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1.
小鼠骨髓和脾来源树突状细胞的分离与扩增培养   总被引:23,自引:5,他引:18  
探索树突状细胞及其前体的分离纯化及其体外增的方法。方法无菌制备BALB/C小鼠骨髓和脾细胞;先用用细胞裂解液,抗鼠CD4、CD8、B细胞单抗和补体溶液,依次去除红细胞,、T、B细胞,粒细胞和单核-巨噬细胞等混杂细胞耐获得纯化的DC及其前体;  相似文献
2.
人外周血树突状细胞的体外培养扩增   总被引:19,自引:2,他引:17  
目的:P在体外从人外周血中培养坟拉树突状细胞。方法:从正常人外周血分离PBMC,经两次孵育粘附,弃去悬浮细胞后加细胞因子(GM-CSF,IL-4)和培养液进行培养,并对培养过程进行观察鉴定。结果:培养1周后即可培养出典型的树突状细胞,经FITC-CD1a单抗标记a表达率为65%,并能刺激同种淋巴细胞增殖反应,结论:利用GM-CSF和IL-4可以从人外周血中扩增出大量DC,可为后续研究做准备。  相似文献
3.
目的观察粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰的树突状细胞(DC)与肿瘤细胞融合后,体内诱导的抗肿瘤免疫应答及对荷瘤小鼠的治疗效果。方法从C57BL/6小鼠脾脏中分离DC,用重组腺病毒载体进行GM-CSF基因修饰,再与F10小鼠黑色素瘤细胞进行融合,通过抗Ia抗体磁珠阳性选择和贴壁培养富集融合细胞。结果经灭活的、由GM-CSF基因修饰的DC与B16.F10融合的FD-GM能在体内诱导出更强的细胞毒性T淋巴细胞(CTL),抵抗野生型B16.F10细胞的再次攻击,使经治疗的肺转移荷瘤小鼠的存活期明显延长,肺转移结节显著减少。结论肿瘤细胞与GM-CSF基因修饰的树突状细胞融合后进行体内免疫,能诱导出显著的抗肿瘤免疫反应,可望成为肿瘤基因治疗的新途径。  相似文献
4.
树突状细胞的研究热点及其与疾病的防治   总被引:17,自引:0,他引:17  
树突状细胞(Dendriticcels,DC)是目前发现的功能最强的抗原提呈细胞,在免疫反应中起了举足轻重的作用,因此,DC研究倍受重视。90年代以来,人们在体外大量扩增DC成功之后,克服了以往由于DC在组织中含量很少、难以获取的困难,使DC研究取得...  相似文献
5.
目的:在人外周血中有效地诱导,培养树突状细胞(dendritic cells,DC)并鉴定其表面分子的表达,方法:采用密度梯度离心的方法分离人外周血中的单个核细胞,在6孔板上贴壁2h,然后吸去悬浮细胞,用粒细胞-巨噬细胞集落群体刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)细胞因子组合,刺激树突状细胞(DC)增殖,分化。用标有荧光素的单抗标记培养细胞,在激光共聚共焦显微镜下拍摄标记有荧光素的细胞,在流式细胞仪上分析所培养的细胞。结果:该细胞直径在10-20μm,培养14天后,CD1a^ 48%,CD83^ 97%,CD40^ 33%,人体主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ^ 95%,CD80^ 98%,CD86^ 93%,CD83是DC的成熟标记。结论:该方法是一种可靠的诱导和培养DC的方法,对于乳腺癌患者还可通过动员等措施进一步提高DC的分离率。  相似文献
6.
目的 探讨Ⅱ型树突状细胞 (typeII dendriticcells,DC2 )数量和功能的变化及其与乙型肝炎 (乙肝 )患者病程、淋巴细胞亚群和HBVDNA病毒载量的关系。方法 采用流式细胞分析技术对 10 3例乙肝患者 (包括HBV携带者 11例 ,慢性乙肝轻度 35例 ,中度 33例 ,重度 13例 ,急性乙肝11例 )和 2 5例健康人 (对照组 )的外周血DC2进行检测 ,同时检测患者血常规 ,计算出DC2绝对数 ;用体外灭活的 1型单纯疱疹病毒 (HSV 1)刺激外周血单个核细胞 (PBMC)并与PBMC进行 2 4h共培养 ,检测上清中DC2的α干扰素产生能力 ;统计分析DC2数量、功能变化及其临床意义。结果 对照组外周血DC2占PBMC比例为 0 32 %± 0 13% ,绝对数为 (7 2± 2 4 ) 10 6个 /L。与对照组比较 ,HBV携带者DC2的比例 (0 32 %± 0 12 % )和绝对数 (6 9± 3 4 ) 10 6个 /L无明显下降 ;急性乙肝患者的DC2比例和绝对数下降 ,但无统计学意义 ;而慢性肝炎患者DC2的比例和绝对数随病程加重而降低 ,中、重度肝炎的DC2下降较轻度更为显著。DC2产生α干扰素的功能在急、慢性乙肝患者及HBV携带者均降低 ,各组患者之间差异不显著 ;DC2的数量与HBVDNA病毒载量未发现相关性 ,但与自然杀伤 (NK)细胞及CD8+ T数量高低存在正相关。结论 慢性乙肝患者外周血DC2数量和#0;  相似文献
7.
