萆苓祛痛方对糖尿病痛风大鼠骨骼肌组织SIRT3蛋白表达及URAT1 mRNA的影响

目的:探讨萆苓祛痛方对糖尿病痛风大鼠骨骼肌组织去乙酰化酶3(SIRT3)蛋白表达及尿酸盐转运体1(URAT1) mRNA的影响。方法:选择健康雄性大鼠40只,除正常组外,其余组予高脂饲料喂养并联合小剂量链脲佐菌素(STZ)溶液40 mg·kg-1腹腔注射1次,以血糖≥16. 7 mmol·L-1,为糖尿病模型。4 d后关节腔注射5%尿酸钠溶液1次,诱导痛风模型,模型成功后,分为萆苓祛痛方组(萆苓组,10 g·kg-1),吲哚美辛组(5 mg·kg-1),吡格列酮组(10 mg·kg-1),均连续给药21 d,正常组、模型组予等量生理盐水;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定骨骼肌组织SIRT3蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测骨骼肌组织URAT1 mRNA表达,并进行病理检查,取血测定血糖(GLU),血尿酸(UA)及C反应蛋白(CRP)含量。结果:与正常组比较,模型组GLU,UA及CRP明显升高(P 0. 01);与模型组比较,萆苓组、吡格列酮组血糖下降(P 0. 05);各药物组UA及CRP明显下降(P 0. 01)。与正常组比较,模型组骨骼肌SIRT3蛋白表达量显著降低(P 0. 01);与模型组比较,萆苓组骨骼肌SIRT3蛋白表达量显著提高(P 0. 01),与西药组比较无明显差异;条带图的结果同样显示,与正常组比较,模型组表达亮度明显减弱,药物组表达亮度明显增强;与正常组比较,模型组关节组织URAT1 mRNA相对表达量明显升高(P 0. 01);与模型组比较,各药物组URAT1 mRNA相对表达量显著下调(P 0. 01)。电泳图同样提示,正常组表达亮度减弱,模型组表达亮度显著增强,萆苓组、西药组表达亮度明显减弱。关节病理提示,与正常组比较,模型组大鼠关节病理损伤严重,可见大量炎细胞浸润及纤维增生,滑膜细胞变性、坏死。与模型组比较,萆苓祛痛方关节病变程度明显减低,见少量炎细胞浸润,滑膜上皮轻度增生。结论:具有泻浊解毒通络作用的萆苓祛痛方可显著提高糖尿病痛风大鼠骨骼肌组织SIRT3的蛋白表达量,下调URAT1 mRNA的表达量,减轻骨骼肌组织病理损伤,减低血清炎症因子CRP的含量,降低模型大鼠的血糖、血尿酸水平,有保护关节功能的作用。     

MAGE-A1 和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义

[摘要] 目的：探讨黑色素瘤抗原基因-A1（MAGE-A1）和MAGE-A3 在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法：选取2006 年1 月至2010 年1 月河北医科大学第四医院神经外科手术切除的78 例脑胶质瘤组织标本和15 例车祸死亡捐献者的正常脑组织标本。用RT-PCR法检测胶质瘤组织中MAGE-A1 和MAGE-A3 的表达，分析其表达水平与患者预后的关系；用MSP-PCR术检测MAGE-A1 和MAGE-A3 基因启动子区的甲基化状态，分析两者表达与甲基化之间的关系；用RT-PCR法检测胶质瘤U251 和U87 细胞中MAGE-A1 和MAGE-A3 表达以及经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2''-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）联合作用后两者的表达水平。结果：78 例胶质瘤组织中MAGE-A1 和MAGE-A3 mRNA阳性表达率分别为65.34%和38.46%，而在15 例正常脑组织中未发现2 种mRNA表达。MAGE-A1 阳性组患者5 年生存率较阴性组低（P<0.05）。MAGE-A1 和MAGE-A3 基因启动子区去甲基化水平与其在mRNA水平上的表达均有显著的相关性（均P<0.01）。未经5-Aza-CdR 和TSA处理的U87 细胞未见MAGE-A1 和MAGE-A3 mRNA的表达，U251 细胞则有少量表达。单独给予TSA不能引起MAGE-A1 和MAGE-A3 基因的表达激活，单独给予5-Aza-CdR 或与TSA合用可以引起该2 个基因的表达激活，且两者合用的作用优于单独给药。结论：脑胶质瘤组织中有不同程度的MAGE-A1 和MAGE-A3 基因表达，MAGE-A1 基因表达与患者的预后不良相关。DNA启动子区甲基化和组蛋白乙酰化是MAGE-A1和MAGE-A3基因表达激活的重要机制。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对食管癌细胞ncRNA/mRNA表达谱的影响

