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1.
外源性人野生型p53基因转染导致兔动脉硬化斑块的不稳定性   总被引:28,自引:3,他引:25  
目的 建立动脉粥样硬化不稳定性斑块的动物模型。方法  6 4只雄性纯种新西兰大白兔随机分成A组 (5 4只 )与B组 (1 0只 ) ,A组用球囊损伤腹主动脉 高脂喂养 1 0周 ,B组仅给予高脂喂养 1 0周。于 8周末将A组随机分为A1和A2两个亚组 ,在腹主动脉斑块形成处分别转染携带人野生型 p5 3基因或LacZ基因的重组腺病毒载体 ,2周后A1 (p5 3基因 )和A2 (LacZ基因 )组各处死1 0只 ,观察斑块自发破裂情况。分别给予余下的兔中国斑点蝰蛇毒 (CRVV)和组胺药物触发斑块破裂 ,然后将兔处死取出腹主动脉进行病理学及免疫组化检查。实验开始及处死前进行血脂检查。结果 A1组转染 p5 3阳性细胞数比其他两组明显增加 (分别为 32 4 %± 1 0 2 %,1 5 8%± 3 6 %,1 6 2 %± 6 7%,P均 <0 0 0 1 ) ,细胞凋亡率明显高于其他两组 (分别为 2 5 %± 0 8%,1 0 %±0 3%,0 9%± 0 4 %,P均 <0 0 1 ) ,斑块纤维帽显著变薄 (P <0 0 5 ) ,血管平滑肌细胞减少 ,巨噬细胞聚集 ,药物触发后有 1 2只共 2 0处发生斑块破裂及血栓形成 ,A2组中 ,药物触发后仅 5只 7处发生斑块破裂。B组未见斑块破裂及血栓形成。结论 应用外源性人野生型p5 3基因转染动脉硬化兔可导致斑块的不稳定性 ,药物触发后出现斑块破裂及血栓形  相似文献
2.
纳米粒子介导特异基因转染的实验研究   总被引:23,自引:2,他引:21  
目的:观察纳米粒子携带特异性基因转染的可行性及其效率,方法:应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载特异性反义单核细胞趋化蛋白-1基因,制备纳米级粒子混合物。检测其包埋率,体外释放情况及粒度。以阳离子脂质体为对照,利用培养的平滑肌细胞,应用聚合酶链反应(PCR)观察其为真核细胞传递基因的可能性。采用移植静脉内膜增生动物模型,应用RNA斑点杂交和病理形态学分析。观察其在体内的基因转染、表达及生物学效应。结果:制备的纳米粒子-DNA粒度为150-300nm,包埋率为:0.9%,体外释放时间为2周左右。PCR结果提示:纳米粒子可将目的基因转移至平滑肌细胞中,体内实验显示:纳米粒子可实现体内局部基因转染,表达,发挥相应的效应。结论:纳米粒子可用于特异性基因的转染。  相似文献
3.
Yi CG  Guo SZ  Zhang LX  Liu Z  Han Y  Xia W  Shu MG  Ai WB  Wu JH 《Zhonghua yi xue za zhi》2005,85(7):473-478
目的探讨VEGF165基因转染血管内皮祖细胞(EPCs)移植促进缺血皮瓣的血管新生,提高皮瓣存活率。方法体外分离、培养人脐血中EPCs,利用脂质体介导血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因体外转染EPCs,然后移植于裸鼠随意皮瓣,皮瓣早期断蒂。结果脐血中分离培养的EPCs表达CD34、KDR及CD133,VEGF165基因转染EPCs体外及体内检测均有VEGF165蛋白的表达。转染VEGF165基因的EPCs组和EPCs组移植裸鼠皮瓣后,EPCs整合到缺血部位新生血管中,与对照组的皮瓣存活率分别为97 2% ±2 8%、60 3% ±2 1%、34 2% ±1 8% (P<0 05 ),而且前二组毛细血管密度、血流灌注差异均有统计学意义(P<0 05),较对照组均有明显改善(P<0 05)。术后第7d时三组皮瓣中的EPCs密度分别为136个/mm2 ±10个/mm2、75个/mm2 ±6个/mm2、0个/mm2 (P<0 05 ); 第11天时EPCs密度分别为305个/mm2 ±26个/mm2、199个/mm2 ±18个/mm2、0个/mm2 (P<0 05)。结论脐血中的EPCs体外培养后移植体内可促进缺血皮瓣的血管新生,提高存活率,而转染VEGF165基因的EPCs具有更强大的促血管新生的作用。  相似文献
4.
