大肠杆菌O-抗原血清型鉴定研究进展

大肠杆菌在一定条件下能引发宿主疾病,其表面O-抗原与毒力有关。O-抗原的化学组成和结构具有高度多样性,并且O-抗原血清型种类与大肠杆菌致病性有一定联系。因此,大肠杆菌O-抗原血清型鉴定对流行病学调查,防御和控制致病性大肠杆菌病有重要意义。传统的血清学分型方法耗时长、费用高、准确度不理想。随着科学技术的发展,研究者对大肠杆菌196种O-抗原基因簇进行了破译,比较分析了不同O-抗原基因簇序列,并针对基因簇中特异性DNA序列设计分子标记,运用PCR方法对O-抗原血清型进行分型,其中包括一般PCR、多重PCR、实时PCR、DNA芯片和微球悬浮列阵法。此外,还有rbf-限制性片段长度多态性分析法,磁性微球免疫分析法和基于全基因组序列预测法,这些方法丰富了O-抗原血清型鉴定方法,弥补了传统血清学分型方法的不足。本文概述了O-抗原合成基因簇序列和O-抗原血清型鉴定方法相关研究进展。     

千金子制霜前后提取物对大鼠肠道菌群的影响

目的研究千金子制霜前后提取物对正常大鼠肠道菌群的影响,为进一步阐明千金子制霜减毒机制提供参考。方法大鼠ig高、中、低剂量的千金子生品和霜品提取物,采用平板菌落计数法考察千金子制霜前后大鼠粪便中4类代表性肠道菌群双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌、肠球菌的数量变化。结果平板菌落计数实验结果表明,ig千金子生品与霜品提取物后大鼠出现菌群失调现象,且千金子霜品较生品引起的菌群紊乱程度低,在低剂量给药时可使条件致病菌肠球菌和大肠杆菌的数量减少。结论千金子制霜前后提取物均会影响肠道菌群的生物多样性,影响肠道菌群平衡,且千金子制霜后对4类肠道菌群的作用减弱,引起肠道菌群紊乱程度减小,这与千金子霜品泻下作用缓和的研究结果相一致,表明从肠道微生态角度考察千金子制霜前后对肠道菌群的干预作用,可揭示制霜与肠道菌群数量变化可能存在相关性。     

远缘链球菌中葡萄糖基转移酶催化活性区基因的克隆和初步表达

目的 :构建一株高效表达Streptococcussobrinus 6715中GTF -I催化活性区 (含有B细胞表位 )多肽的菌株 ,为抗GTF -I的单克隆抗体的检测和防治龋病亚单位疫苗的研究奠定基础。方法 :提取基因组DNA ,然后用PCR技术扩增出中目的肽段的约 1.1kb编码基因 ,并将其克隆至表达载体 pGEX -4T -1中构建 pGEX -gtf表达质粒。该质粒转化大肠杆菌JM 10 9后获得重组表达菌株。PCR筛选阳性克隆子。异丙基-β -D -硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,确定含有 pGEX -gtf的大肠杆菌JM 10 9的表达情况。 结果 :含有质粒pGEX -gtf的大肠杆菌JM 10 9能够表达GST -GTF融合蛋白。 结论 :成功扩增目的基因 ,并且把它定向克隆到表达载体pGEX -4T -1中构建表达质粒 ,并且该表达质粒能在大肠杆菌中进行表达     

人重组成釉蛋白C端肽在大肠杆菌中的表达及初步纯化

目的 :在大肠杆菌中表达人重组成釉蛋白C端肽 ,并对重组蛋白进行纯化 ,为进一步制备抗人成釉蛋白抗体和功能研究奠定基础。方法 :将编码人成釉蛋白C端肽的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pRSET -A上 ,构建表达质粒 pRSET -A -AMBN ,以大肠杆菌E .coliBL2 1(DE3)为宿主菌进行诱导表达 ,表达产物经镍 -次氮基三乙酸 (Ni -NTA)柱进行亲和层析纯化。结果 :工程菌在IPTG诱导 3h后 ,在SDS -PAGE上出现一条新的蛋白带 ,相对分子量 (Mr)为 5 2× 10 3 ,以可溶形式存在 ,经Ni-NTA柱纯化后获得纯度大于 95 %的人重组成釉蛋白C端肽。结论 :获得Mr为 5 2× 10 3 的人重组成釉蛋白C端肽。     

