2-甲氧基雌二醇对恶性黑素瘤B16细胞株增殖与凋亡的影响北大核心CSCD

目的 探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对小鼠恶性黑素瘤B16细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其机制.方法 选用小鼠B16细胞进行体外培养,实验分为阴性对照组和药物处理组,药物处理组加入2-ME,使其终浓度分别为5、10、20、40 μmol/L,阴性对照组不加2-ME.作用不同时间后,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;根据磺酰罗丹明B方法测得的各组A490值绘制生长曲线;采用磺酰罗丹明B法检测黑素瘤细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;逆转录PCR和实时PCR法分析凋亡诱导基因（gadd45b）及原癌基因（c-myc）的表达情况.结果 重复测量的方差分析显示,5、10、20、40 μmol/L的2-ME作用于黑素瘤细胞不同时间后对其增殖的抑制作用差异有统计学意义（F=1170.94,P＜ 0.01）;上述浓度的2-ME作用24、48、72 h对黑素瘤细胞增殖的抑制作用差异亦有统计学意义（F=1843.04,P＜ 0.01）;药物浓度和培养时间存在交互作用（F=272.79,P＜ 0.01）.10、20、40μmol/L 2-ME作用48 h后,B16细胞的凋亡率分别上升至（4.13±1.12）％、（11.25±2.38）％、（19.46±2.9）％,与阴性对照组[（0.23±0.5）％]相比,差异均有统计学意义（P＜0.01）;细胞出现G0/G1期阻滞,对照组细胞、10、20、40 μmol/L 2-ME处理组细胞G0/G1期比例分别为（44.1±3.4）％、（59.5±5.6）％、（63.4±8.2）％、（70.8±4.4）％,且随着浓度的增加,G0/G1期细胞明显增加,各处理组及对照组间比较,G0/G1期细胞比例差异有统计学意义（F=13.56,P＜ 0.05）.与阴性对照组相比,20 μmol/L和40 μmol/L 2-ME作用24 h可升高gadd45b的表达（均P＜ 0.01）,10、20、40μmol/L 2-ME均可降低c-myc基因的表达,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 2-ME在体外能够抑制小鼠恶性黑素瘤B16细胞的增殖,能够使c-myc基因的表达降低,使gadd45b基因的表达升高.     

“平民补品”中的佼佼者

民以食为天,食疗进补更是重中之重。平时煲汤、泡茶时不时都会用到名贵的药材补品,虽然它们都有其他食物无法代替的进补效果,但是有些补品确实是价格偏高,对于百姓而言难以长期食用,那么用一些价格亲民的"平民补品"来代替也就成为一些人的选择。但是,廉价的"平民补品"能否达到我们想要的进补效果?在此笔者为您解答"平民补品"中的佼佼者,方便您进行进补调理。     

Foxp3和HO-1在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓中的相关性表达及依达拉奉保护作用的研究

目的探讨叉头样转录因子-3(Foxp3)和血红素加氧酶(HO-1)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的相关性及依达拉奉对EAE的保护机制。方法建立大鼠EAE动物模型,观察依达拉奉干预前后动物发病情况,应用Real-time PCR方法检测脊髓组织中Foxp3 mRNA和HO-1 mRNA的含量变化;应用免疫组化染色观察脊髓组织Foxp3和HO-1阳性表达。结果依达拉奉能降低EAE的发病率,延迟发病,改善神经功能评分,减少脊髓中炎性细胞浸润和"血管袖套"的形成,促进脊髓中Foxp3和HO-1的转录。结论依达拉奉对EAE和MS具有保护作用,这种作用在病程早期更明显,是通过促进HO-1的表达上调和CD4+CD25+Foxp3+T调节型淋巴细胞(CD4+CD25+Foxp3+Tregs)的发育和功能实现的,具有抗炎和抗氧化的双重作用。     