目的:分析组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理前后,食管癌细胞株EC109中差异表达的非编码RNA(ncRNA)和mRNA表达谱,初步预测与TSA作用相关的ncRNA和mRNA。方法:采用MTT、细胞周期等方法检测TSA的效应;运用应用芯片技术分别检测TSA处理前后EC109细胞中ncRNA和mRNA表达谱变化,并对差异ncRNA和mRNA表达谱进行整合分析。结果:TSA以剂量时间依赖方式抑制细胞增殖,细胞周期阻滞和凋亡的发生。芯片检测共发现461个ncRNA和758个mRNA显著性差异表达,生物信息学分析显示差异涉及红比霉素、阿霉素代谢过程、氧化还原、核小体的装配、染色质结构组织和端粒的结构组织等。通过数据库分析预测及整合分析,得到了361个ncRNA-mRNA靶基因对。结论:差异表达的ncRNA和mRNA对TSA的生物学效应密切关联,为进一步研究基因功能及其在肿瘤中的生物学意义奠定基础。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂与肾脏疾病

组蛋白去乙酰化是组蛋白表观遗传学修饰的重要的方式之一。组蛋白去乙酰化酶(HDACs)作为调控基因的关键蛋白，其功能异常早已被证实与肿瘤、神经退行性病变、肾脏病等发生和发展关系密切，进而推动HDAC抑制剂(HDACi)的研发及临床应用。本文综述HDACs在肾脏病发生发展中的作用及HDACi在肾脏病治疗中的应用前景。     

血清反应因子经组蛋白乙酰化促进大鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化

目的 探讨血清反应因子(serum response factor,SRF)在大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化为膀胱平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)中的作用和机制.方法 贴壁法分离4周龄雌性SD大鼠的骨髓MSCs与膀胱SMCs,通过Transwell小室共培养诱导MSCs分化.收集MSCs,根据共培养不同时间点进行分组,通过实时荧光定量PCR和免疫荧光法检测共培养SRF MSCs中SMCs标志基因表达;通过染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)定量PCR技术检测SMCs相关基因启动子区组蛋白乙酰化修饰、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)和SRF的富集.丁酸钠(sodium butyrate,NaB)预处理MSCs后与SMCs共培养,实验分为正常共培养对照组和NaB预处理干预组,ChIP-qPCR对比两组间组蛋白修饰和SRF富集情况.结果 共培养MSCs中,α-SMA、Calponin和SM-MHC基因表达量增加,在这些基因启动子区H3K9ace,H3ace和H4ace富集量增加(P＜0.05),同时MSCs中HDAC1和HDAC2降低(P＜0.05).与对照组相比,NaB干预组SRF、H3K9ace和H4ace富集量增加(P＜0.05).结论 SRF可能在HDAC1和HDAC2调节下通过结合H3K9ace和H4ace控制SMCs标志基因表达,从而促进MSCs向SMCs的分化.     

HDAC1和CDK1在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究组蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylase 1,HDAC1）和细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin-dependent kinase 1,CDK1）在结肠癌组织中的表达水平及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:收集2012年2月至2013年6月在本院普外科进行手术切除的51例结肠癌患者的肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织，采用qRT-PCR法检测组织中HDAC1和CDK1 mRNA相对表达量，采用免疫组织化学染色法检测HDAC1和CDK1蛋白阳性表达率，分析肿瘤组织中HDAC1和CDK1表达的相关性及其与患者肿瘤直径、淋巴结转移等临床病理特征的关系，采用Kaplan-Meier生存函数分析HDAC1和CDK1不同表达情况与患者5年总生存率的关系。结果:肿瘤组织中HDAC1和CDK1 mRNA表达水平和蛋白阳性表达率均高于癌旁非肿瘤组织（P＜0.05）；肿瘤组织中HDAC1表达水平与CDK1表达水平呈显著正相关（P=0.012）；肿瘤组织中HDAC1表达与患者肿瘤直径和组织分化程度有关（P＜0.05），CDK1与肿瘤直径、TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关（P＜0.05）；HDAC1、CDK1阳性表达患者5年总生存率均低于其相应阴性表达患者（P＜0.05），HDAC1和CDK1共阳性表达患者5年总生存率低于HDAC1和（或）CDK1阴性患者（P＜0.05）。结论:HDAC1和CDK1在结肠癌组织中高表达，与患者不良预后有关且两者呈正相关，推测两者在促进结肠癌进展中可能存在协同作用。     

选择性组蛋白去乙酰化酶 SIRT2抑制剂的合成及活性研究

目的设计合成新型选择性人沉默调节蛋白2(SIRT2)抑制剂并评价其抗肿瘤活性。方法首先以非典型组蛋白去乙酰化酶SIRT2作为靶标,在前期研究基础上,设计合成了6个N-(3-或4-取代苯基)-2-(芳基杂基)乙酰胺衍生物,并测试其体外对SIRT2的抑制活性;对活性最佳的化合物测试其对SIRT1和SIRT3的抑制活性从而评价其选择性;采用MTT法评价优选化合物1c对10种肿瘤细胞的抑制活性。结果与结论 6个目标化合物对SIRT2均有抑制作用,其中化合物1c活性最好,在50、5μmol·L~(-1)的抑制率分别为95%、71%,且该化合物对SIRT2具有较好的选择性;细胞水平抗肿瘤活性测试表明,化合物1c对肝癌细胞HUH7有较好的抑制作用,在50、25μmol·L~(-1)时的抑制率分别为92%和78%。该研究为特异性SIRT2小分子抑制剂的开发及靶向SIRT2的抗肿瘤药物研究奠定了一定基础。