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1.
目的 观察胆固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(sterol regulatory element binding proteins cleavage-activating protein,SCAP)功能失调对THP-1源性巨噬细胞脂质代谢及IL-1β、MCP-1表达的影响,探讨SCAP的促炎作用是否依赖于其介导的胆固醇稳态调节功能.方法 采用基因转染方法在THP-1源性巨噬细胞中过表达SCAP或沉默SCAP,结合使用炎症刺激剂LPS(1μg/mL)或SCAP转位抑制剂Betulin(3μmol/L)处理THP-1源性巨噬细胞,将细胞分为对照组、过表达SCAP组、沉默SCAP组、LPS组、沉默SCAP+ LPS组、Betulin组以及过表达SCAP+Betulin组,RT-PCR法检测过表达SCAP或沉默SCAP对HMGCoAR、pro-IL-1β、MCP-1基因表达水平的影响.油红O染色观察不同组别细胞内中性脂质沉积的变化.酶法定量测定胞内胆固醇含量.Western blot法检测SCAP、pro-IL-1β以及培养上清中IL-1β的蛋白水平.结果 ①过表达SCAP组与对照组比较,其HMGCoAR、MCP-1、pro-IL-1β基因表达水平升高(P<0.01),细胞内pro-IL-1β及细胞培养上清中IL-1β蛋白含量均上升(P<0.05),且细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)及胆固醇酯(cholesterol ester,CE)含量上升(P<0.01).②沉默SCAP组与对照组比较,HMGCoAR、MCP-1、pro-IL-1β基因表达水平下降(P<0.05),细胞内pro-IL-1β及培养上清中成熟IL-1β蛋白含量均降低(P<0.05),且细胞内中性脂质蓄积减少,TC及CE含量下降(P<0.05);沉默SCAP+ LPS组与LPS组比较,MCP-1、pro-IL-1β基因表达下调(P<0.05),成熟IL-1β蛋白水平下降(P<0.05).过表达SCAP+ Betulin组与过表达SCAP组比较,HMGCoAR基因表达水平下降(P<0.05),其细胞内,TC及CE含量亦下降(P<0.05),但MCP-1、pro-IL-1β基因表达水平差异无统计学意义(P>0.05),培养上清中成熟IL-1β蛋白含量差异也无统计学意义(P>0.05).结论 胆固醇敏感器SCAP功能失调促进THP-1源性巨噬细胞内炎症因子IL-1β、MCP-1表达,增加成熟IL-1β的生成及其向细胞外分泌;SCAP这一新发现的功能不依赖于其介导的胆固醇稳态调节功能.  相似文献
2.
目的 探讨炎症诱导胆固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(sterol regulatory element binding proteins cleavage-activating protein,SCAP)功能失调促进ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的分子机制.方法 24只8周龄雄性ApoE-/-小鼠(C57BL/6遗传背景,体质量18~24 g)随机分组为高胆固醇饮食组(n=12,对照组)和高胆固醇饮食+炎症组(n=12,炎症组).炎症组小鼠给予隔日皮下注射10%酪蛋白,非炎症组小鼠给予隔日皮下注射生理盐水,共14周.双抗夹心ELISA法检测ApoE-/-小鼠血清炎症指标(serum amyloid A,SAA)和TNF-α水平,HE染色观察ApoE-/-小鼠主动脉结构及局部炎症细胞浸润情况,油红O染色观察ApoE-/-小鼠主动脉斑块形成情况,Real-time PCR法与免疫组织化学法检测ApoE-/-小鼠主动脉LDLr、SREBP2、SCAP、α-甘露糖苷酶Ⅰ及α-甘露糖苷酶ⅡmRNA与蛋白表达.结果 炎症组小鼠血清SAA[(529 ±23)ng/mL]与TNF-α[(37 900 ±3 100)ng/mL]水平显著高于对照组小鼠血清SAA[(248±27) ng/mL]与TNF-α[(1 789±219) ng/mL]水平(P<0.01),表明ApoE-/-小鼠炎症模型建立成功.炎症组小鼠较对照组小鼠主动脉粥样硬化性病变更为严重(P<0.01),其LDLr、SCAP及α-甘露糖苷酶ⅡmRNA及蛋白表达、细胞核内NSREBP2水平明显高于对照组(P<0.05).结论 炎症通过增加血管壁细胞内胆固醇敏感器SCAP的表达,并通过增强高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ对SCAP的糖基化修饰,促进ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的发生和发展.  相似文献
3.
