染料木黄酮对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

本研究拟探讨染料木黄酮对前列腺癌细胞LNCaP和CWR22RV1的增殖、迁移和侵袭能力的影响。一、材料与方法1.材料:前列腺癌细胞株LNCaP和CWR22RV1(中国科学院上海生命科学研究院);Genistein(天津科瑞泰科技有限公司);RPMI 1640、胎牛血清(FBS)、胰蛋白酶(美国Gibco公司);E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin,Abcam公司);聚氰基丙烯酸正丁酯(BCA)试剂盒、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上样缓冲液(×5)及蛋白质印迹法(Western blot)试剂盒(上海市碧云天生物公司);2.实验方法:采用噻唑蓝(MTT)实验、划痕实验和Transwell实验检测Genistein对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。采用Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、CD44和Oct-4的表达水平。     

苦参素通过上调miR-204对人肝癌HepG2细胞的上皮间质转化及细胞生物学特性的影响

目的 探究苦参素(OM)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化(EMT)过程的影响及其分子机制。方法 用10ng/ml TGF-β1诱导HepG2细胞建立EMT模型,将建模成功的肝癌细胞分为5组:模型组、OM 1mg/ml组、OM 2mg/ml组、OM 4mg/ml组、OM 8mg/ml组,以未建模的HepG2细胞(空白组)作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HepG2中miR-204表达情况,分别采用CCK8实验、划痕实验检测HepG2细胞增殖、迁移情况,蛋白免疫印迹(Western Blot)检测HepG2细胞中钙黏附蛋白-E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达情况。结果 模型组HepG2细胞呈现梭形和纺锤形,且细胞间隙变大、排列松散,表明造模成功。与空白组比较,模型组HepG2细胞中miR-204表达水平、HepG2细胞生长抑制率、迁移能力及Vimentin表达水平高于空白组(P <0.05);与模型组相比,OM 4mg/ml组HepG2细胞中miR-204表达水平、HepG2细胞增殖率、迁移能力及Vimentin表达水平降低,E-cadherin表达水平升高(P <0.05)。结论 OM可上调HepG2细胞中miR-204表达,进而抑制TGF-β1诱导的人肝癌细胞HepG2EMT过程。     

Peroxiredoxin 1与EMT相关蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨过氧化物还原酶1( Prx1)与上皮细胞间质转化( EMT)相关蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法分别检测 Prx1、E-钙黏素( E-cadherin)、波形蛋白( Vimentin)在66例胰腺癌组织和11例正常胰腺组织中的表达,并分析三者之间的关系及与临床病理因素间的关系。结果 Prx1、E-cadherin和Vimentin分别在66例胰腺癌组织中的阳性表达率为69．70%(46/66)、40．91%(27/66)、56．06%(37/66);Prx1、E-cadherin和Vim-entin分别在11例正常胰腺组织中的阳性表达率为18．18%(2/11)、90．90%(10/11)、18．18%(2/11)。 Prx1、E-cadherin和Vimentin在胰腺癌组织中的表达均与TNM分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度显著相关(P<0．05),而与性别、年龄、肿瘤大小、病变部位均无关;Prx1与神经侵犯显著相关( P<0．05),而E-cadherin和Vimentin与神经侵犯无关。 Prx1的表达与Vimentin表达呈正相关(P<0．05),Prx1和Vimentin的表达均与 E-cadherin表达呈负相关( P<0．05)。结论Prx1与EMT相关蛋白在胰腺癌组织中的表达呈显著相关性,并与其侵袭转移能力相关,提示Prx1的高表达可能为预测胰腺癌患者预后不良的辅助指标之一。     

肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及E-cadherin、Vimentin和TGF-β表达的影响

目的 研究肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及癌、癌旁组织中上皮-间质转化(EMT)相关因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和转化生长因子-β(TGF-β)表达的影响.方法 40只小鼠随机分为肺复康组(17.2 g生药/kg)、5-Fu组(25 mg/kg)、Lewis肺癌模型组、正常组.检测肿瘤体积、肿瘤质量以及癌、癌旁组织中E-cadherin、Vimentin和TGF-β的蛋白表达情况.结果 与模型组相比,肺复康组肿瘤体积减小(P＜0.01),肿瘤质量降低(P＜0.01);肺复康组抑瘤率为36％.与正常组比较,模型组癌及癌旁组织E-cadherin表达降低(P＜0.01),Vimentin、TGF-β表达升高(P＜0.01);与模型组癌及癌旁组织相比,肺复康组癌及癌旁组织E-cadherin表达升高(P＜0.01),而Vimentin、TGF-β无显著性差异(P＞0.05).结论 肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤的生长具有一定的抑制作用;并能上调E-cadherin的表达,从而促进肿瘤细胞间的同质粘附而抑制肿瘤的侵袭、转移.     

