以蒙医学理论试论氧自由基与线粒体

蒙医基础理论中十分注重消化功能,认为一切内科疾病皆因“消化不良”引起,认为人体是以三根七素相互依赖的协调关系为基础进行生命活动的整体,体内胃火(主要为消化希拉)正常,充足时,可促使饮食消化及清浊生华,滋养三根七素,保持人体正常生命活动。现代生物学研究发现,与生命活动相关的氧自由基是食物消化过程中的中间产物,导致诸多慢性疾病。氧自由基产生的主要场所为线粒体。近几年来氧自由基与线粒体的研究引起了人们的广泛关注,已成为诸多医学研究者的主要研究对象,成为医学界研究热点。氧自由基与线粒体的性质、功能及与疾病关系与蒙医基础理论中的消化不良、胃火功能十分相似。本文试从蒙医学基础理论角度对氧自由基与线粒体进行分析。     

双氢青蒿素诱导肿瘤细胞铁死亡及其机制研究

目的阐明双氢青蒿素(DHA)诱导肿瘤细胞铁死亡的作用及其机制。方法利用3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)检测DHA与FeSO_4体外芬顿样(Fenton)反应生成氧自由基(·OH)的能力;MTT法检测DHA对人肝癌HepG2细胞的毒性(包括FeSO_4与去铁胺预处理组)。MTT法考察谷胱甘肽(GSH)与铁死亡抑制剂(Fer-1)对DHA细胞毒性的影响;采用DCFH-DA染料考察DHA(包括FeSO_4预处理组)诱导的细胞内活性氧的生成能力;采用C11-BODIPY581/591与DiO分别考察DHA(包括FeSO_4预处理组)对细胞内脂质过氧化物生成能力以及细胞膜结构的影响;利用谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX-4)试剂盒测定DHA(包括FeSO_4预处理组)对HepG2细胞内GPX-4活性的影响。结果 Fe~(2+)能够催化DHA发生芬顿样反应并生成·OH;DHA的半数抑制浓度(IC_(50))为(39.96±8.78)μmol/L,FeSO_4与去铁胺分别能够增加或者降低DHA的细胞毒性;DHA处理后细胞内活性氧含量与脂质过氧化物含量升高,细胞形态变大,细胞膜呈散点状分布并呈现解离状态。FeSO_4预处理组与DHA组相比较进一步增加细胞内活性氧含量与脂质过氧化物含量,并且细胞膜形态完全破坏。FeSO_4能够增强DHA对GPX-4活性的抑制作用。结论 DHA通过芬顿样反应升高细胞内活性氧而最终诱导肿瘤细胞铁死亡。另外,外源性铁可以加速DHA发生芬顿样反应进而加速肿瘤细胞铁死亡的发生与发展。     

高渗盐水联合依达拉奉治疗外伤性脑水肿的疗效及对患者神经功能的影响

目的探讨高渗盐水联合依达拉奉治疗外伤性脑水肿的疗效及对患者神经功能的影响。方法选取我科收治的90例外伤性脑水肿患者为研究对象,随机分为2组各45例。常规治疗基础上,对照组给予高渗盐水治疗,观察组在对照组基础上联合应用依达拉奉治疗。采用脑卒中神经功能缺损评分(NIHSS)评定神经功能。比较2组治疗后脑水肿体积、神经功能、氧自由基指标水平及不良反应发生情况。结果与对照组相比,观察组治疗后3d、7d和14d时脑水肿体积显著缩小,治疗后7d、14dNIHSS评分显著降低,差异均有统计学意义(P均0.05)。氧自由基指标方面,与对照组相比,观察组治疗后NO、LPO水平显著降低,SOD水平显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。治疗过程中,2组均未出现严重不良反应。结论高渗盐水联合依达拉奉治疗外伤性脑水肿疗效可靠,能够显著缩小脑水肿体积,减轻神经功能损害,降低体内氧自由基水平,且不良反应少,临床上值得进一步研究。     

肝脏缺血再灌注损伤与脂质过氧化反应的关系

肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemiareperfusion injury,HIRI)是由多种因素如:线粒体损伤、内质网应激、活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)大量生成、钙超载、各种细胞因子释放等引起胞内或胞外信号转导途径改变共同造成的细胞凋亡或细胞坏死的病理现象.脂质过氧化反应(lipid peroxidation,LP)可以笼统的描述为脂质尤其是质膜系统的主要组成成分-多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids PUFAs)中的碳碳双键被氧化物如ROS攻击的生物学反应.在HIRI中,LP贯穿整个生物学反应过程,尤其是线粒体的脂质过氧化(mitochondrial lipid peroxidation,MLP),可能是HIRI的中心分子事件,值得进一步的探索与研究.     