目的:观察蓝莓对急性酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver,AFL)小鼠肝组织中肿瘤坏死因子-α-受体1(tumor necrosis factor-α-recepter1,TNF-α-R1)、胆固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding protein,SREBP)-1c m RNA及蛋白表达的影响。方法:50只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白组、模型组、蓝莓汁高剂量组(20.0 g/kg)、蓝莓汁低剂量组(10.0 g/kg)、硫普罗宁组(30 mg/kg),每组10只。除空白组外,其余各组小鼠分别予Lieber-De Carli酒精饲料喂饲,蓝莓汁高、低剂量组及硫普罗宁组同时分别予相应剂量蓝莓汁或硫普罗宁灌胃1次/d,连续15 d,第16天给予1次乙醇灌胃,建立急性AFL动物模型。全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、甘油三酯(triglycerides,TG)及胆固醇(cholesterol,TC),酶联免疫吸附法检测血清TNF-α,光镜下观察小鼠肝脏病理学变化,RTPCR、Western blot检测小鼠肝组织中TNF-α-R1、SREBP-1c m RNA及蛋白质表达。结果:蓝莓汁高、低剂量组和硫普罗宁组小鼠血清ALT分别为(67.70±5.86)、(81.66±4.93)、(63.49±3.27)U/L,AST分别为(184.46±14.57)、(214.45±22.03)、(169.16±18.52)U/L,TG分别为(0.88±0.06)、(1.22±0.08)、(0.81±0.09)mmol/L,TC分别为(2.30±0.13)、(2.74±0.10)、(2.21±0.16)mmol/L,TNF分别为(49.14±6.14)、(66.55±5.67)、(44.68±5.39)ng/L,均显著低于模型组(P=0.000或P=0.025),肝细胞病理学改变明显轻于模型组(P=0.000);蓝莓汁高、低剂量组和硫普罗宁组小鼠肝组织TNF-α-R1 m RNA表达分别为100.44±9.51、132.70±8.07、94.02±6.05,蛋白表达分别为0.52±0.04、0.72±0.04、0.49±0.04,SREBP-1c m RNA表达分别为133.52±5.91、174.51±10.62、129.83±9.83,蛋白表达分别为0.26±0.05、0.41±0.03、0.23±0.05,均明显低于模型组(均P=0.000)。结论:蓝莓能改善小鼠急性AFL,可能与下调其肝组织TNF-α-R1与SREBP-1c的表达有关。  相似文献
4.
目的探讨非酒精性脂肪肝患者血清胆固醇调节元件结合蛋白-1,脂联素变化及其意义。方法选择30例符合诊断标准脂肪肝患者,并设30倒健康体检者为正常对照粗。应Elisa技术,Real-timePCR技术检测血清胆固醇调节元件结合蛋白-1.脂联素含量及其mRNA变化。结果NAFLD患者脂联素含量减少,其mRNA表达呈下降趋势l而胆固醇调节元件结合蛋白-l含量增多,mRNA表达呈上升趋势。与正常组比较,有统计学意义(P〈0.05)。结论胆固醇调节元件结合蛋白-1和脂联素变化在非酒精性脂肪肝发展占据重要地位,这意味着调控胆固醇调节元件鲒合蛋白-1表达和脂联素分泌对于非酒精性脂肪肝防治是有益的。  相似文献
5.
Yang LL  Wang M  Liu T  Song HY  Li DF  Zheng PY  Liu P  Ji G  Ji G 《中西医结合学报》2011,9(9):998-1004
目的:研究降脂颗粒(Jiangzhi Granule,JZG)对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liverdisease,NAFLD)大鼠肝X受体α(liver X receptorα,LXRα)和固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein-1c,SREBP-1c)表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠40只随机分成正常组、模型组、吡格列酮(pioglitazone,PIO)组和JZG组,每组各10只。正常组给予普通饲料,模型组、PIO组及JZG组给予高脂饲料(88%普通饲料+10%猪油+2%胆固醇)。造模4周后药物干预4周,留取肝脏组织,苏木精和伊红染色进行病理学观察,并检测肝组织三酰甘油(triacylglycerol,TAG)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)水平;腹主动脉采血,检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性;实时聚合酶链式反应法检测肝组织LXR-α和SREBP-1c mRNA表达;蛋白质印迹法检测肝组织LXRα和SREBP-1c的表达。结果:模型大鼠肝组织出现明显的大泡性脂肪变性,JZG可显著降低模型大鼠血清ALT和AST水平,JZG与PIO均可降低模型大鼠肝组织FFA、TAG含量及LXRα、SREBP-1c的表达水平。结论:JZG可调节模型大鼠脂肪酸代谢紊乱,其作用可能与下调肝组织LXRα和SREBP-1c的表达有关。  相似文献
6.
脂质的异位沉积是代谢综合征(MS)发病的中心环节,与脂肪肝、2型糖尿病及并发症的发生相关。胆固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)是一种重要的核转录因子,具有3个异构体,它主要通过调节脂肪和胆固醇的合成在体内能量稳态调节中发挥重要的作用。大量研究显示,SREBPs参与胰岛素信号通路的组成,同时在高脂血症、胰岛素抵抗、糖尿病及脂肪肝患者可有高表达,但其病理生理机制目前尚不明确。SREBPs也参与MS各组分的发生发展,对SREBPs进行全面深入的研究,将有助于提高对MS及其各组分的认识,并指导临床治疗。  相似文献
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