微小RNA-1266对钠通道蛋白表达和分布的影响

目的探讨心房颤动(AF)相关微小RNA-1266-5p(miR-1266-5p)与AF相关钠离子通道蛋白α亚基编码基因SCNA5的靶向调控关系。方法构建含有预测结合位点3'非翻译区(3'UTR)序列的靶基因,将其与阴性对照质粒以及miRNA共转染入人胚肾HEK293细胞,实验分为空白对照组、阴性对照组、实验一组(pc DNA3. 1-SCN5A 3'UTR改建质粒+miR-1266)和实验二组(pc DNA3. 1-SCN5A WT质粒,不含3'UTR端+miR-1266),荧光定量PCR法和Western blot法检测各组钠通道蛋白SCN5A mRNA和Nav1. 5蛋白表达变化,免疫荧光实验观察SCN5A Nav1. 5蛋白表达和分布变化。结果与空白对照组和阴性对照组比较,实验一组SCN5A mRNA表达分别下调49. 4%和46. 0%,差异有统计学意义(0. 557±0. 016 vs 1. 101±0. 132和1. 031±0. 020,P 0. 05),而实验二组SCN5A mRNA表达无显著变化(P 0. 05);实验一组SCN5A Nav1. 5蛋白表达下降,而实验二组SCN5A Nav1. 5蛋白表达无显著变化;实验一组和实验二组的SCN5A Nav1. 5蛋白分布都无显著变化。结论 SCN5A可能是miR-1266的直接靶基因,miR-1266可能通过负性调控SCN5A表达参与AF电重构。     

nm23-H1基因转染对人胆管癌细胞系QBC939体外浸润能力的影响

目的：探讨nm23-H1基因转染对人胆管癌细胞系QBC939体外浸润能力的影响。方法：将含有全长nm23-H1 cDNA的真核表达载体通过脂腩体法转染人胆管癌细胞系。结果：转染成功的QBC939细胞，其nm23-Hl基因的mRNA、蛋白表达明显增加，转染nm23-H1基因的胆管癌细胞体外浸润能力下降，穿越matrigel的细胞数明显低于亲本QBC939细胞，代表浸润能力的IV型胶原酶（MMP-9）分泌量下降。结论：nm23-Hl基因可以抑制胆管癌细胞的体外浸润能力。     

脂质体介导人β-神经生长因子基因转染培养肌母细胞的表达研究

目的　了解含 β-神经生长因子 (β- NGF)基因的表达质粒 PSVCEP NGF- CAT在培养肌母细胞中的表达及 L ipofect AMINE阳离子脂质体介导的转染效率。方法　将表达质粒 PSVCEP NGF- CAT经 L ipofectAMINE转染至培养成的肌母细胞中 ,用免疫细胞化学方法检测基因在肌母细胞内的表达。结果　培养肌母细胞在转染 6小时吞噬脂质体最显著 ,转染 48小时后约 40 %的肌母细胞胞质内有β- NGF基因表达。结论　含β- NGF基因的表达质粒 PSVCEP NGF- CAT可以在培养肌母细胞中表达 ,脂质体转染的方法简便、有效     

质粒表达的短发夹状RNA特异性抑制鼻咽癌细胞的增殖

目的观察pmU6-sibclD重组体在细胞内表达的bcl-xL短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)能否特异地抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖.方法将自行构建的表达短发夹状RNA的重组质粒转染到人鼻咽癌CNE-2Z细胞株、卵巢癌HO-8910细胞株和正常人类肝脏L-O2细胞株中,流式细胞仪检测转染率,MTT比色法检测细胞的生长抑制率.结果bcl-xLshRNA能特异地抑制CNE-2Z细胞株的生长增殖,而对正常人类肝脏细胞株的生长增殖和HO-8910细胞中的绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的表达无抑制作用.结论pmU6-sibclD重组体在细胞内表达的短发夹状RNA能特异性抑制鼻咽癌细胞的生长增殖,为质粒介导的RNAi技术运用于肿瘤的基因治疗提供一定的理论依据.     

靶向皮肤树突状细胞可能是有应用前景的疫苗策略

据Medscape．com6月13日报道（原载Immunity2006：24：643—656），慢病毒侵入表皮会直接转染皮肤源性树突状细胞，使编码的抗原出现有效且持久的提呈。     

复合干细胞生物陶瓷在裸鼠异位成骨中的评价

目的 研究h-BMP-2基因转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)在复合煅烧骨、β-TCP或直接植入裸鼠股部后的成骨能力。方法 通过影像学、组织学和形态计量学等方法,观察未经诱导、OS液诱导和h-BMP-2基因转染BMSCs在复合煅烧骨,或多孔β-TCP后植入裸鼠皮下,或直接制成细胞悬液注入,在4、8、12周诱导成骨和材料降解情况。结果 在裸鼠皮下,单纯生物陶瓷不能诱导成骨,而复合了未诱导、OS液诱导和h-BMP-2基因转染BMSCs的生物陶瓷均能成骨,成骨量为h-BMP-2基因转染组>OS液诱导组>未经诱导组(P<0.05),B-TCP可随骨长入而降解;注入裸鼠肌肉的OS液诱导的和h-BMP-2转染的BMSCs均能诱导成骨,而未经诱导MSCs则不能成骨。结论 复合人BMP基因转染BMSCs的β-TCP是一种理想的骨修复材料。     

SIRNA表达载体与阳离子脂质体复合物转染HEPG-2细胞的实验研究

目的 观察针对HIF1 岬腟IRNA表达载体Genesil-HIF1a与阳离子脂质体复合物对EPG-2细胞增值及其对HIFl a表达的影响.方法 以pGenesil表达载体分别设计阳性对照(pG-shRNA-Hif-1a),阴性对照(pG-shRNA-HK),未处理细胞为空白对照(KB).用3ug:15ul配比的pGenesil-SIRNAc与阳离子脂质体的复合物转染HEPG-2细胞,Q418 400mg/ml培养转染后的细胞10天,拍荧光照片.37℃,5%CO2,5%O2、90%N2培养36小时,用RT-PCR测定HIF-1a mRNA的表达,用cck-8测细胞增殖.结果 培养36小时的阳性对照组Hif-1a m RNA表达明显减低(P＜0.05),对Hepg-2细胞增殖抑制作用明显(P＜0.05);结论 3ug:15ul计量配比组pGenesil-hif-1a与阳离子脂质体复合物可有效转染 Hepg-2细胞,能有效抑制HEPG-2细胞Hif-1a的表达,并抑制其增殖.     

稳定表达nucleostemin—siRNA的肿瘤细胞克隆的筛选和鉴定

目的：用脂质体法建立nucleostemin（NS）基因特异性siRNA阳性细胞克隆，为深入研究NS基因在胃癌细胞增殖调控中的作用和机制提供理想的生物学模型。方法：试剂盒法将真核表达载体PCDNA4／C—NS—silencer质粒大量扩增，然后以限制性切酶PVUI酶切线性化处理，用LipofectamineTM2000Reagent将PCDNA4／C—NS—silencer及其对照空载体转染胃癌SGC-7901细胞，经Zeocin抗生素压力筛选后用PCR方法鉴定细胞克隆外源基因整合阳性。结果：经Zeocin抗生素压力筛选后两组细胞均收获多个细胞克隆；PCR结果表明两组细胞克隆外源基因整合阳性。结论：成功建立表达NS～siRNA的胃癌SGC-7901细胞克隆。