醛糖还原酶和晚期糖基化终末产物受体对糖尿病视网膜病变神经元凋亡的影响

目的　探究醛糖还原酶和晚期糖基化终末产物受体对糖尿病视网膜病变神经元凋亡的影响。方法　Wistar大鼠36只，随机分为对照组、模型组、转染组，后两组建立糖尿病大鼠模型。模型建立成功后，构建含有晚期糖基化终末产物受体siRNA的质粒并利用慢病毒转染入转染组大鼠体内。造模后4周、8周、12周，记录各组大鼠体质量及空腹血糖。造模后9周，禁食6 h，测定口服葡萄糖耐量。造模后12周，处死全部大鼠后，TUNEL法检测各组大鼠视网膜神经元凋亡情况，荧光分光光度计测定醛糖还原酶活性，Western blotting法测定晚期糖基化终末产物受体的表达，RT-PCR检测视网膜中Bcl-2和Bax mRNA相对表达量。结果　造模后4周、8周、12周，转染组和模型组的大鼠体质量均低于对照组（均为P<0.05）；造模后12周，转染组大鼠体质量高于模型组（P<0.05）。造模后4周、8周、12周，各组内大鼠空腹血糖水平均无明显变化（均为P>0.05），转染组和模型组大鼠的空腹血糖水平均高于对照组（均为P<0.05）。模型组和转染组大鼠在口服葡萄糖后30 min时，血糖水平均高于对照组（均为P<0.05）；在120 min时分别下降至最低，但仍高于对照组（均为P<0.05）。模型组和转染组的视网膜神经元凋亡指数、醛糖还原酶活性、晚期糖基化终末产物受体和Bax mRNA相对表达量均高于对照组（均为P<0.05），且转染组均高于模型组（均为P<0.05）。模型组和转染组的Bcl-2 mRNA相对表达量均低于对照组（均为P<0.05），转染组低于模型组（P<0.05）。结论　晚期糖基化终末产物结合受体后产生大量的氧自由基损伤，可能是导致糖尿病视网膜神经元凋亡，进而导致糖尿病视网膜病变发生的机制之一。     

氧化应激条件下克癃胶囊对PC-3细胞内GSH、ROS水平的影响

目的:研究克癃胶囊对双氧水诱导的PC-3细胞氧化应激反应的保护作用。方法:体外培养PC-3细胞,建立双氧水诱导PC-3细胞氧化应激的模型,给予克癃胶囊进行干预。分为4组:正常组、模型组(H_2O_2 100μmol/L)、阴性对照组(tBHQ50μmol/L+H_2O_2100μmol/L)、克癃胶囊组(克癃方100μg/m L+H_2O_2 100μmol/L)以DCFH-DA为荧光探针,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧自由基(ROS)含量,利用化学显色法测定PC-3细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量,评价细胞氧化应激水平。结果:ROS、GSH水平模型组与正常组比较,阳性对照组、克癃胶囊组与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.01);ROS水平阳性对照组与克癃胶囊组比较,差异有统计学意义(P0.01),但两组GSH水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:克癃胶囊对双氧水诱导的PC-3细胞氧化应激具有保护作用。     

超氧自由基,超氧化物歧化酶与口腔疾病

1.超氧自由基 1.1 什么是自由基 自由基(Ferr Radical FR)是指具有不配对电子的分子、原子、离子或原子团。超氧自由基(Superoxide Radical)是活性氧的一种。是指氧分子得到—个单电子后的还原产物。     

氧自由基对口腔粘膜损伤的动物实验研究(Ⅲ)——氧自由基对动物粘膜酶活性的影响

为了了解甲基紫精诱导的氧自由基造成金黄地鼠口腔粘膜急性非特异性坏死性溃疡性炎症发生的机制,对6种线粒体酶、2种胞液酶,1种溶酶体酶和3种膜相结构酶进行了酶组化染色观察,结果证实:甲基紫精通过与亚细胞结构中的 NADPHD 作用而诱导组织细胞产生氧自由基,而氧自由基又反过来损伤这些亚细胞结构的酶活性,从而产生粘膜损伤。     

氧自由基在皮瓣组织静脉瘀血／再灌流损伤中作用的实验研究

本研究采用大鼠腹部岛状皮瓣静脉瘀血模型，观察不同静脉瘀血期组织中氧自由基的生成情况，用超氧化物歧化酶（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）治疗。结果表明，皮瓣组织静脉瘀血８小时、１２小时丙二醛（Ｍａｌｏｎｙｌｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）含量均高于（Ｐ＜０．０５）或显著高于（Ｐ＜０．０１）对照组。瘀血再灌流各组ＭＤＡ含量均显著高于（Ｐ＜０．０１）对照组。瘀血再灌流组与相同时间瘀血组相比，４小时、８小时组ＭＤＡ含量显著高于瘀血组。用ＳＯＤ（２０００ｕ／ｍｌ）在再灌流发生前动脉注射、能使皮瓣存活率从２８．６％（４／１４）提高到７８．６％（１１／１４）。提示：随着瘀血时间延长及再灌流的发生，氧自由基对皮瓣组织的损伤作用逐渐增强，ＳＯＤ在皮瓣组织静脉瘀血８小时后再灌流前动脉注射，能非常显著的提高皮瓣组织的存活率。     

牛磺酸对鼠肝缺血-再灌流损伤的保护作用

目的 探讨牛磺酸对大鼠肝脏缺血再灌流损伤的作用及机制.方法 48只实验大鼠随机分为三组：假手术组（A组）、缺血-再灌流组（B组）和给予牛磺酸后缺血-再灌流组（C组）.检测再灌流30 min的肝组织钙含量、丙二醛（MDA）含量和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力.并同步观察肝组织光镜和电镜下的形态变化. 结果 B组肝组织钙含量和MDA含量明显高于A组（P＜0.01）,而GSH-PX活力低于A组（P＜0.01）.C组肝组织钙和MDA含量低于B组（P＜0.01, P＜0.05）,而GSH-PX活力高于B组（P＜0.05）.肝损伤病理改变C组轻于B组（P＜0.05）.结论 牛磺酸能显著减轻大鼠肝脏缺血再灌流损伤,其机制与减轻钙超载、抑制氧自由基生成和增强氧自由基清除有关.