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1.
作者采用盐酸胍法提取兔脑RNA,并经寡聚-(dT)-纤维素亲和层析分离获得完好的总mRNA,这种异源mRNA注入非洲爪蟾卵母细胞胞浆后经放射受体分析证实,γ-氨基丁酸结合蛋白(受体)能被重建于细胞膜上。该重建技术稳定可靠,为进一步进行γ-氨基丁酸受体的体外研究奠定了基础。  相似文献
2.
3.
给非洲爪蟾卵母细胞分别微量注射从去神经大鼠骨骼肌提取的和以电鳐电器宜烟碱胆碱受体四种亚基cDNAs为模板,通过体外转录获得的烟碱胆碱受体的mRNAs,表达出相应的烟碱胆碱受体。以全细胞电压钳位和快速细胞灌流法测定不同浓度的氨甲酰胆碱激动烟碱胆碱受体产生的内向膜电流,以最小反应模型拟合所得的两种受体的量反应曲线非常接近。所祖的两直线回归方程无显著差别,大鼠和电鳐的K值分别为0.567mmol/L和0.575mmol/L,φ值为0.282和0.217。结果表明:两种受体化学动力学特征相似。  相似文献
4.
探讨大鼠肝细胞GSH转运体系在非洲爪蟾卵中表达的可能性。用大鼠肝细胞mRNA注射蛙卵,检测蛙卵转运GSH的活性。结果:注射大鼠肝细胞mRNA的蛙卵,3d后能表达摄聚和释放GSH的转运活性,而注射水的蛙卵则不显著学种转运活性。  相似文献
5.
探讨大鼠肝细胞GSH转运体系在非洲爪蟾卵中表达的可能性。用大鼠肝细胞mRNA注射蛙卵,检测蛙卵转运GSH的活性。结果:注射大鼠肝细胞mRNA的蛙卵,3d后能表达摄取和释放GSH的转运活性,而注射水的蛙卵则不显示这种转运活性。将大鼠肝细胞mRNA进一步分段离心后分别注射蛙卵,发现大鼠肝细胞的两类GSH转运蛋白分别由分子大小为2.0~3.0kb和4.0~5.0kb的mRNA所编码。结论:非洲爪蟾卵可用于检测和克隆大鼠肝细胞GSH的转运蛋白。  相似文献
6.
目的 本文利用在非洲爪蟾卵母细胞表达外源基因的技术,对比研究卵母细胞内源性GABA受体和表达的鼠脑GABA受体,为进一步进行递质与受体的研究奠定方法学基础。方法 实验采用Trazol试剂法及oligo-dt纤维素柱过柱法,从20只大鼠脑组织抽提多聚腺嘌呤mRNA,注入非洲爪蟾卵母细胞表达有功能的受体,并利用电压钳方法记录受体激活电流。结果 卵母细胞内源性GABA受体和表达的鼠脑GABA受体存在多方面的不同。结论 本实验建立的表达模型在研究递质与受体功能、结构、药理学特性等方面起到一定的参考作用。  相似文献
7.
目的:探讨黑色素瘤抑制蛋白(melanoma inhibitory activity,MIA)在非洲爪蟾早期胚胎发育中的作用?方法:根据热带爪蟾MIA序列在非洲爪蟾EST数据库中找到MIA序列,利用RT-PCR扩增全长序列并克隆至pCS2+,用于测序?利用RT-PCR检测胚胎发育各阶段MIA mRNA的表达?通过显微注射特异的反义寡核苷酸morpholino(MO)敲降MIA;利用整胚原位杂交检测胚层标志性基因的表达?结果:克隆出非洲爪蟾MIA全长序列?在胚胎发育过程中MIA从受精卵开始持续表达?敲降MIA导致胚胎胚孔闭合延缓,中胚层标志基因xbra表达明显受抑,而内胚层标志性基因sox17α表达无明显改变?结论:MIA表达于非洲爪蟾胚胎发育各阶段,敲降MIA抑制中胚层的形成?  相似文献
8.
目的:探讨肌醇依赖性激酶1α(inositol requiring enzyme 1α,IRE1α)对非洲爪蟾胰腺发育的影响?方法:通过显微注射基因特异性反义寡核苷酸实现基因敲降;利用整体胚胎原位杂交方法检测基因表达? 结果:IRE1α表达于爪蟾发育中的胰腺;利用基因特异性反义寡核苷酸敲降IRE1α后,非洲爪蟾肠道明显异常,胰腺内外分泌标志性基因胰岛素?淀粉酶表达显著减少;胰腺前体细胞的标志基因pdx1和p48表达明显减少;敲降IRE1α下游基因X-盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)后,非洲爪蟾的胰岛素?淀粉酶表达也明显减少?结论:IRE1α影响非洲爪蟾胰腺发育,可能通过XBP1发挥作用?  相似文献
9.
目的建立非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)C'末端SBP-3×Flag标记的HCT116结直肠癌细胞模型。方法 PCR扩增同源臂,构建TPX2的腺相关病毒打靶载体,包装病毒后打靶HCT116结直肠癌细胞,G418和PCR筛选获得含有新霉素抗性基因的阳性细胞株,最后通过Cre病毒感染去除抗性基因,并用PCR方法筛选获得TPX2C末端SBP和3×Flag内源性双标签的HCT116结直肠癌细胞株。结果筛选获得2个含有新霉素抗性基因的细胞株,随后经Cre病毒感染得到去除新霉素抗性基因的阳性细胞克隆,并经Western blot检测验证了SBP-3×Flag基因的敲入。结论成功建立了TPX2 C'末端SBP-3×Flag标记的HCT116结直肠癌细胞模型。  相似文献
10.
目的:探讨IRE1α在非洲爪蟾胚胎发育中是否介导未折叠蛋白反应(UPR),并在衣霉素(tunicamycin,TM)诱导的胚胎发育畸形中发挥挽救作用?方法:利用TM处理胚胎激发内质网应激;应用显微注射mRNA方法实现基因过表达,通过注射特异的反义寡核苷酸morpholino(MO)实现基因封闭;RT-PCR检测XBP1 剪切情况?结果:XBP1 剪切随IRE1α过表达及封闭而增加或减少;TM处理导致胚胎发育畸形,XBP1剪切增加,封闭XBP1可部分挽救发育畸形;封闭IRE1a可明显挽救发育畸形,XBP1剪切恢复?结论:IRE1α在非洲爪蟾胚胎发育中介导UPR,封闭IRE1α可逆转TM诱导的胚胎发育畸形,部分通过XBP1途径发挥作用?  相似文献
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