载脂蛋白E对EAE星形胶质细胞的影响

目的探索载脂蛋白E(apolipoprotein E,apo E)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型小鼠病灶星形胶质细胞的影响。方法采用MOG35-55诱导apo E基因敲除的C57BL/6小鼠(apo E-/-EAE组)及野生型C57BL/6小鼠(普通EAE组),建立EAE模型。取免疫后35 d的EAE小鼠的大脑及脊髓切片,行HE染色,免疫组织化学染色法观察各组小鼠水通道蛋白4(AQP4)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果 apo E-/-EAE组和普通EAE组大脑和脊髓AQP4、GFAP的表达量均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);apo E-/-EAE组大脑和脊髓AQP4、GFAP表达量均高于普通EAE组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 EAE中存在星形胶质细胞水肿、增生,apo E缺乏可以加重这一病变。     

"清心通脉饮"对动脉粥样硬化兔模型相关炎症因子的影响研究

目的:观察清心通脉饮对动脉粥样硬化(AS)兔模型的治疗作用,并探索其可能的机制。方法:新西兰兔采用股动脉球囊扩张术建立AS模型,造模成功后随机分为模型组、阿托伐他汀组和清心通脉饮低、中、高剂量[3.33,6.66,13.32g/(kg·d)]组,每组10只,另取10只兔作为正常组。各组均灌胃给予相应药物或生理盐水,每日1次,连续4周。末次给药后麻醉采血,全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,酶联免疫吸附测定(Elisa)法检测血清C反应蛋白(CRP)、白介素-1(IL-1)、干扰素-β(IFN-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。取腹主动脉,苏木精-伊红染色法(HE)观察腹主动脉病理学变化,蛋白免疫印迹法(WB)检测腹主动脉组织中p38丝裂原活化蛋白酶(p38MAPK)、核转录因子kappaBp65(NF-κBp65)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、调节蛋白激酶(ERK)蛋白及磷酸化p38MAPK、NF-κBp65、JNK、ERK(p-p38MAPK、p-NF-κBp65、p-JNK、p-ERK)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组兔血脂水平和TNF-α、IL-1、CRP、IFN-β含量均显著升高(P0.01),腹主动脉p-p38MAPK、p-NF-κB、p-JNK、p-ERK蛋白表达明显升高(P0.01)。与模型组比较,清心通脉饮中、高剂量组和阿托伐他汀组血清TC、TG、LDL-C水平明显降低(P0.01,P0.05);清心通脉饮高剂量组和阿托伐他汀组HDL-C水平明显升高(P0.01,P0.05);清心通脉饮各剂量组和阿托伐他汀组TNF-α、IL-1、CRP、IFN-β含量明显降低(P0.01),腹主动脉p-p38MAPK、p-NF-κBp65、p-JNK、p-ERK蛋白表达明显降低(P0.01,P0.05)。模型组腹主动脉内膜破坏,结缔组织增生,泡沫细胞形成,纤维斑块钙化,坏死;清心通脉饮高剂量组和阿托伐他汀组动脉壁规整,平滑,未见明显脂质沉积,动脉内皮增生不明显。结论:清心通脉饮可改善动脉粥样硬化进展,其治疗动脉粥样硬化的机制可能与调节血脂代谢,下调p-p38MAPK、p-NF-κBp65、p-JNk、p-ERK蛋白表达,抑制炎症反应,降低炎症因子的表达有关。     

中药影响实验性自身免疫性脑脊髓炎CD4+T细胞亚群分化的研究进展

实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是由CD4⁺T细胞介导的中枢神经系统脱髓鞘性疾病,是国际公认研究多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的动物模型。CD4⁺T细胞作为EAE模型的主要免疫应答细胞,存在多个亚群,可分泌多种细胞因子,参与病情进展。CD4⁺T细胞增殖分化及功能紊乱与EAE发病机制密切相关。目前临床尚无治疗MS的有效药物,多以对症应用皮质类固醇激素为主,但不良反应严重,且易产生药物依赖。近年来中药因作用温和、药物安全性较高、成本低、耐受性好等优点逐渐走进大众视野,针对中药对EAE中CD4⁺T细胞亚群分化的影响展开论述,为临床用药提供更多理论基础。     