目的 构建人骨形态发生蛋白(human bone morphogenetic protein7,hBMP-7)逆转录病毒载体并检测经逆转录病毒介导基因转染的兔骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cell,MSCs)mRNA的表达。方法 构建hBMP-7逆转录病毒载体后利用脂质介导的基因转移技术转染包装细胞PT67,制备含目的基因的重组逆转录病毒液并感染兔骨髓间充质干细胞,采用原位杂交、RT-PCR检测hBMP-7mRNA在MSCs中的表达。结果 成功构建了hBMP-7逆转录病毒载体,经hBMP-7基因转染的MSCs可表达外源性BMP-7mRNA。结论 采用逆转录病毒介导的方法可以将hBPM-7转染至MSCs中并表达外源性基因。  相似文献
5.
VEGF165表达载体的构建及其对人胃癌生长的作用   总被引:12,自引:6,他引:6  
目的构建血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF165)真核表达载体,研究其对胃癌生成的作用. 方法用DNA重组方法,将编码VEGF165的全长cDNA克隆于pcDNA3载体中,构建VEGF165 mRNA真核表达载体;用阳性脂质体介导的基因转染技术,将重组体转入人胃癌细胞(SGC-7901)省系;观察转染细胞的细胞周期、增殖能力及致瘤生长情况等生物学指标. 结果斑点杂交、间接免疫荧光等分析显示,正义VEGF基因转染技术可使VEGF的表达得到明显地加强. 与未转染细胞相比,转染细胞的G2/M期细胞增加(0.44)而S期细胞减少(0.17),克隆形成率(9.0%)明显高于未转染细胞(4.0%). 瘤细胞接种裸鼠后33 d,过表达VEGF人胃癌细胞所致的移植瘤体积(2351±638) mm3明显大于未转染细胞所致的移植瘤体积(1534±363) mm3. 结论 VEGF可以通过加强肿瘤组织血管生成而促进肿瘤的生长,另外,VEGF的表达可能与细胞增殖能力有关.  相似文献
6.
重建端粒酶活性延长ptsA58H质粒转染的人胚肌腱细胞寿命   总被引:12,自引:0,他引:12  
Xie HQ  Qu Y  Li XQ  Qin TW  Yang ZM 《中国医学科学院学报》2002,24(3):276-280,I002
目的 探讨以重建细胞端粒酶活性,达到延长经ptsA58H质粒转化的人胚肌腱细胞系(THETC)可行性。方法 构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)cDNA的质粒pGRN145,体外转染THEC;通过形态学观察、平板克隆形成率检测、软琼脂培养、不同培养条件下细胞生长曲线的测定,免疫组化法染色分析胶原分泌类型,hTERT mRNA表达及端粒重复序列扩增-PCR法检测细胞端粒酶活性等,对转染前后的细胞生物学特性进行比较。结果 经pGRN145质粒体外转染的THETC(telT)有端粒酶活性表达,并继续保持旺盛的增殖能力,寿命延长。telT保持原有的温度依赖性及血清营养依赖性生长的特点,并正常分泌Ⅰ型胶原,无恶性转化趋向。结论 重建端粒酶活性进行延长THETC寿命,为建立组织工程标准细胞系提供了新的实验手段。  相似文献
7.
Background Routine treatment of cancer such as surgery, radiation or chemotherapy is sometimes unable to erdiacate metastatic malignant cells. So we tried a new method and increased the adoptive immunotherapy of Cytokine-induced killer (CIK) cells in tumor patients and the multidrug resistance (mdrl) cDNA was transfected into CIK cells. Methods CIK cells were obtained from peripheral blood and induced by IFN-γ, anti-CD3 monoclonal antibody, IL-2 and IL-1. CIK cells were transfected with plasmid PHaMDR containing human mdrl cDNA by electroporation. RT-PCR was used to detect mdrl mRNA in transfected CIK cells. P-glycoprotein (P-gp) expressed on surface of CIK cells was assayed by FITC-conjugated anti-P-gp monoclonal antibody and flow cytometry. Multidrug resistance to doxorubicin and colchicine and cytotoxic activity to human breast cancer cell line MCF7 were performed using MTT method. Results mdrl mRNA was detected in transfected CIK cells. P-gp was expressed on the surface of the transfected CIK cells, and the P-gp positive cells reached 21%-37% of the total CIK cells after transfection. The IC50 to doxorubicin increased to 22.3-45.8 times, and that to colchicines to 6.7-11.35 times, as compared to those of untransfected CIK cells. However, the cytotoxic activity to MCF7 cell line remained unaltered. Conclusions CIK cells were successfully transfected with mdrl cDNA by using electroporation. The transfected CIK cells had the characteristics of multidrug resistance without change in their cytotoxic activity to tumor cells.  相似文献
8.
