小鼠肝癌细胞(H22)源外泌体的体内抗肝癌作用研究

目的在荷瘤动物模型观察小鼠肝癌细胞（H22）来源的外泌体（exosomes）激发宿主抗肝癌免疫应答的效应。方法用自行分离纯化的小鼠肝癌细胞H22源外泌体免疫小鼠，然后给小鼠皮下注射H22肿瘤细胞，观察肿瘤的生长状况。用MTT法检测小鼠脾细胞增殖情况和细胞毒活性；用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞浸润情况。结果该外泌体使肿瘤出现时间延迟，肿瘤生长缓慢，小鼠生存率提高。促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性，促进CD4^＋和CD^8＋T细胞活化。结论小鼠肝癌细胞（H22）源外泌体能诱导抗肿瘤应答，有效地诱导特异性的杀伤肿瘤细胞活性，有针对亲本细胞的免疫保护作用。  

采用高速离心及ExoQuick-TC法提取小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体比较及鉴定

比较及鉴定超高速离心法及ExoQuick-TC法提取小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体.采用BCA蛋白检测可见ExoQuick-TC法提取的外泌体蛋白含量高于超高速离心法提取的蛋白含量.Exosome Antibodies,Array & ELISA Kits检测可见ExoQuick-TC法提取外泌体的纯度优于超高速离心法提取的纯度.两种方法提取的外泌体电镜下形状无差异,随机选取3个电镜视野进行计数可见ExoQuick-TC法提取外泌体数量多于超高速离心法提取外泌体. ExoQuick-TC法提取的外泌体具有更高的产量及纯度.  

肾细胞外泌体的研究进展

外泌体(Exosomes)是一种细胞分泌的,携带大量活性物质,传递细胞间通信的纳米囊泡.肾细胞外泌体参与肾脏再生、修复及肾小管细胞间交流,调控骨细胞生长,在肾病的进展、控制及肾肿瘤中扮演重要角色,有作为肾脏疾病靶向治疗剂的潜力.尿液外泌体含有慢性肾病、糖尿病肾病、肾纤维化及肾肿瘤等潜在的标志物.肾脏作为机体重要器官,其外泌体(包括尿外泌体)的研究方兴未艾,现对其研究进展做一总结.  

外泌体对A549细胞增殖、凋亡及迁移功能的影响

目的 观察肺癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响.方法 采用多步超速离心法从肺癌A549细胞的培养液上清中分离出肺癌细胞来源的外泌体,并通过透射电子显微镜观察外泌体形态,利用Western blot 检测其表面跨膜蛋白的表达.采用 MTT 法、ELISA法分别检测外泌体对A549细胞增殖和凋亡的影响;采用Transwell法了解外泌体对A549细胞迁移能力的影响.结果 观察所提取的外泌体大小均匀,形态规则,多为圆形及椭圆形膜性囊泡盘状结构,直径30~100 nm,其外周包被被膜,表面具有丰富的四次跨膜蛋白CD9、CD63等.MTT法提示外泌体对A549细胞具有促增殖作用,且其影响具有时间和剂量依赖特征(P<0.05),ELISA法检测用外泌体共培育后的A549细胞的凋亡情况,结果显示外泌体在一定程度上抑制肿瘤细胞凋亡(F=365.496,P=0.000).Transwell法观察显示,外泌体具有促进A549细胞迁移运动的作用(F=252.005,P=0.000).结论 肺癌细胞来源的外泌体能促进A549细胞增殖、减少其凋亡、增强其迁移运动的能力.  

鼻咽癌外泌体miR-20a通过靶向BCL2L11基因抑制肿瘤相关巨噬细胞凋亡

目的 探索鼻咽癌外泌体microRNA是否通过靶向凋亡基因而抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAM)凋亡.方法 通过生物信息学方法确定目标microRNA及其靶基因,检测鼻咽癌患者血清及鼻咽癌细胞培养基中的外泌体内miR-20a的表达量.应用miR-20a的拟似物及抑制物转染巨噬细胞;并检测干预后的凋亡指数及凋亡通路相关蛋白.结果 miR-20a在鼻咽癌外泌体中表达显著上调.miR-20a的靶基因为BCL2 L11,过表达miR-20a可以抑制巨噬细胞凋亡,且凋亡通路相关蛋白Bim、caspase-9和caspase-3均显著减少(P＜0.05).结论 miR-20a通过抑制Bim-caspase-9-caspase-3凋亡途径的活化从而抑制鼻咽癌中TAM凋亡.  