炙马钱子对自身免疫性重症肌无力大鼠免疫调节机制研究

目的：探讨炙马钱子对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠的免疫调节机理。方法：采用鼠源乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段方法免疫Lewis大鼠建立实验性重症肌无力模型，观察实验大鼠的临床表现，并将建模成功的EAMG大鼠随机分为模型组，强的松组，炙马钱子低剂量、中剂量和高剂量组，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测正常对照组和成模各组大鼠血清中体液免疫指标AChRab与细胞免疫指标IL-6的含量情况并比较各组之间的差异。结果：大鼠EAMG模型组血清中AChRab和IL-6含量相比正常组显著升高（P＜0.01），药物干预后各组含量都有所下降。炙马钱子高剂量组AChRab含量比中、低剂量组下降更显著（P＜0.01），与强的松组比无显著差异（P＞0.05）；炙马钱子各剂量组IL-6含量均低于强的松组，特别是中、高剂量组更明显低于强的松组，差异有统计学意义（P＜0.01）；炙马钱子中、高剂量组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：炙马钱子能降低EAMG大鼠血清中AChRab和IL-6含量，抑制T、B细胞活化，减轻对突触后膜AchR的损害，缓解EAMG病情，一定剂量范围内的炙马钱子在免疫调节方面表现优于强的松。     

依维莫司和 AR-A014418联合使用促进黑素瘤细胞 A375的凋亡

目的：探讨同时抑制 mTORC1激酶和 GSK-3β激酶活性对黑素瘤细胞4EBP1的磷酸化、帽子依赖翻译、细胞存活和凋亡的影响。方法分别采用二甲基亚砜（DMSO 组）、5 nmol/L 依维莫司（依维莫司组）、10μmol/L AR-A014418（AR-A014418组）、5 nmol/L 依维莫司联合10μmol/L AR-A014418（联合处理组）处理A375细胞，Western 印迹法检测4EBP1的磷酸化和生存素蛋白的表达，m7GTP pull-down 实验检测 eIF4E 和eIF4G 的相互作用，CCK8法和流式细胞仪分别检测 A375细胞的增殖和凋亡。结果依维莫司和 AR-A014418对4EBP1磷酸化和生存素蛋白表达均有一定的抑制作用，两组 p4EBP1-65分别为0.74±0.05和0.62±0.06，生存素蛋白分别为0.71±0.06和0.58±0.07，与 DMSO 组（分别为1.00±0.07和1.00±0.06）相比，均 P ＜0.001，且联合处理组对4EBP1磷酸化（0.14±0.04）和生存素蛋白表达（0.09±0.05）的抑制更为显著。m7GTP pull-down实验显示，依维莫司组（0.72±0.04）、AR-A014418组（0.67±0.05）、联合处理组（0.12±0.05）eIF4G 相对值均低于 DMSO 组（1.00±0.06），而4EBP1相对值均高于 DMSO 组（分别为1.98±0.16、2.32±0.17、7.58±0.25、1.00±0.08），且联合处理组 eIF4G 降低和4EBP1增加最为显著。培养24 h 时，与 DMSO 组相比，依维莫司、AR-A014418、依维莫司联合 AR-A014418均对 A375细胞增殖有抑制作用（后3组抑制率分别为18.5%±1.3%、19.8%±1.8%、61.2%±2.1%），且联合处理组的抑制作用最为显著；培养48 h 时，依维莫司和 AR-A014418对A375细胞增殖的抑制显示相同的趋势，且其抑制作用随时间的延长而增强。流式细胞仪检测显示，依维莫司和AR-A014418单独处理 A375细胞24 h 对其凋亡有一定的促进作用（凋亡率分别为14.28%±2.18%、14.57%±2.35%），联合处理时细胞凋亡更为显著，凋亡率为55.18%±6.27%。结论联合使用依维莫司和 AR-A014418显著抑制 A375细胞中4EBP1的磷酸化，进而抑制 eIF4F 蛋白复合物的形成，从而抑制帽子依赖的翻译，促进黑素瘤细胞的凋亡。