Negri小体内的狂犬病毒抗原

以含Ｎｅｇｒｉ小体（ＮＢ）的７例海鸟及４例小脑切片，分别作Ｍａｃｃｈｉａｖｅｌｌｏ（马氏）和磷钨酸伊红（ＥＰＴ）染ＮＢ，以单克隆－狂犬病毒核衣壳蛋白抗体为一抗作ＳＰ染色，并作免疫加乌氏和／或ＥＰＴ的双重染色。见ＮＢ内部含狂犬病毒核衣壳蛋白抗原（ＲＶＡｇ）较少，免疫反应较弱，只外围仍见免疫反应较强之外环。少数ＮＢ内有内小体，也由免疫反应强阳性之小环及阴性之内容物构成。在小脑可见免疫反应极弱甚至阴性之ＮＢ。这些现象提示ＮＢ的形成可能是狂犬病毒体（ＲＶ）的退变现象。     

ELISA用于人血清抗狂犬病毒抗体的检测

为了检测狂犬疫苗免疫后的人血清中和抗体,国内外先后建立了很多种方法。七十年代以来,酶联免疫吸附试验(ELISA)由于具有快速、敏感、特异,重复性好等优点而得到较快发展。本文报告利用ELISA间接法检测狂犬疫苗免疫后人血清抗体的实验结果,并证明了ELISA效价与传统的小鼠中和试验保护指数有良好的一致性。 材料和方法 抗原:狂犬固定毒CVS毒株,经兔脑传代,取发病濒死兔脑经低速及超速离心,再经蔗糖密度梯度离心制备纯的狂犬病毒抗原。用于ELISA微孔板包被;抗原最适浓度经棋盘格式测定10μg/ml。     

果蝠与人类(新现)病毒性疾病

蝙蝠是多种人兽共患疾病病毒的储存宿主，迄今为止，在蝙蝠体内分离到80多种病毒。目前研究发现有25个病毒科能够感染脊椎动物，其中有10个科和蝙蝠有关，主要是RNA病毒与蝙蝠有关，在感染脊椎动物的16个RNA病毒科中，至少有9个科可感染蝙蝠，如罗斯河病毒(Ross River virus．RRV)、乙型脑炎病毒、西尼罗河病毒(West Nile Virus，WN)、狂犬病毒(rabies)等。在众多的蝙蝠科中，     

抗狂犬被动免疫制剂研究进展

狂犬病是由狂犬病毒(rabies virus,RV)引起的人畜共患疾病,一旦感染,如不及时采取有效防治措施,其病死率接近100％.狂犬病的暴露后预防(post-exposure prophylaxis,PEP)是防治狂犬病的主要措施.为获得快速的保护作用,世界卫生组织建议,对于严重暴露者应同时使用注射狂犬疫苗和狂犬病毒免疫球蛋白(rabies immune globulin,RIG)进行主动和被动免疫治疗[l].     

盐城市狂犬病毒核蛋白及糖蛋白基因序列分析

目的 对江苏省盐城市狂犬病毒核蛋白及糖蛋白的基因进行遗传学分析，揭示流行于该地区的狂犬病毒与人用及兽用狂犬病疫苗株间的差异。方法 以直接免疫荧光法检测犬脑标本，用阳性犬脑组织悬液接种鼠脑分离病毒。以RT-PCR法扩增病毒核蛋白及糖蛋白全基因片段，克隆测序后进行遗传学分析。结果 从58份犬脑中发现两份样品狂犬病毒抗原阳性，分别命名为Jiangsu Yc87与Jiangsu Yc88。从两份阳性样品均扩增到全N基因与G基因序列。阳性犬脑组织接种乳鼠后，从JiangsuYc88样品分离到狂犬病毒。分析发现两株病毒均为基因1型狂犬病毒．两株病毒间N基因与G基因的核苷酸及氢基酸的同源性分别为99．8％和99．7％，氨基酸的同源性分别为99．3％和98．8％。与已知的狂犬病毒相比，两株病毒与我国宁夏、河南、湖南、印度尼西亚病毒株的同源性较高，N基因的核苷酸及氨基酸同源性分别为86．3％～98．7％和95．4％～99．8％，G基因核苷酸及氨基酸同源性分别为82．1％～92．1％和94．1％～95．7％；JiangsuYc87与JiangsuYc88N基因的氨基酸序列分别发生了4和2处氨基酸的替换，G基因的氨基酸序列发生了29和26处氨基酸的替换。与当前使用的疫苗株相比，两株病毒与CTN疫苗株同源性较高，N基因与G基因核苷酸同源性分别为90．2％和87．1％～87．3％，氨基酸同源性分别为98．4％和91．7％～92．3％．但G基因膜外区与所有疫苗株无显著差异；N基因的氨基酸序列分别发生了5和6处氨基酸的替换，G基因的氨基酸序列发生了31和28处氨基酸的替换。结论 两株狂犬病毒为基因1型狂犬病毒，其N基因和G基因的核苷酸序列以及推导出来的氨基酸序列与已知的1型狂犬病毒株及疫苗株均有一定的差异。     

