昆虫抗菌肽抗炎活性及基于信号通路抗炎机制的研究进展

昆虫抗菌肽是昆虫为抵御外界病原微生物感染产生的免疫活性物质的总称,其优异的抗炎活性使其具有广阔的应用前景。综述了不同种类昆虫抗菌肽的抗炎活性及可能涉及的信号通路,介绍了昆虫抗菌肽临床研究现状,以期为昆虫抗菌肽的应用研究提供文献参考。     

常见抗生素与新型抗菌药物在临床上的研究应用进展

摘要：抗生素的研发与使用有效杀灭和抑制了众多病原菌，挽救了无数人的生命，但由于抗生素的不合理使用，导致细菌耐 药不断出现，耐药菌的感染已严重地威胁人类的生命健康。为此，本文主要对近年来临床上常用的抗生素如β-内酰胺类、喹诺酮 类、氨基糖苷类药物以及新型抗菌药物如抗菌肽和纳米颗粒的应用研究进行总结分析与探讨，为临床上治疗疾病提供一些参考。     

抗菌肽Sc-ly应用于肌酐酶法检测试剂盒性能分析

目的分析抗菌肽Sc-ly应用于肌酐酶法检测试剂盒,考察其对试剂盒储存稳定性、抑菌效果的影响,并对试剂性能进行评价。方法通过37℃储存稳定性试验、加菌试验考察检测试剂储存稳定性和抑菌效果,并对检测试剂线性范围、精密度进行统计分析,与对照试剂比较相关性,分析其准确性。结果抗菌肽Sc-ly应用于肌酐酶法检测试剂盒储存稳定性良好,37℃储存21d,检测质控品偏差小于5%;37℃放置10d,对Escherichia coli、Staphylococcus aureus、Bacillus subtilis表现良好抑菌作用。试剂盒在0～1 800μmol/L具有良好线性,Y=0.992 3 X-2.722 7,R~2=0.999 0,批内精密度和天间精密度CV均小于5%。与对照试剂比较,回归方程为Y=0.988 4 X+0.944 1,R~2=0.998 6,显现良好的相关性,测定结果准确可靠。结论抗菌肽Sc-ly应用于肌酐酶法检测试剂,试剂具有良好的储存稳定性和抑菌作用,且试剂盒主要性能指标良好。     

LL-37在不同炎症表型哮喘患者中的表达及治疗后的变化水平分析

目的:探讨支气管哮喘患者LL-37抗菌肽的表达水平与哮喘类型及治疗之间的关系。方法:选取于我院就诊的哮喘患者120例作为实验对象,并选择同期于我院体检的健康对照120例。对患者采用莫特罗/布地奈德进行治疗,用酶联免疫吸附试验法(ELISA)对其治疗前后血浆及痰液上清中的LL-37水平进行检测并对结果进行统计学分析。诱导痰嗜酸粒细胞(EOS)计数≥3%定义为EOS型哮喘,EOS计数<3%则定义为非EOS型哮喘。结果:哮喘组在治疗前后血浆中LL-37水平分别为3.3(11.3)与6.9(19.7)μg·L-1,差异有统计学意义(Z=-2.778,P=0.032);痰液上清中LL-37水平分别为30.1(162.5)与71.4(186.1)μg·L-1,差异有统计学意义(Z=-2.295,P=0.022)。与对照组相比,哮喘组治疗后血浆LL-37表达水平差异无统计学意义(P=0.425),其痰液上清的LL-37表达水平差异亦无统计学意义(P=0.433)。进一步分析发现LL-37水平仅在EOS型哮喘组治疗后显著增高,而非EOS型哮喘组治疗后LL-37水平则无明显变化。结论:EOS型哮喘患者LL-37的表达水平在莫特罗/布地奈德治疗之后显著增加。     

凯普斯泰冷敷凝胶联合地奈德乳膏治疗儿童特应性皮炎的随机双盲对照研究

【摘要】 目的 评估凯普斯泰冷敷凝胶联合地奈德乳膏治疗儿童特应性皮炎（AD）的短期有效性和安全性。方法 采用随机、双盲、对照研究，2019年11月至2020年9月收集就诊于四川大学华西医院皮肤科的儿童AD患者60例，最终56例完成随访，试验组和对照组各28例。试验组前3 d早晚外涂地奈德乳膏，中午外涂凯普斯泰冷敷凝胶，后11 d早中晚外涂凯普斯泰冷敷凝胶，对照组前3 d早晚外涂地奈德乳膏，中午外涂安慰剂，后11 d早中晚外涂安慰剂，治疗2周。分别于治疗前、治疗（7 ± 3） d及治疗（14 ± 3） d随访，记录湿疹面积及严重程度指数（EASI评分）、瘙痒视觉模拟评分法（VAS）评分、研究者总体评分（IGA评分）、皮肤生活质量评分（DLQI评分）等临床指标及不良反应。结果 治疗1周时，试验组1例（3.57%），对照组1例（3.57%）有效；治疗2周时，试验组12例（42.86%）有效，对照组2例（7.14%）有效；经秩和检验，治疗1周和2周时两组疗效差异有统计学意义（Z = -4.318、-5.474，均P < 0.05）。治疗前，试验组和对照组EASI、VAS、IGA、DLQI评分差异均无统计学意义（P > 0.05）；经非参数Friedman检验，两组EASI评分随治疗时间的变化差异具有统计学意义（χ2 = 45.720，P < 0.05）。经两因素重复测量方差分析，治疗1周后，两组间VAS评分差异有统计学意义（F = 10.738，P = 0.002），IGA、DLQI评分差异无统计学意义（F = 0.066、0.804，P = 0.135、0.374）；治疗2周后，两组间VAS、IGA、DLQI评分差异均有统计学意义（F = 67.313、38.949、51.503，均P < 0.001）。研究期间，试验组和对照组各发生1例不良反应事件，均表现为外用药物部位刺痛感或刺激感，两组不良事件发生率差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 短期应用凯普斯泰冷敷凝胶联合地奈德乳膏可有效治疗儿童AD，且与安慰剂比较未增加不良反应的发生。     