外泌体在肿瘤转移调控中的研究进展

恶性肿瘤是当今时代威胁人类健康的头号杀手。肿瘤转移是恶性肿瘤的主要特征，是癌症治疗失败和癌症患者死亡的首要原因，其分子机制复杂，涉及多步骤、多阶段、多基因的变化。外泌体是由活细胞分泌的纳米级囊泡小体，其内含有丰富的蛋白质、miRNA、lncRNA等成分，可在细胞间转运从而调节细胞的生物学功能。研究显示外泌体与肿瘤的转移密切相关，可通过促进肿瘤血管生成，影响肿瘤转移前微环境形成，调节机体免疫功能等方式调控肿瘤转移。本文将从外泌体主要成分入手对外泌体在肿瘤转移调控中的最新研究进展进行综述。  

基于PEG6000富集精液来源外泌体的提取及鉴定

目的 介绍PEG6000富集精液来源外泌体的提取和鉴定方法,为精液外泌体相关研究奠定基础.方法 选自南方医科大学南方医院检验中心6名正常志愿者精液,经8％ PEG6000富集并多步离心结合超速离心方法获取提取物,然后采用透射电子显微镜观察其形态,纳米颗粒跟踪分析仪分析其大小,蛋白印迹法检测其蛋白组成成分.结果 提取物呈类圆形、椭圆形囊泡,质膜完整,大小约为30～150 nm,内部含有低电子密度物质,均阳性表达CD63、ALIX、TSG101蛋白,且不含精子细胞内质网Calnexin蛋白.结论 经过对提取物的形态、大小以及其蛋白成分分析证实所提取到的物质为精液来源的外泌体,为后续开展精液外泌体临床及基础研究提供了方法学基础.  

小鼠胰岛微血管内皮细胞外泌体的提取和鉴定方法

目的：建立小鼠胰岛微血管内皮细胞来源的外泌体的提取和鉴定方法，为糖尿病胰岛微血管内皮受损的发病机制研究及重建胰岛微循环完整性的应用提供必要材料。方法选取小鼠胰岛微血管内皮细胞株（MS-1）细胞作为研究对象，取其培养上清液，经多步离心结合蔗糖／D2O垫超速离心方法获取提取物，然后采用透射电镜和Western blotting 法对提取物进行形态和蛋白成分分析，以确定其是否为外泌体。结果提取物呈形态均一的类圆形囊泡，有完整双层膜包绕，内部含有低电子密度物质。囊泡大小约为40～100 nm，可散在分布，也可聚集成团，提取物均阳性表达CD63、CD9和TSG101分子。结论经过形态和蛋白成分分析证实所提取到的物质正是MS-1细胞来源的外泌体，便于后续临床和基础研究工作的开展。  

肿瘤缺氧微环境中外泌体的研究进展

缺氧可以导致肿瘤的适应性更强、恶性程度更高以及耐药性，外泌体在其中发挥了重要作用。外泌体是从胞内体脱落下来的小囊泡，主要作用是运送细胞之间的生物活性分子。缺氧会导致外泌体分泌显著增加，而外泌体中的核酸和蛋白质通过信号转导在肿瘤微环境中发挥一系列作用，包括肿瘤异质化、改变免疫应答、诱导肿瘤相关成纤维细胞、促进血管生成和转移等。此外，研究发现外泌体的内容物类似于来源的细胞，意味着如果把它们视为适宜的缺氧状态标志物就能够通过微创过程进行肿瘤的诊断和预后。因此，研究缺氧微环境中的外泌体可能会开拓癌症治疗的新思路。  

外泌体及其在干细胞中的研究进展

外泌体是在细胞间交流中起重要作用的小分泌囊泡,可由多种类型的细胞分泌,在细胞间起着质膜交换及转运蛋白质、mRNA、microRNA和细胞器等生命活性物质的作用.外泌体可通过改变基因调控网络或表观遗传重组来调控正常的生理过程.最近的研究发现,干细胞分泌的外泌体可以有效转运mRNA、microRNA和蛋白质,在调控组织再生方面发挥重要作用.该文对外泌体的生成及其在干细胞中的研究进展进行综述.