑制剂(soluble epoxide hydrolase inhibitor,s EHi)AUDA对颈动脉狭窄(carotid stenosis,CS)患者外周血来源的晚期内皮祖细胞(late endothelial progenitor cell,late EPC)的影响。方法入选研究对象60例,分成颈动脉狭窄组(n=35)和对照组(n=25)。密度梯度离心法,从外周血获取单个核细胞培养至21 d后鉴定内皮祖细胞;以不同浓度AUDA(0,0.1,1,10μmol/L)和晚期EPC共培养24 h,分别采用MTT法,黏附能力测定实验和Transwell小室来观察其增殖,黏附,迁移能力。同时采用Western blot法观察AUDA处理后其VEGF的表达。结果体外培养21 d时,细胞呈典型长梭形,21 d时,呈铺路石样,并可摄取FITCUEA-I和Dil-ac LDL。与对照组相比,CS患者late EPC的增殖,黏附和迁移能力均显著下降(P0.05);与处理前(0umol/L)相比,AUDA呈剂量依赖性地增强CS患者late EPC增殖,黏附和迁移能力并促进CS患者late EPC表达VEGF。结论 s EHi具有促进late EPC增殖,黏附和迁移等功能的作用,其有望成为一类治疗CS的新型药物。     

微粒体环氧化物水解酶基因多态性与膀胱移行细胞癌发生的关系

目的 探讨微粒体环氧化物水解酶(mEH)基因型与膀胱移行细胞癌(BTCC)的相关性.方法 应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性分析方法检测BTCC患者(BTCC组,216例)和健康人群(对照组,300例)mEH基因型频率的分布.设计流行病学调查问卷进行面访调查.结果 BTCC组野生型、杂合型和变异型mEH第3外显子(mEH-exon3)分别占60.6％、27.3％和12.0％,对照组分别占46.3％、39.0％和14.7％ (P＜0.05);杂合型mEH-exon3为BTCC发生的保护性因素(OR=0.56,95％ CI=0.41-0.82).BTCC组野生型、杂合型和变异型mEH第4外显子(mEH-exon4)分别占85.6％、13.4％和0.9％,对照组分别占82.3％、15.0％和2.7％(P＞0.05).吸烟的mEH-exon3野生型人群的BTCC风险高于不吸烟者(P＜0.05).结论 mEH-exon3非野生型可能是BTCC发生、发展中的保护性因素之一;吸烟为BTCC发生的重要危险因素.而mEH-exon4基因多态性和BTCC的发生无明显相关性.     

膝骨性关节炎病证特征及与COX-2的相关性研究

目的：研究膝骨关节炎不同病情分级、不同中医证型中COX-2表达差异，及不同证型、分级患者血清COX-2疗效差异性。方法选择我院2012年12月-2014年1月收入的膝关节退行性骨关节炎患者90例，分为肝肾亏虚型、气滞血瘀型、风寒湿痹型，各30例。收集3组对象血清，采用酶联免疫夹心法（ELISA法）对患者的COX-2进行检测。结果肝肾亏虚型患者的COX-2含量明显低于气滞血瘀型（t=9.8301，P=0.0000），也明显低于风寒湿痹型患者（t=6.3159，P=0.0000），气滞血瘀型患者的COX-2含量明显高于风寒湿痹型患者（t=3.2669，P=0.0018）。不同中医证型患者的COX-2含量有显著性差异（P〈0.01）。Ⅰ级X线等级患者的COX-2含量明显低于Ⅱ级X线等级患者的COX-2含量（t=4.7011，P=0.0000）；Ⅱ级X线等级患者的COX-2含量明显低于Ⅲ级X线等级患者的COX-2含量（t=3.0037，P=0.0044）；Ⅲ级X线等级患者的COX-2含量明显低于Ⅳ级X线等级患者的COX-2含量（t=4.6004，P=0.0000）。结论不同中医证型和不同X线片等级的COX-2表达存在差异性，气滞血瘀型和X线显示等级高的膝关节骨性关节炎患者COX-2表达增高。     

CYP2C9、VKORC1基因多态性及患者临床特征对心脏瓣膜置换术后华法林稳态剂量的影响

目的 研究湖北地区汉族人细胞色素P450酶2C9(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1基因型和临床特征与华法林稳态剂量的相关性.方法 收集2012年3-12月在我院行心脏瓣膜置换术后临床使用华法林的患者131例,记录患者的年龄、身高、体重、国际标准化比值(INR)、华法林稳态剂量等指标.采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PC R-RFLP)技术检测CYP2C9和VKORC1基因型.对基因型及临床特征与华法林稳态剂量进行直线相关及多元回归分析.结果 131例中CYP2C9基因型检测有125例为*1/*1型、6例为*1/*3型、未发现*2突变,*1/*3型较*1/*1型华法林需求量少(P＜0.05);VKORC1基因型检测有105例为AA型、25例为杂合子GA型、1例为纯合子GG型,AA型较GA型华法林需求量少(P＜0.01).相关性及多元回归分析均显示华法林稳态剂量与患者的年龄及不同的基因型有关.结论 在湖北地区汉族人群中,存在CYP2C9和VKORC1基因多态性,同时华法林稳态剂量与年龄及不同的基因型有关.     

