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1.
胎鼠肺细胞的分离纯化及原代培养   总被引:35,自引:0,他引:35  
目的 建立一套可靠的胎鼠肺细胞分离、纯化和培养技术,用于体外研究肺发育和早产儿肺部疾病。方法 采用胰酶和胶原酶消化19d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)和肺成纤维细胞(LF),并进行原代培养。用细胞角蛋白(cytokeratin)和波形蛋白(vimentin)免疫细胞化学染色和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定。结果 该方法所得细胞产量大、纯度高。免疫细胞化学鉴定,AECⅡ细胞cytoker—atin染色阳性,vimentin染色阴性,LF则相反。透射电镜观察AECⅡ,可见细胞内板层小体。结论 该方法是一种可靠的胎鼠肺细胞的分离纯化培养技术,可用于体外研究肺发育与早产儿肺部疾病。  相似文献
2.
人动脉平滑肌细胞贴块培养法   总被引:31,自引:2,他引:29  
应用贴块法成功地进行了人动脉平滑肌细胞原代培养。培养出的人SMC呈典型的“谷”与峰“峰”样生长,电镜下见细胞浆内含有丝结构,马氏染色呈红色,经历10个月传代培养至35代,该细胞生长未见异常改变,文内还讨论了人主动脉SMC体外培养应注意的问题。  相似文献
3.
模拟缺血-再灌注诱导原代培养乳鼠窦房结细胞凋亡的研究   总被引:18,自引:2,他引:16  
目的 模拟缺血-再灌注诱导培养窦房结细胞凋亡,为窦房结病变的病因研究与临床防治提供理论依据。方法 取Wistar乳鼠的窦房结组织进行原代细胞培养,随机分为3组:正常对照组;模拟单纯缺血组;模拟缺血-再灌注组。应用TUNEL法对凋亡细胞进行定性检测,并用流式细胞技术对凋亡细胞进行定量检测。结果 ①单纯缺血4、8、16h以及缺血1、4、8、16h后再灌注3h各组均可见TUNEL阳性窦房结细胞。②从单纯缺血4 h起,随缺血时间延长,窦房结细胞凋亡率显著增加;而缺血-再灌注组也较相同时间单纯缺血时窦房结细胞凋亡率显著增加。结论 单纯缺血及缺血-再灌注均可诱导乳鼠窦房结细胞凋亡,且随缺血时间延长,细胞凋亡率逐渐增加。  相似文献
4.
氧化苦参碱对四氯化碳损伤大鼠肝细胞的保护作用   总被引:13,自引:0,他引:13  
目的 :研究氧化苦参碱对肝细胞的保护作用。方法 :采用原代肝细胞培养的方法 ,选用CCl430mmol/L制备肝损伤模型 ,同时加以不同浓度的氧化苦参碱以保护肝细胞 ,培养 12h后以MTT法测细胞存活率 ,并测定培养基中AST、ALT、LDH。结果 :氧化苦参碱对肝细胞的保护呈剂量依赖性 ,氧化苦参碱组细胞存活率明显高于CCl4损伤组 (98.3% /3.2 % ,P <0 .0 5 ) ;其AST、ALT、LDH较CCl4损伤组明显降低 (依次为 6 .13± 0 .4 4 /896 .87±13.2 3、2 1.5± 0 .76 /15 0 2 .13± 35 .80、19.5± 0 .6 8/2 87.38± 5 .79,均P <0 .0 5 )。结论 :氧化苦参碱对CCl4损伤的肝细胞具较好的保护作用 ,存在最佳剂量性关系。  相似文献
5.
用嗜热菌蛋白酶进行人肠上皮细胞分离培养   总被引:12,自引:0,他引:12  
目的探讨人肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IEC)的分离、培养及鉴定方法,为进一步研究IEC提供合适的细胞模型.方法取4~6个月合法引产胎儿小肠,用嗜热菌蛋白酶消化分离IEC,接种于含多种促IEC生长的营养成分的DMEM培养液内,根据IEC和成纤维细胞贴壁时间的差异来纯化IEC,通过观察IEC生长状态、形态特征、超微结构及检测上皮细胞膜抗原对IEC进行鉴定.结果嗜热菌蛋白酶消化2 h可分离出大量的健全绒毛隐窝单位,进一步培养获得的IEC,上皮细胞膜抗原均呈阳性.结论选用嗜热菌蛋白酶作为分离IEC的消化酶,可获得较纯的IEC,完全可供相关实验研究之用.  相似文献
6.