儿童反复上呼吸道感染与血浆抗菌肽LL-37及维生素D水平的相关性研究

目的 分析人血浆抗菌肽LL-37、25羟维生素D₃与儿童反复上呼吸道感染的相关性,以期为儿童反复上呼吸道感染的防治提供依据。方法 2018年2－8月选取在河北大学附属医院就诊的24例反复上呼吸道感染患儿为实验组,对照组为24例同期健康儿童。两组对象均空腹采血,检测血浆LL-37、25羟维生素D₃含量,同时记录反复呼吸道感染患儿既往1年内发生上呼吸道感染的次数。结果 实验组患儿血浆25羟维生素D₃含量(18.37±5.50) ng/ml与血浆抗菌肽LL-37水平(3.45±0.98) ng/ml明显低于健康对照组(29.24±9.04) ng/ml、(8.93±2.23) ng/ml(P＜0.05)。实验组患儿血浆25羟维生素D₃含量、LL-37水平均与上呼吸道感染次数呈负相关(r=-0.645、-0.560,P＜0.05);血浆25羟维生素D₃含量与血浆LL-37水平呈正相关(r=0.908,P＜0.05)。结论 维生素D缺乏与反复上呼吸道感染发生有关,反复上呼吸道感染患儿血浆LL-37水平下降,且25羟维生素D₃缺乏可能是反复上呼吸道感染患儿血浆LL-37水平下降的重要原因。     

新疆家蚕抗菌肽诱导人胃癌细胞AGS凋亡的研究

目的探讨新疆家蚕抗菌肽(cecropin XJ)是否通过诱导人胃癌细胞AGS凋亡产生抗肿瘤的作用。方法选择0.01~1 000 mg·L-1浓度范围内的cecropin XJ与人胃癌细胞AGS和人正常胃上皮细胞GES-1共培养24 h,采用MTT法检测cecropin XJ对AGS细胞和GES-1细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞超微结构变化;Hoechst染色观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞内活性氧和线粒体膜电位的变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3以及细胞色素C mRNA和蛋白水平的表达变化。结果 Cecropin XJ在体外能明显抑制胃癌AGS细胞的增殖(P<0.05),并具有浓度依赖性,IC50值为61.19 mg·L-1,但对GES-1细胞无明显的抑制增殖作用。经cecropin XJ处理24 h后,AGS细胞核固缩,呈现典型细胞凋亡特征,同时细胞内活性氧增加,线粒体膜电位下降。qRT-PCR和Western blot结果表明,cecropin XJ能够引起Bcl-2表达下调,Bax表达上调,促进细胞色素C的释放并活化caspase-3。Cecropin XJ促进caspase-3活性呈剂量依赖,经caspase-3和caspase-9特异性抑制剂处理后可降低cecropin XJ介导的AGS细胞死亡率。结论 Cecropin XJ可通过下调Bcl-2表达,上调Bax表达和活化caspase-3诱导AGS细胞凋亡,是其抗肿瘤机制之一。     

抗菌肽BF-30体外抗耐药细菌生物被膜的研究

BF-30是金环蛇Cathelicidin基因编码的一种直链多肽,由30个氨基酸构成。基于细菌生物被膜与细菌耐药性的关系,研究了BF-30对铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用及机理。当BF-30浓度为1/2×MIC时,可有效的抑制铜绿假单胞菌及金黄色葡萄球菌生物被膜的形成。以铜绿假单胞菌PAO1为研究对象,进一步考察亚抑菌浓度的BF-30抑制生物被膜形成的作用机理。实验结果表明,BF-30能够有效减少PAO1胞外鼠李糖的含量,从而降低细菌形成生物被膜的能力,但对PAO1表面的疏水性并无影响。此外,亚抑菌浓度的BF-30可剂量依赖性的降低细菌群体感应系统中绿脓菌素的释放量而不影响细菌对过氧化氢的敏感性,表明BF-30可通过群体感应系统调节生物被膜的形成。因此,BF-30有望用于治疗细菌生物被膜引起的各类慢性感染疾病。     

家蝇抗菌肽对 FBL－3红白血病原代细胞增殖影响浓度的探索

本文初步探究不同浓度家蝇幼虫抗菌肽对FBL－3红白血病原代细胞增殖的影响。采用诱导、研磨、离心、 C18固相萃取等方法制备家蝇幼虫抗菌肽混合物,然后处理传代期的FBL－3细胞,调整浓度为2．25×106／mL并通过尾静脉注射C57BL／6小鼠,建立红白血病动物模型。待肿瘤生长较大时,处死并剥离肿瘤,再通过研磨、裂红液裂解、获取原代肿瘤细胞并培养。将抗菌肽混合物调整为不同浓度作用于传代期的FBL－3原代细胞,之后经倒置显微镜观察照相,台盼蓝染色试验计算死亡率、 CCK－8试剂盒做细胞毒性检测。结果显示抗菌肽混合物浓度为250～350μg／mL作用FBL－3原代细胞时,细胞碎片大量增多,死亡率增高,细胞毒性变大。初步证明了抗菌肽混合物在250～350μg／mL抑制细胞增殖效果明显,在300μg／mL浓度下抑制作用最强,本研究结果可作为动物模型体内实验的参考。