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1.
Background The cytochrome P450 lanosterol 14a-demethylase (Ergllp) encoded by ERG11 gene is the primary target for azole antifungals. Changes in azole affinity of this enzyme caused by amino acid substitutions have been reported as a mechanism of azole antifungal resistance. This study aimed to investigate the relationship between amino acid substitutions in Erg11 p from fluconazole resistant Candida a/bicans (C. albicans) isolates and their cross-resistance to azoles. Methods Mutations in ERG11 gene were screened in 10 clinical isolates of fluconazole resistant C. albicans strains. DNA sequence of ERG11 was determined by PCR based DNA sequencing. Results In the 10 isolates, 19 types of amino acid substitutions were found, of which 10 substitutions (F72S, F103L, F1451, F198L, G206D, G227D, N349S, F416S, F422L and T482A) have not been reported previously. Mutations in ERG11 gene were detected in 9 isolates of fluconazole resistant C. albicans, but were not detected in 1 isolate. Conclusions Although no definite correlation was found between the type of amino acid substitutions in Ergllp and the phenotype of cross-resistance to azoles, the substitutions F72S, F1451 and G227D in our study may be highly associated with resistance to azoles because of their special location in Erg11p.  相似文献
2.
Li N  Fan H  Chen HL  Ye YX  Lu XJ  Xie Y  Ying BW 《中华医学杂志》2008,88(20):1380-1383
目的 了解西南地区社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)流行株的基因特征.方法 用葡萄球菌盒式染色体(SCCmec)多重PCR分型技术、葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型技术和多位点测序分型(MLST)技术对3株分离自临床的CA-MRSA(s35301、s29635、s19165)进行基因分型,并检测其杀白细胞毒素(PVL)基因.结果 3株MRSA的mecA基因(147 bp)全部为阳性扩增,还同时扩增出750 bp左右的片段,该产物经测序后证实为SCCmecⅣa型.spa分型:s35301、s29635为t437,s19165为t008.MIJST分型:s35301、s29635为ST59型,s19165为ST8型.s19165、s35301 PVL基因扩增阳性,s29635 PVL基因扩增阴性.结论 西南地区分离到CA-MRSA ST8-t008克隆株及ST59-t437克隆株.应注意控制CA-MRSA感染及传播.  相似文献
3.
2005年广东省临床分离猪链球菌的MLST分子分型研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
在2005年四川发生猪链球菌人间感染疫情期间.广东省也加强了监测,并发现了5个散发感染病例.从这5个住院临床病例中,分别分离了5个致病性SS2.通过测定猪链球菌基因组上的7个看家基因dpr、thrA、cpn60、recA、gki、aroA和mutS的部分片段.对这5个猪链球菌进行了多佗点测序分型.通过对上述测序片段进行比对分析发现,5个菌株的dpr、cpn60、recA、gki、aroA和mutS等6个基因片段完全相同;而thrA基凶片段存在两个等位基因型即thrA-c和thrA-h,在该等位基因片段的360位的亮氨酸码子第三位发生了一个中性突变(TTA→TTG).MLST分析结果显示,广东省的临床猪链球菌分离株L-SS002、L-SS003和L-SS005菌株.与四川疫情株相同,属于ST7型;而L-SS004和L-SS006,与香港地区发现的猪链球菌相同,属于ST1克隆;但这5个菌株亲缘关系极近,都属于ST1克隆复合物;这一点与四川省暴发的人间猪链疫情明显不同,后者仅由单一的ST7猪链球菌克隆引起.属于ST7的克隆菌株很可能来源于四川;而其余两个ST1克隆系菌株的来源尚待鉴定.  相似文献
4.
porD和oorD基因突变与幽门螺杆菌对呋喃唑酮耐药的关系   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:调查镇江地区幽门螺杆菌对呋喃唑酮耐药情况,初步探索幽门螺杆菌对呋喃唑酮的耐药机制.方法:临床分离幽门螺杆菌菌株通过E-test法和琼脂稀释法测其耐药率,对药敏试验阳性菌株扩增其porD和oorD两基因并测序、比对.结果:镇江地区幽门螺杆菌临床分离株对呋喃唑酮耐药率为8.7%,且以低水平耐药为主;扩增产物测序、比对后发现porD基因有三个位点突变(C357T,A356G,G353A),以C357T为常见;oorD突变位点为A041G,A122G和C349A(G).结论:porD和oorD基因的突变可能与幽门螺杆菌对呋喃唑酮产生低水平耐药相关.  相似文献
5.
广州地区宫颈癌组织标本中HPV感染情况的初步分析   总被引:3,自引:1,他引:2  
目的 探讨广州地区宫颈癌患者人乳头瘤病毒(HPV)感染及其型别分布.方法 采用HPV通用引物对宫颈癌组织标本中的HPV L1区基因序列进行PCR扩增,根据PCR产物测序所得序列分析对HPV分型.结果 130例宫颈癌组织HPV DNA检出率为82.3%,广州宫颈癌患者存在HPV16、33、18、52、11、31、58、68、53和59十种型别.结论 证实了生殖道高危型HPV感染是妇女宫颈癌发病的重要因素.  相似文献
6.

Background Infantile proximal spinal muscular atrophy (SMA) is a common autosomal recessive neuromuscular disorder. Approximately 90%–95% cases of SMA result from homozygous deletion of survival motor neuron gene 1 (SMN1) and 5% cases are caused by compound heterozygous mutation (a SMN1 deletion on one allele and a subtle mutation on the other allele).

