全文获取类型
收费全文 | 809篇 |
免费 | 45篇 |
国内免费 | 61篇 |
专业分类
耳鼻咽喉 | 2篇 |
儿科学 | 4篇 |
妇产科学 | 1篇 |
基础医学 | 146篇 |
临床医学 | 110篇 |
内科学 | 52篇 |
皮肤病学 | 2篇 |
神经病学 | 7篇 |
特种医学 | 54篇 |
外科学 | 15篇 |
综合类 | 259篇 |
预防医学 | 66篇 |
眼科学 | 1篇 |
药学 | 121篇 |
中国医学 | 43篇 |
肿瘤学 | 32篇 |
出版年
2023年 | 6篇 |
2022年 | 6篇 |
2021年 | 11篇 |
2020年 | 8篇 |
2019年 | 9篇 |
2018年 | 7篇 |
2017年 | 11篇 |
2016年 | 18篇 |
2015年 | 15篇 |
2014年 | 23篇 |
2013年 | 25篇 |
2012年 | 31篇 |
2011年 | 34篇 |
2010年 | 47篇 |
2009年 | 45篇 |
2008年 | 42篇 |
2007年 | 53篇 |
2006年 | 39篇 |
2005年 | 43篇 |
2004年 | 41篇 |
2003年 | 45篇 |
2002年 | 29篇 |
2001年 | 32篇 |
2000年 | 40篇 |
1999年 | 31篇 |
1998年 | 32篇 |
1997年 | 22篇 |
1996年 | 31篇 |
1995年 | 15篇 |
1994年 | 22篇 |
1993年 | 20篇 |
1992年 | 18篇 |
1991年 | 15篇 |
1990年 | 18篇 |
1989年 | 12篇 |
1988年 | 8篇 |
1987年 | 7篇 |
1986年 | 1篇 |
1985年 | 3篇 |
排序方式: 共有915条查询结果,搜索用时 31 毫秒
2.
3.
随着医药领域对靶向调节特定生命活动过程的新分子化合物的需求日益增加,高效、低成本地发现亲和配体分子的新型小分子药物筛选技术——DNA编码的化合物库(DNA encoded compound library,DEL)筛选技术应运而生。DEL作为组合化合物库,可以是简单小分子化合物的集合,也可以是具有高级空间结构的复杂小分子库,每个化合物都以共价方式与特异的DNA序列偶联,因而可将库中所有化合物与靶标蛋白进行合并筛选,随后使用高通量测序对DNA编码序列进行测序来鉴定结合的配体分子。近年来,应用DEL技术筛选开发候选药物的例子已越来越多地被报道,本文回顾和总结了DEL技术的实施流程,特别是DEL库构建和亲和筛选方法的最新研究进展,展示了利用DEL技术筛选开发的最新亲和配体分子,并对DEL技术在生命科学领域的应用前景作了展望。 相似文献
4.
目的:制备可用于免疫分析的醛固酮(ALD)多克隆抗体,并建立基于生物素-链霉亲和素放大系统的ALD化学发光免疫分析方法,用于测定人血液中的ALD含量。 方法:对ALD进行化学改造,制备醛固酮肟,再与BSA偶联制备免疫原,免疫兔,制备抗ALD多克隆抗体。以生物素-链霉亲和素放大系统采用竞争法建立ALD化学发光免疫分析方法。结果:经检测免疫的3号兔获得的抗ALD抗体灵敏度最高,50%抑制率(IC50)ALD浓度是268 pg/ml。用该抗体建立的化学发光免疫分析法的检测范围为62.5~2 000 pg/ml,灵敏度为 23.7 pg/ml,批内变异系数为6.9%~9.5%,批间变异系数为8.5%~12.7%,回收率范围为93.1%~104.1%,稀释实验测定值与理论值呈线性相关,相关系数为r=0.996,与放射免疫分析试剂盒的相关性方程分别为y=0.932x+4.596,相关系数r=0.948(n=95)。结论:建立的检测ALD的化学发光免疫分析法符合临床应用的基本要求。 相似文献
5.
本研究用重组烟曲霉半乳糖甘露聚糖 (AFMP1) ,制备免疫血清 ,建立一种以生物素 亲和素 (BA)系统为基础的夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA)法 ,快速检测烟曲霉GM抗原[1] 。一、材料与方法1.动物和菌株来源 :家兔和豚鼠购自第一军医大学动物所 ,表达GST AFMP1融合蛋白BL2 1菌种及全部真菌标准株均由香港大学微生物系提供。2 .主要试剂 :GST融合蛋白纯化试剂盒、ProteinGSepharose 4B和ECL底物显色剂 (AmershamPharmacia公司 ) ,弗氏佐剂 (Sigma产品 ) ,活化Sulfo NH… 相似文献
6.