大鼠树突状细胞的体外分离、纯化、扩增及鉴定   总被引:16,自引:0,他引:16  
目的 探讨诱导及纯化大鼠树突状细胞(Dendritic cells,DC)的方法,为进一步研究树突状细胞的功能、特性及临床应用提供技术方法。方法 应用重组大鼠rGM-CSF、IL-4在体外培养大鼠骨髓前体细胞获得大量DCs,经标抗大鼠OX62单抗免疫磁株分离纯化后的DCs经形态学观察、表型检测、功能学实验鉴定。结果 大鼠骨髓来源的DC在体外培养12-14d后完全成熟,99.36%培养纯化后DC表达大鼠特异性表面标志OX62;典型的成熟大鼠DC形态上类似于小鼠和人类的DC,表型为MHCⅡ++,OX62++,FcγR(CD32)+/-,CD80+/-,CD86++,体外功能分析显示该DC能够强烈刺激MLR并有效递呈可溶性抗原OVA刺激初始型T细胞的增殖。结论 成功地建立了体外大量扩增大鼠骨髓DC的方法,为研究其在异种移植及诱导免疫耐受的作用打下基础。  相似文献
8.
Shi M  Zhang B  Tang ZR  Lei ZY  Wang HF  Feng YY  Liu JC  Fan ZP  Li HW  Mu JS  Wang FS 《Zhonghua yi xue za zhi》2003,83(23):2049-2053
目的 观察肝癌患者自体细胞因子诱导杀伤细胞 (CIK细胞 )回输后 ,外周血中T细胞亚群及树突状细胞亚群的变化 ,评价CIK细胞治疗肝癌的临床效果。方法 采用成份血采血机采集13例肝癌患者的外周血单个核细胞 (PBMC) ,经多种细胞因子诱导后 ,于培养的第 4、7、10、13、15天流式细胞仪检测细胞表型 ;CIK细胞回输前及回输后取病人外周血 ,流式细胞仪测定Ⅰ型树突状细胞(DC1)和Ⅱ型树突状细胞 (CD2 )的比例。结果 诱导培养后 ,CD3+ CD8+ ,CD3+ CD5 6 + ,CD2 5 + 效应细胞的比例明显升高 ,分别由最初的 33 5 %± 10 1%、7 7%± 2 8%和 12 3%± 4 5 % ,上升至 36 6 %±9 0 %、18 9%± 6 9%和 16 4 %± 5 9% ,其中CD3+ CD8+ 可维持较高水平 ,CD2 5 + 和CD3+ CD5 6 + 比例分别于培养后的第 7天和第 13天开始下降。CD3+ CD4 + 和NK细胞比例略有下降 ,但差异无显著意义。CIK细胞回输后DC1和CD2细胞亚群的比例明显升高 ,分别由回输前的 0 5 9%± 0 2 3%和0 2 6 %± 0 12 %上升至回输后的 0 85 %± 0 2 7%和 0 4 3%± 0 2 0 %。CIK细胞治疗后患者临床症状明显改善 ,无明显副作用。结论 CIK细胞治疗可以提高肝癌患者的细胞免疫功能 ,提高对肿瘤细胞的杀伤作用。  相似文献
9.
转化生长因子β1对鼠造血祖细胞产生树突状细胞的调控作用   总被引:15,自引:0,他引:15  
目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对造血祖细胞(HPC)产生树突状细胞(DC)的调控作用及其分子机理。方法 分离高纯度小鼠骨髓Lin,C-kit,HPC经粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)干细胞因子(SCF)和肿瘤坏死因子(TNFα)培养,诱导产生DC。采用流式细胞仪,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和同种异基因混合淋巴细胞反应(Allo-MLR)分析TGF-β1对DC产生的调节作用及  相似文献
10.
目的:研究雷公藤多甙和IL-10对人树突状细胞(DC)表面人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)和CD80表达及IL-12p40转发洋和分泌的影响。方法:通过粒细胞-巨噬细胞型集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF-α)体外培养体系,从人外周血单个核细胞中获得DC,细胞表面HLA-DR和CD80表达采用流式细胞仪分析,IL-12p40转录和分泌分别采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术和ELISA法。结果:雷公藤多甙(5-20ug/ml)、IL-10(50-200ng/ml)能下调DC表面HLA-DR和CD80的表达,同时雷公藤多甙、IL-10能抑制DC内IL-2p40mRNA的转录和分泌。结论:雷公藤多甙、IL-10能通过抑制表面分子的表达和细胞因子的合成而干扰DC的成熟和功能。  相似文献
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