Methods In this research, two unrelated patients were clinically diagnosed according to the criteria of proximal SMA. Genetic diagnosis was performed to detect the homozygous deletion of exon 7 of SMN1 by PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) and genomic sequencing. Multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) analysis was carried out to measure copy numbers of SMN1, SMN2 and neuronal apoptosis inhibitor protein (NAIP) in the patients. Further sequencing of SMN1 allele-specific PCR (AS-PCR) and SMN1 clones were also performed to analyze the point mutation of SMN1 gene. Additionally, the pedigree analysis of these two families was carried out to identify the transmission of the mutation.

Results The inconsistent results using PCR-RFLP and genomic sequencing showed homozygous deletion of exon 7 of SMN1 and heterozygous deletion accompanied with a suspicious mutation in SMN1 gene, respectively. MLPA analysis of these two cases exhibited one SMN1 copy deletion. One identical c.863G>T (p.Arg288Met) mutation was found in two cases by sequencing the SMN1 clones, which confirmed that both cases were SMA compound heterozygotes. One case showed partial conversion to form hybrid SMN (SMN2 I7/SMN1 E8) identified by clones sequencing and another case carrying 3 SMN2 implied complete conversion from SMN1 to SMN2.

Conclusion p.Arg288Met is more a disease-causing mutation than a polymorphism variation, and children with this mutation may have more severe phenotypes.

  相似文献
7.
新一代高通量测序技术及其临床应用前景   总被引:2,自引:0,他引:2  
自1987年美国Applied Biosystems (ABi) 公司推出第一台自动化测序仪-ABi370以来,Sanger测序法以其可靠、准确、读长高等优点而得以迅速发展,并被广泛运用于科研和临床工作.但Sanger测序法的局限性在于对电泳分离技术的依赖,以及无法再进一步地扩大并行和微量化,造成该技术对不同生物基因组进行序列测定的规模限制和代价高昂,绘制第1张人类基因组图谱前后共耗费13年时间,显然不是一个临床所能接受的速度.  相似文献
8.
目的  分析HBV P基因区核苷(酸)类似物相关10个位点的变异情况。方法  采用焦磷酸测序法对NA治疗并发生病毒学突破或不充分病毒学应答的慢性乙型肝炎患者HBV P基因区10个位点(rtI169T、rtV173L、rtL180M、rtA181V/T、rtT184G、rtA194T、rtS202I、rtM204V/I、rtN236T、M205V)进行检测。结果  拉米夫定(LAM)耐药48例,4个耐药位点呈8种模式,以rtM204为主;阿德福韦酯(ADV)10例,2个耐药位点呈4种模式,以rtA181为主;替比夫定(LdT)4例,2个耐药位点呈2种模式,均存在rtM204I;恩替卡韦(ETV)6例,7个耐药位点呈4种模式,以rtT184多见。结论  应用NA可筛选出HBV P基因区的相关耐药变异,建议病毒突破患者检测耐药并行个体化治疗。  相似文献
9.
鲍曼不动杆菌产PER-1型ESBLs基因的克隆、测序及分析   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的分析产PER-1型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)鲍曼不动杆菌的耐药性及其基因的核苷酸序列。方法先后用最低抑菌浓度(MIC)初筛法和纸片扩散确认法从临床分离的鲍曼不动杆菌中检测产ESBLs菌株,并用聚合酶链式反应(PCR)、克隆测序方法分析质粒上PER-1型ESBLs基因。结果93株鲍曼不动杆菌中,产ESBLs菌株有16株,占17.20%,均为多重耐药菌。其中PER-1型ESBLs阳性菌株有8株;TA克隆后测序表明与铜绿假单胞菌(AJ621265.1)blaPER-1基因序列100%同源。结论发现质粒上同时带产TEM-1、PER-1型ESBLs和OXA-23型碳青霉烯酶基因的鲍曼不动杆菌,blaPER-1基因可能来源于铜绿假单胞菌。  相似文献
10.
鸡贫血病毒Apoptin蛋白编码基因的克隆和序列分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
刘德纯  王健生  王作仁  段小艺  陈武科  杨广笑 《医学争鸣》2007,28(11):961-961,962,963
目的:为了寻找肿瘤特异凋亡蛋白,克隆鸡法氏囊组织中鸡贫血病毒Apoptin蛋白的编码基因并进行序列分析. 方法:根据基因数据库资料设计合成引物,以成鸡法氏囊组织中提取的DNA作模板,通过PCR获得了特异扩增产物,将其插入到pGEMT-easy载体并转染感受态E.coli-DH5α菌株,提取质粒经限制性内切酶酶切鉴定后,使用DNA测序仪测定插入片段的DNA序列. 使用DNAsis分析软件分析所克隆的DNA序列及其编码蛋白质,并与数据库中Apoptin蛋白的编码基因相比较. 结果:序列分析表明,成功地克隆了鸡贫血病毒的Apoptin基因,同基因数据库中的相关资料比较发现与山东报道的Apoptin基因(GenBank AY171617)的核酸序列一致,同鸡贫血病毒全基因序列中的Apoptin序列(GenBank AF 313470)有6个核酸差异. 结论:Apoptin编码基因的克隆为特异诱导肿瘤细胞凋亡治疗肿瘤奠定了基础.  相似文献
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