大鼠肝Kupffer细胞分离培养及鉴定   总被引:12,自引:0,他引:12  
目的 :参照 Smedsrod等方法加以适当的修正 ,建立简便、有效和稳定的大鼠肝 Kupffer细胞分离、纯化和培养方法。 方法 :1联合酶原位循环灌注消化 ;2 Nycodenz不连续密度梯度离心 ;3选择性贴壁纯化 ;经大鼠单核 -巨噬细胞单克隆抗体 ED1( MΦ-Mc Ab ED1)鉴定。 结果 :最终获得大鼠肝 Kupffer细胞产量 ( 2 8.68± 4)× 10 6/鼠肝 ,细胞纯度 96% ,细胞活性大于 95 %。 结论 :本文建立的大鼠肝 Kupffer细胞分离方法 ,操作简便易行、效果稳定 ,同时获得的细胞保持良好的生物学性状  相似文献
7.
新生大鼠心肌细胞分离与原代培养   总被引:11,自引:0,他引:11  
目的 应用酶消化法消化心肌组织、培养心肌细胞.方法 0.1%的胰蛋白酶重复消化乳鼠心肌组织多次,收集的细胞用含15%胎牛血清的MEM培养基混悬后过滤,纯化心肌细胞后置CO2培养箱孵育.结果 培养的心肌细胞4~6 h后开始贴壁生长,12~24 h明显增殖,3~4 d后细胞汇合成片.在倒置显微镜下心肌细胞呈圆形、梭形、多角形,伸出伪足,出现自发性节律性搏动.结论 应用酶消化法可简便、快速地获得大量活力高的心肌细胞.  相似文献
8.
鼠胚脑皮质及海马神经元原代培养方法的改进   总被引:10,自引:2,他引:8       下载免费PDF全文
神经细胞原代培养是研究神经细胞的重要手段之一[1,2].传统方法是将神经细胞与神经胶质细胞混合培养,因此无法满足在单一神经细胞培养基础上进行研究的需要。1998年10月至1999年9月,我们对传统混合培养方法在取材、消化、温度、机械操作等方面进行控制和改进,得到了比较满意的相对单一的神经细胞培养物和单神经细胞网络,为进一步开展神经生物学研究提供了相对稳定的体外模型。  相似文献
9.
中药“健脑液”对培养神经细胞迟发性损伤的保护作用   总被引:10,自引:0,他引:10  
以新生大鼠皮质神经细胞原代培养为实验对象,造成迟发性神经元损伤(DND)模型。在不同时程内,测试培养液中的细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷磷酸脱氢酶(NADPH-d)染色反应,观察培养细胞中一氧化氮合酶(NOS)的表达水平。结果表明,缺血组在缺血与再灌流中,LDH漏出量明显高于对照组,并随时间延长,差异越来越明显(P<0.05~0.01)。NOS阳性神经元数量在缺血时明显高于对照组(P<0.01),再灌流后早期NOS表达仍然强烈,与对照组相比有显著差异(P<0.01)。从本实验细胞模型上,可以看到DND形成的机理与兴奋性氨基酸受体过度刺激造成第二信使效应过盛和自由基损伤两种因素关系密切。本实验应用以川芎、首乌、党参、葛根为主要成分的中药"健脑液",在DND形成过程中,对细胞起到一定的保护作用。  相似文献
10.
目的:探讨子宫内膜异位症(endometriosis,EM)异位子宫内膜细胞原代培养方法,并比较EM在位及异位子宫内膜细胞与正常对照在位子宫内膜细胞形态的差异。方法:采用改良EM细胞原代培养方法,免疫细胞化学法鉴定细胞类型,在光学显微镜及电子显微镜下观察细胞形态差异。结果:正常对照子宫内膜细胞及EM在位、异位子宫内膜细胞分离培养成功率分别为91.67%、93.75%和75.00%。EM异位、在位子宫内膜腺上皮细胞与正常在位子宫内膜腺上皮细胞大小相似,但EM异位子宫内膜腺上皮细胞染色质增多,核增大。EM异位子宫内膜间质细胞较EM在位及正常在位子宫内膜间质细胞小,且细胞膜表面有较多的微绒毛和胞浆突起。结论:注意取材方式,采用改良原代培养方法,可以提高EM异位子宫内膜细胞培养成功率。EM异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞超微结构与正常妇女及EM在位子宫内膜细胞有显著不同。  相似文献
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