重庆地区2004年12月～2005年4月犬狂犬病流行毒株的检测

目的 确诊重庆地区2004年12月至2005年4月发生的临床疑似犬狂犬病，分离病毒并分析病毒株的进化关系。方法 RT，PCR检测重庆地区的5例临床疑似狂犬脑组织样品，乳鼠脑内接种试验分离病毒，分析5个流行毒株间及其与占各基因型代表毒株的遗传衍化关系。结果 5例临床样品均含有狂犬病毒，分离获得了相应的5株流行毒，CQ／ws-1，aQ／wx-1，aQ／w1-1，CQ／fj-1和CQ／qj-1。N基因核酸序列和推导氨基酸序列的同源性分析表明所获毒株均归属于基因Ⅰ型狂犬病毒：在基因Ⅰ型的同源性比较中，分离毒株CQ／qj-1与中国狂犬病人用疫苗株3aG型最低，为83．1％，氨基酸水平同源性最低为90．2％（3aG与CQ／ws-1）。分离毒株间低低为97．5％。同源性分析结果还显示出，尽管CQ／WS-1，CQ／wx-1和CQ／fj-1分别来自紧密相邻的3个地区，可是CQ／fj-1却与其它的两个毒株的基因水平同源性最高仅为95．6％。结论 5例临床疑似病例均为犬狂犬病，新分离的动物狂犬病毒流行毒株均为基因Ⅰ型，而且毒株间存在遗传变异。     

美国《Emerging Infectious Diseases》2006年第3期有关人兽共患病论文摘译

回归热重新出现的可能性；与马尔保出血热病人日常接触进行的血清学调查；2004年乌干达发生的肺鼠疫；孟加拉国蝙蝠中狂犬病毒的监测；2002年至2004年美国犬的钩端螺旋体病；南非的拉各斯螭蝠病毒Lagos bat virus；     

河南省南阳地区黄牛狂犬病病毒的分离和鉴定

应用鼠脑传代,从具有神经症状的病牛脑组织中分离获得5株病毒,经电子显微镜观察呈典型弹状病毒样粒子。用抗狂犬病毒CVS(狂大病毒1型代表株)免疫血清作ELISA检测及小鼠中和试验,证明分离株病毒为狂大病毒。用狂犬病相关病毒Lagos bat(狂犬病毒2型)、Mokola(狂犬病毒3型)和Duvenhage(狂犬病毒4型)免疫血清对分离株病毒作交叉中和试验,结果发现分离株病毒与Duvenhage有较密切的抗原联系,而与Lagos bat及Mokola病毒没有抗原联系。用自制狂犬病毒“核蛋白”单克隆抗体作夹心间接ELISA检测分离株病毒的感染鼠脑均呈阳性反应,5株病毒与CVS及其互相之间没有明显差异。结论认为,由河南省黄牛分离的病毒为狂犬病毒。     

源于亲本株PRVFa的3个基因缺失病毒株PRV TK^-、PRV gE^-／gI^-和PRV TK^-／gE^-／gI^-抵抗强毒攻击的比较研究

目的 4周龄仔猪24头随机分成4个组(A、B、C和对照组),前3组中各5头分别对应接种对应的缺失毒力基因TK(A)、缺失毒力基因gE/gI(B)和缺失毒力基因TK/gE/gI(C)3个基因缺失株,接种剂量均为105PFU,留1头不接种作为同居猪.免疫14d后以107PFU PRV Fa株滴鼻攻毒所有试验猪, 7d后屠宰猪只,采集大脑、小脑、心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、扁桃体、下颌淋巴结和三叉神经节,用光镜和电镜技术观察PRV攻毒后仔猪的器官损伤程度.收集免疫接种后3d内和强毒攻击后5d内的所有猪只鼻腔拭纸,以Southern blots方法测定PRV 的组织分布情况.结果 表明,收集的10种组织中出现病变的组织比例分别为:对照组为9/10,免疫A组为 4/10、B组为3/10、C组为4/10.病理学和超微病例观察表明,对照组和A组中肺脏损伤严重,其他组轻微;对照组中大脑、小脑、三叉神经损伤严重,免疫组轻微;A、B和C疫苗株对潜伏感染的主要靶器官扁桃体损伤程度依次加重.Southern blots分析表明,所有接种缺失病毒的试验猪均可通过鼻腔分泌物散毒,但是排出的病毒不能成功感染同居猪;A、B和C疫苗株免疫后均不能有效阻止PRV Fa 攻击后的散毒,但在仔猪大脑和小脑中不能检出病毒.结论 接种3个不同基因缺失株A、B和C均能阻止强毒株Fa 感染后向大脑和小脑的入侵,并减少强毒对多个器官的损害作用,其中C株的抗强毒感染能力和抗强毒所致损伤能力更佳.     

两种PCR方法检测狂犬病毒的敏感性和特异性比较

目的比较Nested-PCR和SYBR GreenⅠReal-Time PCR两种方法检测狂犬病毒的敏感性、特异性和时效性。方法对10倍连续稀释的狂犬病毒(疫苗株)核酸样品,采用Nested-PCR和SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法进行平行检测,比较两种方法的敏感性;同时以登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸对两种方法的特异性进行评价。结果 SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法可检测出2.3×106copies/μl核酸分子,与Nested-PCR方法相比,敏感度提高10倍。两种检测方法的特异性均好,与登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸均无交叉反应。SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法检测花费3h,检测时间比Nested-PCR方法节省2h。结论与Nested-PCR相比,SYBR GreenⅠReal-Time PCR是相对高效的检测狂犬病毒的方法。