Sa抗原相关蛋白质的研究

目的 研究类风湿关节炎（RA）特异性抗Sa抗体识别的Sa抗原，探讨Sa抗原的相关蛋白质。方法 从人胎盘组织阴离子交换柱层析法纯化Sa抗原，应用免疫印迹法检测155例各种风湿病患者血清的抗Sa抗体，155例患者中类风湿关节炎71例，强直性脊柱炎11例、银屑病关节炎7例、反应性关节炎7例、幼年特发性关节炎4例、骨性关节炎5例、风湿性多肌痛6例、痛风6例、系统性红斑狼疮7例、干燥综合征10例、炎性肌病8例、混合性结缔组织病4例、白塞病6例、成人Still病3例。切取与免疫印迹法阳性条带相对应的电泳胶内条带，胰蛋白酶胶内酶解，用高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱鉴定目标蛋白质。以大肠杆菌重组表达目标蛋白质作为抗原，以免疫印迹法检测相应抗体。瓜氨酸化修饰重组蛋白质作为抗原，以免疫印迹法检测相应抗体。结果 抗Sa抗体表现为相对分子质量为50000（和）55000的阳性印迹条带，在155例风湿病中，对RA的诊断敏感性和特异性分别为47．9％和95．2％。质谱鉴定Sa抗原相关蛋白质为波形蛋白（Vimentin）。抗波形蛋白抗体在RA组与其他风湿病组的阳性率差异有统计学意义（P=0．005），对RA的诊断敏感性和特异性分别为36．6％和83．3％，但与抗Sa抗体的一致性差（Kappa=0．316）。抗瓜氨酸化波形蛋白抗体阳性率在RA组较其他风湿病组高（P〈0．01），对RA的诊断敏感性和特异性分别为49．3％和86．9％，且与抗Sa抗体的一致性较高（Kappa=0．746）。结论 运用质谱技术鉴定的Sa抗原相关蛋白质波形蛋白，瓜氨酸化修饰后的抗原性与Sa抗原相仿，提示瓜氨酸化波形蛋白与Sa抗原密切相关。  

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子与大肠癌上皮间质转化的关系

目的 探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)与大肠癌上皮间质转化的关系.方法 应用免疫组化二步法检测143例大肠正常组织、大肠癌、大肠淋巴结转移癌石蜡组织标本中Tiam1、E-cadhefin、CK、vimemin的表达情况.结果 (1)Tiam1在大肠癌组织中表达显著高于正常组织(P<0.01),且与大肠癌分化程度有关(P<0.05);Tiam1在淋巴结转移癌中表达显著高于大肠癌原发灶(P<0.05);(2)E-cadherin、CK在大肠正常组织中表达高于癌组织(P<0.01),在大肠癌中的表达与分化程度有关(P<0.01),但在大肠癌与淋巴结转移癌中表达差异无显著性;(3)vimentin在大肠癌中表达比正常组织高(P<0.01),且与分化程度有关(P<0.01),但在大肠癌与淋巴结转移癌中表达无显著性差异;(4)Tiam1与E-cadherin、CK表达呈负相关,与vimentin表达呈正相关.结论 Tiam1与大肠癌分化和转移有关,其促进大肠癌转移的机制可能与上皮间质转化发生有关.  

波形蛋白在肾细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究波形蛋白(v im entin)在肾细胞癌组织中的表达,从细胞骨架蛋白角度阐述肾细胞癌侵袭转移的可能机制。方法:应用W estern印迹法检测52例肾细胞癌组织及26例癌旁正常肾组织中v im entin的表达差异情况,并分析其与肾细胞癌分级、分期之间的关系。结果:肾细胞癌组织中v im entin的表达阳性率显著高于癌旁正常肾组织。对v im entin蛋白条带的灰度值分析显示,v im entin的相对表达水平与肾细胞癌的分级与分期均显著相关,随着肾细胞癌分级、分期水平的增高,其相对表达量也逐渐增多。结论:v im entin可能在肾细胞癌的进展和转移过程中发挥重要作用,并可能为早期监测肾细胞癌发生及判断预后提供依据。  

端脑腹侧的胆碱能前体细胞的胚胎来源

目的为探索胆碱能神经元的胚胎来源,验证放射状胶质细胞是否表达乙酰胆碱转移酶。方法通过对孕14天（E14）大鼠胚胎端脑冠状石蜡切片进行波形蛋白（放射状胶质细胞标志性蛋白,vimentin）和乙酰胆碱转移酶（胆碱能神经元的标志性蛋白ChAT）双重荧光免疫组织化学染色,并通过重叠同一视野内的荧光双染的图片来精确地体现放射状胶质细胞表达ChAT的位置。结果 E14大鼠端脑腹侧脑室区有部分组织呈vimentin/ChAT免疫化学双染阳性,这和资料中证实的胆碱能神经元E14天出现于第三脑室的腹背侧部的结论是一致的。结论 E14大鼠端脑内的放射状胶质细胞表达ChAT。表明放射状胶质细胞具有神经干细胞性质,它不断地进行不对称分裂,产生胆碱能表型的成神经细胞,即胆碱能前体细胞。  

抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体对类风湿关节炎的诊断价值

目的:探讨抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)抗体对类风湿关节炎(RA)的诊断价值.方法:用酶联免疫吸附试验测定117例RA患者(RA组)和42例正常对照的血清抗MCV和抗环瓜氨酸多肽(CCP2)抗体,用速率散射免疫比浊法同步检测类风湿因子IgM(RF-IgM),利用受试者工作特征(ROC)曲线分析抗MCV抗体对RA的诊断价值.结果:抗MCV和抗CCP2抗体的诊断界值分别为21 U/mL、12 U/mL时,2者对RA诊断的灵敏度分别为75.6%和66.7%,特异性分别为92.5%和98.1%,2者联合的灵敏度和特异性分别为63.2%和98.7%;抗MCV抗体的ROC曲线下面积(AZ)为0.853(95%CI0.801～0.906),抗CCP2抗体的AZ为0.910(95%CI 0.873～0.946),2者差异无统计学意义(Z=0.890,P=0.230).2者联合的AZ为0.923(95%CI 0.831～0.957),与抗MCV和抗CCP2抗体单独测定的AZ比较,差异亦无统计学意义(Z=2.190,P=0.080;Z=1.670,P=0.120).结论:抗MCV抗体在诊断RA时与抗CCP2抗体效果相当,2者联合检测并无明显优势.  

人波形蛋白中间丝的结构和功能及其与肿瘤的关系

波形蛋白是一种重要的Ⅲ型中间丝蛋白,主要表达于胚胎组织和由间叶组织来源的成体细胞,研究表明波形蛋白在胚胎发育和细胞分化、细胞的黏附和移动、细胞凋亡、炎症和免疫反应中发挥重要的生物学功能。然而,到目前为止,波形蛋白的确切功能仍然存在争议,主要是因为波形蛋白基因剔除小鼠没有出现异常的生物学表型。癌细胞表达波形蛋白与其生长、侵袭和肿瘤发生密切相关,波形蛋白与恶性肿瘤相互关系的研究已成为肿瘤分子生物学和肿瘤演进的一个重要领域。  

细胞凋亡信号调节蛋白1对大鼠脊髓损伤后GFAP、vimentin表达及后肢运动功能的影响

目的：探讨细胞凋亡信号调节蛋白1（ASK1）对大鼠脊髓损伤（SCI）后胶质瘢痕中中间丝蛋白胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和波形蛋白（vimentin）的表达及损伤大鼠后肢行为学和电生理变化的影响。方法采用大鼠脊髓夹伤模型，设ASK1特异性抑制剂Thioredoxin组（Trx组）、ASK1单克隆抗体组（Anti-ASK1组）、生理盐水对照组（Model组）及假手术组（Sham组），于损伤即刻在损伤局部分别给予Thioredoxin、ASK1单克隆抗体、生理盐水各10μl，Sham组大鼠仅打开椎板暴露脊髓，不造成SCI。各组大鼠定期（SCI后1、7、14、28 d）应用Western blot和免疫荧光法检测GFAP、vimentin的表达，BBB评分检测大鼠后肢行为学变化，体感诱发电位及运动诱发电位检测电生理的变化。结果 SCI后1 d各组GFAP、vimentin的表达无明显差异，7、14、28 d Trx组、Anti-ASK1组GFAP、vimentin的表达较Model组明显下降（P<0.01）；SCI后1、7、14 d各组BBB评分及体感诱发电位、运动诱发电位无明显差异，SCI后28 d，Trx组、Anti-ASK1组BBB评分较Model组明显升高（P<0.01），体感诱发电位及运动诱发电位潜伏期明显缩短，波峰值明显升高（P<0.01或P<0.01）。结论抑制ASK1可减弱大鼠SCI胶质瘢痕局部GFAP、vimentin的表达，并可促进大鼠后肢运动功能的恢复和电生理的改善。  

小脑孤立性纤维瘤一例并文献复习

孤立性纤维瘤(solitary fibrous tumors,SFT)是一种间叶来源的梭形细胞肿瘤,免疫组织化学指标以波形蛋白 (vimentin)和CD34为代表。SFT主要发生于胸膜腔,也可发生于包括中枢神经系统在内的全身其他部位。在中  

反义及正义Vim重组逆转录病毒表达载体的构建

目的构建反义及正义波形蛋白重组逆转录病毒载体，研究波形蛋白在反应性胶质化中的功能与作用。方法应用分子克隆方法克隆、鉴定、包装并感染培养的星形胶质细胞。结果同时获得全长反义及正义Vim逆转录病毒克隆细胞株和较高滴度的病毒上清，反义Vim逆转录病毒抑制培养星形细胞的Vim表达。结论重组的反义及正义Vim逆转录病毒可用于进一步的实验研究。  

人近端肾小管上皮细胞的原代培养

目的应用组织块培养法建立人近端肾小管上皮细胞的原代培养方法。方法取肾皮质组织块，应用无血清培养液进行原代培养，融合后用胰蛋白酶-EDTA消化传代。取第三代细胞检测细胞角蛋白、波形蛋白、碱性磷酸酶、结蛋白、Ⅷ因子、α-肌动蛋白的表达，应用扫描电镜和透射电镜观察细胞的超微结构。结果融合的上皮单层细胞呈铺路石样表现，伴圆顶(dome)形成。细胞角蛋白、波形蛋白和碱性磷酸酶染色阳性，α-肌动蛋白、Ⅷ因子相关抗原、纤维连接蛋白和结蛋白染色阴性。细胞存在极性，细胞尖端存在短的微绒毛，细胞之间连接紧密。结论应用组织块培养法结合无血清培养液可以成功建立原代人近端肾小管上皮细胞系。