目的建立研究DNA-蛋白质相互作用的新方法。方法选择6只SPF级BALB/c小鼠,模型组经尾静脉注射脂多糖(LPS)25mg/kg,使平均动脉压(MAP)降至40mmHg(1mmHg=0.133kPa)造成内毒素休克,然后迅速处死,正常对照组同期处死,取肝脏组织。利用生物素一链亲和素系统结合磁珠分离技术筛选内毒素诱导基因(LIG)启动子的结合蛋白。用聚合酶链反应(PCR)扩增末端带生物素标记的LIG启动子探针,提取动物肝脏组织胞核蛋白,与制备的LIG启动子探针进行孵育,再以标记有链亲和素的磁珠分离LIG启动子-蛋白反应复合物,使用不同浓度NaCl洗脱结合的蛋白,使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离样品蛋白,并对凝胶进行银染显色,比较模型组与正常对照组的差异条带。结果两组胞核蛋白中共观察到15条差异条带。分析差异条带显示,与正常对照组比较,在低亲和力作用水平,LPS作用后有4个蛋白开始与LIG启动子作用力增强,而有1个蛋白则同启动子的相互作用减弱;在DNA-蛋白质高亲和力作用水平,则有9个蛋白因LPS刺激而同DNA的结合力增强,有1个蛋白同启动子的相互作用消失。结论成功建立了生物素-链亲和素结合磁珠分离技术的新方法,为研究DNA-蛋白质相互作用开拓了新思路,并从“转录调控组学”角度深入理解基因表达调控机制奠定了基础。 相似文献
7.
金属硫蛋白检测方法的研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
李婧 《现代检验医学杂志》2004,19(3):64-65
金属硫蛋白(metallothioneins,MTs)是一类普遍存在的低分子量(约6500Da)热稳定性蛋白.富含半胱氩酸,与某些金属阳离子有高度亲和力(如Ag^ ,Cd^2 .Hg^2 ,Cu^2 等)。MT结构分析表明其含有两个结构域:α结构域和β结构域,分别结合4个和3个共价金属离子。MT生物学作用广泛,主要参与机体的重金属解毒和微量金属代谢。 相似文献
8.
目的建立检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法(BSA-ICC)并作临床初步应用.方法从健康人外周血单个核细胞(PBMC)中富集CD4细胞,加入莫能霉素,用不同浓度的佛波醇酯(PMA)和钙离子载体(A23817)诱导CD4细胞不同时间,比较其胞内表达白细胞介素-2(IL-2)/白细胞介素-4(IL-4)的细胞百分率,确定最适诱生条件;用不同稀释度的IL-2McAb、IL-4McAb、不同浓度的生物素化羊抗鼠IgG(bio-SAM IgG)和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(HRP-SA)作棋盘配比试验,确认McAb、bio-SAM IgG和HRP-SA的最适浓度,根据上述结果建立了检测细胞内细胞因子的BSA-ICC法.用所建方法检测20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中表达IL-2/IL-4细胞的百分率.结果诱导CD4细胞胞内表达IL-2和IL-4的细胞最高百分率的PMA和A23817浓度分别为100 μg/L和2.0 μmol/L,诱导高峰时间分别为5和7 h,BSA-ICC法中所用IL-2McAb、IL-4McAb最适稀释度分别为1∶ 20和1∶ 40,bio-SAM IgG和HRP-SA浓度分别为10~15 μg/ml和15 μg/ml.20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中分泌IL-2的细胞百分率分别为(45.90±4.39)%、(37.28±2.67)%和(25.19±3.49)%,分泌IL-4的细胞百分率分别为(10.5±1.50)%、(9.94±1.06)%和(16.13±2.50)%,IL-2+CD4+/IL-4+CD4+比值分别为3.65±0.94、3.55±0.76和1.27±0.26.结论所建方法可用于T辅助(Th)细胞亚型的测定,从而判断Th细胞的极化状态.妇科恶性肿瘤患者Th细胞功能失衡极化,呈Th2反应,可能与恶性肿瘤的发生有关. 相似文献
9.
Survivin基因在脐血CD34^+干/祖细胞中的表达及意义 总被引:3,自引:0,他引:3
目的探讨Survivin基因在人脐血CD 相似文献
10.
目的鉴定Treg细胞中Foxp3相互作用蛋白。方法构建包含SBP和Protein G结合肽的Tags的Foxp3 knock-in转基因小鼠,分选Treg细胞,用亲和磁珠法纯化Foxp3相互作用蛋白复合体,质谱测序鉴定复合体蛋白组分并进行蛋白质组学分析和蛋白相互作用的验证。结果流式细胞分选的Treg纯度超过90%;经过亲和磁珠法纯化和质谱分析显示Foxp3有100个以上候选相互作用蛋白伙伴;免疫共沉淀方法初步鉴定部分伙伴蛋白间可相互结合。结论本研究在小鼠体内Treg细胞中初步获得Foxp3候选相互作用蛋白并证实部分蛋白间可相互作用,为这些蛋白对Treg细胞的功能鉴定提供基础。 相似文献