CYP2C9和VKORC1基因多态性对华法林剂量的影响

华法林是临床上广泛使用的口服抗凝药物,其治疗范围窄,个体差异大,尤其在治疗初期,易导致严重的出血并发症,如何合理、安全使用成为国内外研究者关注的重点和难点。华法林的疗效受多种因素的影响,以遗传因素中基因多态性较为突出。近年来,随着药物基因组学的快速发展,研究发现药动学和药效学多个相关基因的多态性造成了华法林的个体差异。现从基因多态性角度综述CYP2C9和VKORC1基因的遗传变异对华法林药物反应差异的影响。     

黄芪、莪术配伍对胃癌细胞COX-2表达的调节作用

目的:观察黄芪、莪术配伍对MKN-45细胞COX-2、PPlAR-Y、NF-KB的影响.方法:以黄芪、莪术配伍作用于MKN-45细胞,并设塞莱希布组、罗格列酮组、黄芪组、莪术组和空白组相对照.用MTT法观察各组药物对胃癌细胞的抑制率,用RT-PCR以及Western blot方法检测给药后人胃癌细胞COX-2、PPARy、NF-KB基因及COX-2蛋白表达的变化.结果:各组对COX-2和NF-KB的mRNA表达均有抑制作用,除莪术外对PPARy mRNA均有促表达作用,其中以塞莱希布组和配伍组对COX-2 mRNA表达的抑制作用最为明显,且配伍组作用明显强于黄芪组和莪术组,以罗格列酮组和配伍组对NF-KB mRNA的表达抑制作用和对PPARy表达的促表达作用都是最明显.结论:黄芪、莪术配伍能起到增效作用,对细胞的抑制效应明显,对COX-2的抑制作用大于黄芪、莪术的单独效应,与塞莱希布相近,其对COX-2的抑制作用可能是通过PPARy/NFKB信号途径发挥作用的.     

中国汉族人群CYP2C9及VKORC1基因多态性及其对华法林用药剂量的相关性研究

目的分析中国汉族人群CYP2C9和VKORC1的基因多态性及其与华法林稳定维持剂量的相关性。方法回顾性研究。收集2017年10月至2018年4月在北京大学人民医院进行凝血分析检测的458例中国汉族患者,男性213例,女性245例,年龄范围26~94岁。采用PCR-荧光探针法检测CYP2C9*3位点和VKORC1-1639A>G位点基因多态性,458例患者中服用华法林进行抗凝治疗且凝血酶原时间国际标准化比值(INR)达标(在2.0~3.0范围内)的患者130例,记录患者基本信息、华法林用药剂量及凝血酶原时间国际标准化比值(INR),应用SPSS统计分析数据,与美国FDA推荐的不同基因型患者华法林推荐剂量的参考表格进行对比,并且对华法林预测剂量公式进行简单验证。结果458例抗凝患者中CYP2C9*1/*1(AA)基因型频率90.8%,CYP2C9*1/*3(AC)基因型频率8.5%,CYP2C9*3/*3(CC)基因型频率0.7%;VKORC1-1639GG基因型频率0.9%,VKORC1-1639AG基因型频率14.2%;VKORC1-1639AA基因型频率84.9%。在达到抗凝指标(国际标准化比值INR 2.0~3.0)后,结果显示CYP2C9*1/*3与*3/*3基因型患者平均每日剂量为(2.92±1.29);3(2.75,3.375)mg,低于野生型CYP2C9*1/*1基因型患者所需的平均每日华法林剂量(3.91±1.63);3(3,5)mg,差异有统计学意义(P=0.018)。VKORC1纯合突变基因型VKORC1-AA患者平均每日剂量为(3.68±1.64);3(3,4.31)mg,低于杂合基因突变型的平均每日剂量(4.54±1.29);4.5(3.28,6)mg,差异有统计学意义(P=0.001)。不同VKORC1+CYP2C9基因型患者的华法林应用剂量与美国FDA参考表格的推荐剂量具有一致性。Miao2007公式的预测准确度较IWPC公式低,且94.1%的患者华法林剂量被低估。结论携带CYP2C9*3突变基因或VKORC1-AA纯合突变基因型的患者所需华法林剂量较低,CYP2C9和VKORC1基因多态性与华法林稳定维持剂量具有一定的相关性。     

