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1.
小鼠肝脏特异的微RNA真核表达载体的构建及鉴定   总被引:7,自引:3,他引:4  
目的利用分子克隆技术,构建微RNA(microRNA,miRNA)真核细胞载体.方法人工合成小鼠肝脏特异的微RNA(miR-122)前体基因序列,并添加酶切位点及polyT转录终止序列,经退火处理后形成双链结构,插入小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体pAVU6 27中,经酶切鉴定和测序证实后,构建成为miR-122真核表达载体(pAVU6 27-mir122).结果合成的基因序列完全正确并成功克隆到真核表达载体pAVU6 27上.结论 miR-122真核表达载体的构建,为进行真核细胞转染及miR-122表达的研究奠定了基础.  相似文献
2.
小鼠肝脏特异的微RNA在HeLa细胞中的转染与表达   总被引:4,自引:2,他引:2  
目的观察miR-122在HeLa细胞内表达情况.方法将构建的miR-122真核表达质粒pAVU6 27-mir122以电穿孔法转染HeLa细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆,通过Northern杂交和点杂交验证miR-122在HeLa细胞中的表达.结果阳性转染细胞与小鼠肝脏细胞Northern杂交及斑点杂交均出现放射自显影,而转染空质粒的HeLa细胞则无放射显影.结论 miR-122在HeLa细胞中获得正确表达.  相似文献
3.
目的 探讨miR-181a对白血病K562细胞生长的抑制作用及其机制。方法 利用Oligofectamine脂质体法将化学合成的miR-181a转染K562细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和台盼蓝拒染法检测其对K562生长抑制的作用,结合基因芯片技术检测miR-181a对K562细胞基因表达谱的影响,筛选肿瘤相关差异基因。结果 MTT法和台盼蓝拒染法结果显示,转染后各时间点转染组K562细胞的生长均受到了明显地抑制。瑞氏一吉姆萨染色显示,转染组细胞表现出典型的生长抑制的变化。基因芯片筛出肿瘤相关差异基因30个,其中20个表达下调,10个表达上调。结论 miR-181a可能通过增强抑癌基因的表达,削弱癌基因的表达,从而抑制白血病细胞的增殖和生长。因此。其抗癌效应可应用于肿瘤的治疗。  相似文献
4.
5.
目的 探讨微RNA-21(mir-21)和第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)在乳腺浸润性导管癌中的表达情况及临床意义.方法 采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应(realtime RT-PCR)检测40例乳腺浸润性导管癌及其对应的癌旁正常乳腺组织中mir-21表达,免疫组化Envision法检测相应癌组织中PTEN表达,分析mir-21表达和PTEN表达的相关性及其与临床病理特征的关系.结果 茎环realtime RT-PCR检测mir-21表达的敏感性和特异性良好;mir-21在乳腺癌组织中的表达显著高于正常组织(P<0.001);PTEN在癌组织中的低表达率为45%(18/22).PTEN低表达组mir-21的表达显著高于PTEN高表达组(P=0.013).mir-21的高表达还和较高的TNM分期、淋巴结转移及高增殖指数有关(P值分别为0.021,0.010和0.030).结论 mir-21在乳腺浸润性导管癌中的表达升高,可能和乳腺癌的增殖、侵袭转移有关;在乳腺癌中PTEN可能为其靶基因之一.  相似文献
6.
孔博  刘迎龙  吕小东 《中华医学杂志》2007,87(46):3310-3311
近来研究表明,一类名为小RNA的非编码RNA分子掌握真核细胞许多功能,影响基因表达、细胞周期调控和个体发育等多种行为^[1-4]。小RNA是指21-28nt的调控RNA分子,主要包括①微RNA(miRNA),②小干扰RNA(siRNA),③其他小RNA:包括核糖体开关,反义核酸等非编码RNA。  相似文献
7.
目的 应用基因芯片技术,研究微RNA(miR-18la)对人白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法 针对miR-18la成熟序列设计并合成miR-181a RNA duplexes,采用OligofectamineTM脂质体法转染K562细胞。应用Agilent HumanlA寡核苷酸基因芯片,检测和分析对照组与微RNA转染组间的基因表达谱差异。结果 从20173个候选基因中,筛选出228个差异表达基因。与对照组K562细胞比较,表达上调的基因有59个,主要有代谢相关基因、抑癌基因、信号转导相关基因、免疫防御相关基因等;表达下调的有169个,主要有原癌基因、DNA结合与转录因子、代谢相关基因、信号转导相关基因、细胞周期及发育相关基因等。RT-PCR技术验证了CTCF、ZAP70、SEMA4C和RALA4个基因表达的变化。结论 微RNA转染K562细胞48h后,影响了细胞内一系列基因的表达。这些基因可能与微RNA的功能相关,同时也是转录后水平上抑制基因表达的调控方式实现的基础。这为进一步深入研究微RNA的功能及其具体的作用机制提供了重要的线索和依据。  相似文献
8.
微RNA(miRNA)是存在于真核生物细胞中的一类内源性的、非编码的、长度约为22个核苷酸的小分子RNA。生物体中,miRNA能够在转录后水平调控基因的表达,广泛参与生物发育、细胞分化、细胞凋亡等多种生命进程和心肌肥厚、心室重构、心力衰竭、心律失常等多种病理生理过程。miRNA在心血管方面的生理和病理意义越来越被关注,很有希望为心血管疾病的治疗提供新的手段。  相似文献
9.
长链非编码 RNA(LncRNA)被作为人类基因组中重要的调控分子之一,通过多种方式发挥其生物学调控功能. 研究表明, LncRNA 也可作为一种竞争性的内源性 RNA 与非编码微 RNA (miRNA)交互作用,共同参与靶向基因的调控,对肿瘤发生与发展过程产生重要影响. 同时,miRNA通过大量蛋白质编码基因靶向调控LncRNA的表达,miRNA和LncRNA在调节细胞过程均有重要作用. 该文在分别介绍miRNA与LncRNA功能的基础上,总结 miRNA与 LncRNA 交互作用及调控机制对肿瘤发生与发展过程的影响.  相似文献
10.
微RNA(miRNA)是一类长度为21 ~23个核苷酸的调控性小RNA分子,通过mRNA剪切和抑制蛋白质翻译两种方式,负性调控其靶基因.miRNA可以调控约50%的蛋白编码基因,并且参与了包括细胞分化、细胞凋亡等在内的多种生理过程.近年来发现,miRNA在肿瘤相关方面发挥重要作用.该文从miRNA在骨肉瘤中的发生发展、侵袭转移、与药物的协同作用及在血液循环当中的应用4个方面予以综述,并对miRNA在骨肉瘤方面的前景进行展望.  相似文献
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