重组质粒电穿孔转染条件探讨   总被引:11,自引:0,他引:11  
目的:为优化电穿孔转染质粒的条件,提高转染率。方法:以不同条件用电穿孔方法将重组质粒PLXSN-S转入p815、pA317、HepG2、EL4等真核细胞,探讨电压,电容及电转缓冲液温度对转染率的影响。结果(1)低电压(200~300V),高电容(900~1000uF)能高效转染实验所用真核细胞;(2)冰浴可提高转染率;(3)电击时间以15~30ms较合适。结论:电穿孔是一种高效的基因转染方法,通过优化其条件,可以提高转染率。  相似文献
9.
生长抑素受体2基因转染抑制胰腺肿瘤细胞生长机制的探讨   总被引:11,自引:0,他引:11  
目的探讨生长抑素受体2(SSTR2)基因转染抑制体内胰腺肿瘤生长的效果及其机制.方法利用lipofectAMINE将人类SSTR2全长 cDNA转染导入胰腺癌细胞株PC-3中,G418筛选出阳性克隆;免疫组织化学SABC法和RT-PCR检测生长抑素受体2的稳定表达.分别将表达生长抑素受体2的PC-3细胞 (实验组) 和空载体对照组及阴性对照组的PC-3细胞异种移植到无胸腺小鼠体内.TUNEL法测定这些细胞形成的胰腺肿瘤细胞凋亡指数(AI);免疫组织化学SP法测定凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,以及肿瘤微血管密度(MVD).另外,比较3组裸鼠之间胰腺肿瘤的大小和重量.结果实验组胰腺肿瘤细胞AI(3.39%±0.84%)显著高于空载体对照组(0.69%±0.08%)和阴性对照组(0.68%±0.09%)(P<0.05).与空载体对照组和阴性对照组相比,实验组Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白的表达则显著升高(P<0.05);实验组MVD(6.3±1.7)显著低于空载体对照组(12.6±1.7)和阴性对照组(13.5±1.9)(P<0.05).另外,实验组胰腺肿瘤的大小和重量也显著低于空载体对照组和阴性对照组(P<0.05).空载体对照组与阴性对照组之间未观测到任何有差异的指标(P>0.05).结论大多数人胰腺癌细胞中缺失SSTR2基因,生长抑素受体2在胰腺癌细胞中的再表达能诱导肿瘤凋亡,抑制肿瘤新生血管形成,最终明显抑制胰腺肿瘤的生长,而凋亡可能通过Bcl-2蛋白的下调及Bax蛋白的上调来调节.  相似文献
10.
抑癌基因p27对肾癌细胞系GRC-1生长的抑制作用   总被引:10,自引:6,他引:4  
目的:探讨p27基因对肾癌GRC-1细胞系生长的抑制作用,为肾癌发生机制的研究和基因治疗提供理论依据。方法 采用基因转染技术,将p27 cDNA转染到肾癌GRC-1细胞系中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响。结果 转染p27基因的肾癌细胞生长受到抑制,其在软琼脂上克隆形成能力降低了大约4倍。对细胞周期分析表明,处在G0-G1期的细胞由32.2%增加到66.9%,经Dot blot和Western blot杂交证实,p27 mRNA表达有明显差异(P<0.01),p27的蛋白表达量有明显差异(P<0.01),说明p27蛋白具有生长抑制功能,其作用点为G1-S。结论 提高肾癌细胞中p27的表达,能抑制肿瘤细胞的生长,导入p27基因是一种治疗肾癌的新途径。  相似文献
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