甲状腺乳头状癌中TROP2、 p-Akt及vimentin的表达及临床意义

目的:探讨TROP2、p-Akt及vimentin在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学方法检测76例甲状腺乳头状癌、36例甲状腺瘤组织、36例正常甲状腺组织中TROP2、p-Akt及vimentin的表达,并对性别、年龄、肿瘤大小、临床TNM分期及淋巴结转移等因素进行分析。结果 :76例甲状腺乳头状癌中TROP2、p-Akt及vimentin蛋白的阳性表达率分别为65.8%、68.4%、69.7%,与甲状腺瘤组织、正常甲状腺组织相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。TROP2、p-Akt及vimentin蛋白在淋巴结转移组的阳性表达率均高于淋巴结无转移组(P<0.05);TROP2、p-Akt及vimentin蛋白在Ⅲ+Ⅳ期中的阳性表达率均明显高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)。经Spearman等级相关性分析表明,TROP2与p-Akt、vimentin的表达均呈正相关(r=0.313,P=0.038;r=0.402,P=0.031);p-Akt与vimentin的表达也呈正相关(r=0.464,P=0.026)。结论:TROP2的表达与甲状腺乳头状癌的恶性侵袭及转移有关,可作为靶向治疗甲状腺乳头状癌的潜在基因。     

四波长内源光信号成像在GFAP-/-Vim-/-小鼠脑梗塞周围扩散性去极化中的应用

目的：观测小鼠脑梗塞周围扩散性去极化（PIDs）的内源光信号变化特征,探索胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和波形蛋白（Vim）基因敲除对PIDs的影响。方法以GFAP和Vim基因敲除（GFAP-/-Vim-/-）小鼠及其野生型（GFAP+/+Vim+/+）小鼠为研究对象,线栓法制备大脑中动脉梗塞（MCAO）模型,应用四波长内源光信号（OIS）成像技术监测两组动物4 h内PIDs的发作情况。结果 OIS成像显示PIDs在空间分布上表现为连续的、红蓝相间的弧形波,由发源处向四周缓慢播散;PIDs存在5种不同空间播散类型：喙-尾播散类型、侧方-内侧播散类型、尾-喙播散类型、对侧播散类型和内侧-侧方播散类型。GFAP-/-Vim-/-小鼠和GFAP+/+Vim+/+小鼠PIDs的发作次数、播散类型、速度及时程组间比较无统计学差异（P>0.05）。结论四波长OIS成像技术可获得PIDs的高分辨率彩色影像,为更深入研究PIDs的时空特性创造了条件;GFAP和Vim基因敲除对MCAO模型制备后4 h内PIDs的发作无显著影响。     