Establishment of cell free conversion system with biotin-labelled recombinant PrPsen expressed in E. coli

Objective To report a protocol using biotin-labelled PrP protein in cell free conversion assay instead of isotope. Methods A hamster PrP protein （HaPrP） was expressed in E. coli and purified with HIS-tag affinity chromatograph. After being labelled with biotin, HaPrP was mixed with PrP^sen preparation from scrapie strain 263K. Results Protease-resistant bands were detected after four-day incubation. Conclusion The new conversion model provides a reliable, easily handling, and environment-friendly method for studies of prion and transmissible spongiform encephalopathies.     

表达气体囊泡的大肠杆菌能安全地增强高强度聚焦超声的消融效果

目的 探讨表达气体囊泡（GVs）的大肠杆菌增效高强度聚焦超声（HIFU）消融荷瘤小鼠肿瘤的作用及相关安全性。方法 常规饲养雌性BALB/c小鼠136只,随机选择32只构建4T1荷瘤小鼠模型,按体质量随机分为GVs组（大肠杆菌BL21(AI)-pET28a-ARG1）和对照组（PBS）,检测凝固性坏死体积和肿瘤组织病理变化验证增效HIFU消融的作用。104只BALB/c小鼠,也按体质量随机分为GVs组和对照组（n=52）,检测小鼠体质量变化,于静脉注射后第1、4和15天,测定白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板计数,检测肝功ALT、AST和肾功CREA、BUN生化指标,ELISA检测TNF-α、IL-1β,检测肝、脾组织病理学变化,以评价其安全性。结果 HIFU消融效果显示GVs组凝固性坏死体积大于对照组（P<0.001）,肿瘤组织病理切片显示GVs组损伤程度比对照组更高。体质量结果显示,GVs组体质量与对照组无明显差异,血常规结果显示,GVs组白细胞、红细胞、血小板和血红蛋白含量与对照组无明显差异（P1=0.59,P2=0.27,P3=0.76,P4=0.81）;肝、肾功生化指标结果显示,GVs组ALT、AST、CREA和BUN与对照组均无明显差异（P1=0.12,P2=0.46,P3=0.62,P4=0.86）;ELISA结果显示,GVs组TNF-α、IL-1β与对照组相比无明显差异（P1=0.48,P2=0.56）,肝、脾组织病理切片显示GVs组与对照组相比无明显异常变化。结论 表达GVs的大肠杆菌通过自身稳定表达GVs,能够安全、有效地增强HIFU的消融效果。     

大肠杆菌sRNA sdsR表达水平与其耐药性的相关性分析

目的旨在探究临床分离的大肠埃希菌株中sRNA sdsR的表达水平与环丙沙星以及头孢噻肟耐药性之间的关系。方法采用实时荧光定量PCR方法测定医院2018年1月—2018年12月从临床标本非重复分离得到的50株大肠埃希菌的sRNA sdsR的表达水平,并通过pearson相关分析确定环丙沙星及头孢噻肟耐药性与sRNA表达水平之间的相关性。结果利用MIC数值将50株临床分离株分为CIP耐药组27株,CIP敏感组23株;CTX耐药组22株,CTX敏感组28株;CIP敏感组的sdsR表达水平明显高于CIP耐药组(P<0.05);而CTX敏感组和CTX耐药组的sdsR表达水平相比较,差异无统计学意义(P>0.05);sRNA sdsR的基础表达水平与CIP MIC呈负相关(P<0.01),而与CTX MIC比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大肠埃希菌临床分离株中sRNA sdsR的基础表达水平与环丙沙星耐药性呈负相关。     

人白细胞介素15基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 克隆人白细胞介素（IL）15全长cDNA,并在大肠杆菌中表达。方法从人外周血分离的淋巴细胞中提取总RNA,通过RT—PCR扩增出hIL-15全长cDNA。构建到原核表达载体pET28a（＋）中,通过卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,扩增后IPTG诱导表达。通过SDS-PAEG及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白。结果 成功构建人IL-15表达载体,并表达于大肠杆菌中。SDS—PAEG及Western-blot分析显示表达的融合蛋白分子量为16．1ku,与理论值相符。结论 获得了hIL-15融合蛋白,为hIL-15单克隆抗体的制备及其功能研究奠定了基础。