体外转染Cyclin A2基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响

目的探讨体外转染细胞周期素A2(Cyclin A2)基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响,为心脏再生提供细胞学依据。方法 SD乳鼠12只,分离、培养、鉴定原代乳鼠心肌细胞并分为3组,实验组:转染带有强化绿色荧光蛋白(GFP)和Cyclin A2基因的重组腺病毒(Ad-Cyclin A2-GFP);空病毒组:转染不含目的基因带有GFP的重组腺病毒(Ad-Null-GFP);阴性对照组:未做转染处理,仅加入等量的培养基。利用GFP示踪技术,评估原代心肌细胞转染效率;转染后的细胞继续体外培养3~5d,利用免疫荧光技术分别检测Cyclin A2、磷酸化组蛋白H3(H3P)、心肌肌钙蛋白-T(c Tn T)。结果 1.荧光GFP示踪表明原代心肌细胞的转染效率高达(97±0.74)%;2.免疫荧光标记显示,空病毒组和对照组结果相似;心肌细胞特异性标记蛋白c Tn T分布于细胞质,原代心肌细胞纯度高达(95±0.62)%;心肌细胞Cyclin A2主要在胞核内聚集,少数分布于细胞质。H3P为核蛋白在细胞核内分布。3.转染Cyclin A2后,实验组H3P阳性率明显高于空病毒组和对照组,差异具有统计学意义(P0.05);实验组可见大量多核细胞,以双核为主,伴少量3核细胞。结论腺病毒作为转染载体对原代心肌细胞有很好的侵染效率;Cyclin A2超表达促进原代心肌细胞形成双核。     

V型胶原导致的硬皮病样重塑

最近,作者发现经人类V型胶原加弗氏佐剂免疫的新西兰兔发生器官纤维变性和血管炎,而这通常是由系统性硬化病引起的。因此,作者研究了微纤维形成过程,以明确这种硬皮病样模型中重塑变化的可能因素。另外,作者还对人类硬皮病患者(n=3)皮损进行了初步比较。对雌性新西兰兔(n=10)给     

大鼠延髓和脊髓背角内PKCγ阳性神经元向中缝大核的投射

目的 研究大鼠延髓背角和脊髓背角浅层内蛋白激酶Cγ亚单位（PKCγ）阳性神经元向中缝大核（NRM）的投射。方法 荧光金（FG）逆行追踪和PKCγ免疫荧光组织化学染色相结合的双标记方法。结果 将FG注入NRM，在延髓和脊髓背角的Ⅰ-Ⅲ层内可见FG逆标神经元；PKCγ阳性神经元主要分布于延髓和脊髓背角的Ⅱ层内侧部及Ⅱ、Ⅲ层交界处，Ⅰ、Ⅲ层内较少；延髓背角Ⅰ层和脊髓背角Ⅰ－Ⅲ层可观察到FG逆标并呈PKCγ阳性的双标神经元。结论 延髓和脊髓背角浅层向NRM投射的神经元含PKCγ，提示PKCγ在向NRM传递痛信息的通路中可能发挥重要作用。     

双色法淋巴细胞亚群分析结果的几种影响因素

对机体的淋巴细胞及亚群进行鉴定和计数有助于我们了解机体的免疫状况，特别是了解免疫损伤所导致的疾病中免疫系统的变化具有重要意义，将流式细胞术(FCM)的方法引入淋巴细胞及亚群的测定，与传统的免疫荧光法(IFA)相比具有快速、准确、灵敏度高、重复性好等优点，而且由于不需要分离淋巴细胞，大大减少了全血用量以及分离步骤     

糖尿病兔模型视网膜VEGF表达的定位研究

目的研究糖尿病兔动物模型血管内皮细胞生长因子(VEGF)在视网膜中的定位。方法应用四氧嘧啶制备糖尿病兔动物模型,采用免疫荧光、免疫荧光双重标记技术,分别以胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体、VEGF抗体为一抗;羊抗兔IgG-Cy3、马抗鼠IgG-FITC为二抗进行免疫荧光染色。结果在糖尿病兔动物模型视网膜中,GFAP与VEGF共同表达于视网膜Müller细胞。结论糖尿病兔模型中,视网膜Müller细胞通过表达VEGF发挥促进新生血管形成的作用。     

两种血小板抗体检测方法的比较

血小板抗体可以引起多种临床疾病或症状，如同种或自身免疫性血小板减少症、输血后紫癜、血小板输注无效等。目前，血小板抗体的检测方法，已报道的有多种，如血小板免疫荧光试验、固相红细胞粘附试验（SPRCA）、单克隆抗体特异性血小板抗原固定术（MAIPA）、改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验（MACE）等。笔者以流式细胞术法作为参考方法，     

抗精子抗体的检测方法及临床意义

抗精子抗体的检测方法及临床意义王苏梅，邱毅综述王志新审校关键词抗精子抗体，凝集试验，间接免疫荧光技术，酶联免疫吸附试验中图法分类号Ｒ４４６．６２早在１９００年，Ｍｅｔｃｈｎｉｋｏｆｆ就提出精子可导致自体和同种免疫反应，后来用精子免疫雌性动物，结果出现...     

整合素β1在自身免疫性心肌炎小鼠心肌的表达

目的:观察整合素β1在自身免疫性心肌炎小鼠心肌的表达变化。方法:猪肌凝蛋白皮下注射免疫Balb/c小鼠,建立慢性自身免疫性心肌炎模型,于初次免疫后14、30和60d对心肌组织进行病理学检查,同时用激光共聚焦技术和间接免疫荧光法检测整合素β1在心肌的表达变化。结果:在初次免疫后14d,小鼠心脏有局部炎症出现,整合素β1在心脏血管周围的表达高于正常组（P<0.05）;在第30天,小鼠心脏炎性浸润更加明显,整合素β1在心肌的表达增强,显著高于正常组（P<0.05）;第60天,小鼠心脏炎症细胞减少,而纤维化则开始出现,整合素β1在心肌的表达最强（P<0.05）,且排列紊乱。结论:整合素β1在自身免疫性心肌炎的发生及发展过程中起着不同重要作用,整合素β可能参与自身免疫反应及心肌的重构。     

小鼠膜性肾小球肾炎复制方法及免疫荧光定量研究

目的：介绍实验性小鼠膜性肾小球肾炎(MGN)的复制方法，并探讨其免疫荧光定量分析在肾小球肾炎研究中的应用价值。方法：制备阳离子化牛血清白蛋白(GBSA)并复制小鼠MGN，对各组小鼠进行电镜及免疫荧光观察，并进行免疫荧光定量研究。结果：电镜、免疫荧光观察均显示病理Ⅰ组(PⅡ组)具有典型的MGN病变，病理Ⅱ组(PⅡ组)病变轻微且不典型。免疫荧光定量研究证实PⅠ、PⅡ组与对照组差异有显著性；PⅠ、PⅡ组间差异无显著性。结论：C—BSA可作为复制小鼠MGN的良好抗原，隔日2mg／只尾静脉注射4w即可复制出稳定的小鼠MGN模型。免疫荧光定量分析不仅能直接而准确地反映MGN病理变化，而且在MGN早期即具有诊断价值。