塞来昔布对高脂血症大鼠脑缺血再灌注后MMP-9和COX-2表达的影响

目的观察塞来昔布对高脂血症(hyperlipidemia,HL)大鼠脑缺血再灌注损伤后基质金属蛋白酶-9(metallopro-teinase-9,MMP-9)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响。方法健康雄性Wister大鼠70只随机分为4组:正常假手术组(S组)10只、正常缺血再灌注组(nIR组)20只、高脂缺血再灌注组(hIR组)20只和高脂缺血再灌注塞来昔布干预组(C+hIR组)20只。后3组又分为缺血1 h再灌注12 h、24 h、48h 3个时间点。采用高脂饮食建立高脂血症大鼠模型,应用线栓法制做大鼠大脑中动脉栓塞模型。用免疫组化法检测脑组织MMP-9、COX-2的表达,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定梗死灶体积。结果在同一缺血再灌注时间点,与nIR组比较,hIR组、C+hIR组脑组织MMP-9、COX-2表达明显增高(P<0.01),hIR组梗死体积增大具有统计学意义(P<0.01),C+hIR组梗死体积增大具有统计学意义(P<0.05);与hIR组相比,C+hIR组脑组织MMP-9、COX-2表达下降、梗死体积减小(P<0.01),脑缺血再灌注后脑组织中MMP-9、COX-2的表达有显著的相关性(r=0.835)。结论高脂血症合并脑缺血再灌注损伤病理过程中炎症反应起重要作用。塞来昔布对高脂脑缺血再灌注大鼠COX-2、MMP-9的过度表达产生抑制作用,干预炎症反应减轻脑缺血再灌注损伤。     

可溶性环氧化物水解酶抑制剂与心血管疾病

环氧二十碳三烯酸已被证明通过减少缺血再灌注损伤、抗炎、扩张血管等机制发挥心血管保护作用。可溶性环氧化物水解酶是使环氧二十碳三烯酸代谢和失活的主要酶类。因此可溶性环氧化物水解酶抑制剂抑制可溶性环氧化物水解酶,将提高环氧二十碳三烯酸的有益特性,成为治疗心血管疾病的有效措施。     

前列腺素E2在肾脏球旁器调节肾素分泌中的作用

目的 观察前列腺素E2（PGE2）对肾脏球旁器颗粒细胞（JGG）肾素分泌的调节作用。 方法 将小鼠肾脏致密斑细胞株（MMDD1）种植在特殊滤器上,滤器上下（细胞顶侧和基底侧）分别用不同培养基培养细胞,改变细胞顶侧培养基中钠离子、氯离子和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）浓度,分别测定不同时间点滤器上、下PGE2浓度。腹腔注射卡托普利（30 mg/kg）前后,放射免疫法测定野生型和环氧化酶基因敲除（COX-2-/-）小鼠血浆肾素活性(PRA)变化;原代分离COX-2-/-小鼠JGG,测定细胞上清肾素活性及其对PGE2刺激的反应。实时定量PCR测定低肾素（JGG细胞特异性Gsα基因缺失）小鼠肾脏皮质COX-2 mRNA表达。免疫组化法检测肾皮质COX-2蛋白表达。代谢笼中留取24 h尿,ELISA方法测定PGE2水平。 结果 (1)低氯刺激能使致密斑细胞分泌PGE2,不论基底侧还是细胞顶端PGE2浓度均显著增加（均P < 0.05）;但AngⅡ对致密斑分泌PGE2没有显著影响;(2)COX-2-/-小鼠基础PRA[（378.3±96.4）比（1115.0±210.0） ng AngI&#8226;ml-1&#8226;h-1,P ＝ 0.0051,n＝10]和JGG细胞肾素分泌[（153.7±14.7）比（672.4±129.0） ng AngI&#8226;ml-1&#8226;h-1,P ＝ 0.0162,n＝3]显著低于相同遗传背景的野生型小鼠;卡托普利能刺激COX-2-/-小鼠PRA增加32.8倍;PGE2能部分恢复COX-2-/-小鼠原代JGG细胞分泌肾素功能;(3)PGE2受体EP4耦联的Gsα基因敲除的低肾素小鼠,肾脏皮质COX-2 mRNA表达增加（8.07±1.08)倍（n=6,P = 0.0022),免疫组化显示致密斑和远端小管COX-2蛋白表达增加,24 h尿PGE2分泌增加[（1235±152） pg/24 h 比（385±140） pg/24 h,P = 0.0065]。 结论 致密斑PGE2直接受低氯调节,COX-2-/-小鼠基础肾素减少;下游的AngⅡ能直接作用于JGG细胞而不是致密斑负反馈调节肾素分泌。阻断JGG细胞自身的肾素产生（Gsα基因敲除）后,能负反馈上调致密斑的COX-2表达,故COX-2-PGE2-肾素在球旁器存在近距离精确调控机制。