CCR6通过上皮间质转化促进结直肠癌肝转移的机制研究

目的检测人趋化因子受体6(CCR6)、人趋化因子配体20(CCL20)、E-钙黏着蛋白和波形蛋白在结直肠癌及肝转移组织中的表达,探讨CCR6参与结直肠癌肝转移的可能机制。方法选取山西医科大学第一医院及山西省肿瘤医院2009至2017年资料齐全的62例原发性结直肠癌患者(结肠癌54例、直肠癌8例)手术切除存档蜡块,其中包含同期切除结直肠癌伴肝转移病灶的标本20例。采用免疫组织化学法检测结直肠癌及肝转移组织中CCR6、CCL20、E-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达情况,分析CCR6、E-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达与患者临床病理特征之间的关系,采用logistic多因素回归分析肝转移与患者临床病理特征及CCR6、E-钙黏着蛋白和波形蛋白表达的关系,采用Spearman相关分析CCR6与E-钙黏着蛋白和波形蛋白的相关性。结果CCR6在结直肠癌组织中的阳性表达率为66.1%(41/62);在伴有肝转移的结直肠癌组织中的阳性表达率为85.0%(17/20),在肝转移组织中的阳性表达率为70.0%(14/20)。CCL20在结直肠癌中的阳性表达率为83.9%(52/62);在伴有肝转移的结直肠癌组织中的阳性表达率为90.0%(18/20),在肝转移组织中的阳性表达率为90.0%(18/20)。E-钙黏着蛋白在结直肠癌中的阳性表达率为67.7%(42/62);在伴有肝转移的结直肠癌组织中的阳性表达率为50.0%(10/20),肝转移组织中的阳性表达率为65.0%(13/20)。波形蛋白在结直肠癌组织中阳性表达率为79.0%(49/62);在伴有肝转移的结直肠癌组织中的阳性表达率为85.0%(17/20),在肝转移组织中的阳性表达率为90.0%(18/20)。CCR6的表达与淋巴结转移(χ^2=11.142,P=0.001)、肝转移(χ^2=4.694,P=0.030)、TNM分期(χ^2=21.785,P<0.001)密切相关;E-钙黏着蛋白的表达与患者淋巴结转移(χ^2=4.694,P=0.030)、肝转移(χ^2=4.253,P=0.039)、TNM分期(χ^2=7.867,P=0.005)密切相关;波形蛋白的表达与患者淋巴结转移(χ^2=7.293,P=0.007)、TNM分期(χ^2=5.712,P=0.017)密切相关。CCR6、E-钙黏着蛋白、波形蛋白均与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及分化程度无关(均P>0.05)。logistic多因素回归分析发现,CCR6(OR=6.812,95%CI为1.206~38.474,P=0.030)、E-钙黏着蛋白(OR=0.256,95%CI为0.069~0.945,P=0.041)是结直肠癌患者肝转移的独立影响因素。Spearman相关分析显示,在20例晚期结直肠癌患者肝转移组织中,CCR6与E-钙黏着蛋白表达(r=0.454,P=0.044)、波形蛋白表达(r=0.509,P=0.022)相关。结论CCR6可能通过上皮间质转化机制促进结直肠癌的进展和肝转移。     

α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的观察α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白1在乳腺癌间质和正常乳腺组织中的表达变化。方法收集2012年1月至2013年3月在沧州市人民医院手术治疗并经病理证实的女性乳腺癌患者60例纳入病例组,选择同期乳腺活检的女性正常乳腺组织30例纳入对照组。采用免疫组织化学的方法检测两组间α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白的表达变化。结果α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白1在正常乳腺组织及乳腺癌间质中阳性表达率分别为:0 vs73.4%、10.0%vs 61.2%、76.7%vs 60.0%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);三种标志物在不同年龄、组织学分型、临床分期及有无淋巴结转移的患者中表达水平均有不同,差异有统计学意义。结论α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白在乳腺癌进展过程中表达逐渐增高,而陷窝蛋白1则呈现负性表达的趋势,提示三者在乳腺癌浸润和转移过程中起重要作用。早期乳腺癌监测此三项指标有助于乳腺癌危险度分级。     

系统性红斑狼疮肾炎患者中波形蛋白的水平变化及临床意义

目的探讨波形蛋白(Vimentin)在系统性红斑狼疮肾炎中的水平及意义。方法选取南通大学附属海安医院收治的150例系统性红斑狼疮肾炎患者作为疾病组,同时随机选取同期入院进行健康体检的150例正常人作为对照组。采用ELISA测量Vimentin表达水平,同时分析Vimentin水平与临床指标的关系。结果疾病组Vimentin表达水平显著高于对照组(P0.05);活动期患者Vimentin表达水平显著高于稳定期患者(P0.05);疾病组患者血浆Vimentin水平与补体C3、C4呈负相关(P0.05);与抗ds-DNA抗体、SLEDAI、Scr、24 h尿蛋白定量呈正相关(P0.05);与ESR、CRP、BUN、Hb无相关性(P0.05)。结论系统性红斑狼疮肾炎患者血浆Vimentin水平升高,血浆Vimentin可作为反映系统性红斑狼疮肾炎疾病活动的一个监测指标。