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1.
赤魟亲环素A的融合表达、纯化及活性特征   总被引:6,自引:2,他引:4  
目的探讨赤鱼亲环素A基因(dsCypA)的生物学功能.方法构建硫氧还蛋白基因融合表达体系PETTRx-dsCypA,低温诱导表达的融合蛋白dsCypA-TRX,利用金属螯合亲和层析纯化后,经蛋白酶切割和进一步纯化,得到高纯度成熟重组dsCypA,测定其酶活性.结果重组dsCypA具有与人CypA相近的肽基脯氨酸顺反异构酶活性,这在鱼类CypA中是首次报道.结论 dsCypA的功能克隆可能部分地解释赤魟工尾刺中药应用的分子生物学机制,也为从比较生物学的角度,深入开展CypA基因的结构与功能关系研究奠定了基础.  相似文献
2.
建立了测定全血中环孢素 A( Cs A) 浓度的受体结合法,并与荧光偏振免疫法( F P I A) 进行比较。用环孢素 A 的重组受体亲环素 A 作为结合蛋白,3 H Cs A 作示踪剂,活性炭吸附分离结合的与游离的两相,测定结合相的放射性。测定了30 例肾移植患者 Cs A 血药浓度并与 F P I A 的结果进行比较。受体结合法的有效测定范围为501600 ngml ,变异系数批内为8 .2 % ( n = 8) ,批间为10 .6 % ( n = 6) ,测定结果与 F P I A 法相关( r= 0 .96 ; P<0 .001) 。测定 Cs A 的受体结合法灵敏、特异、重复性和稳定性好,测定结果与 F P I A 法相关,适用于临床血药浓度的测定。  相似文献
3.
系统性红斑狼疮患者血清抗亲环素A抗体检测的临床意义   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:观察血清抗亲环素(CyP)A抗体对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断价值与临床意义。方法:用ELISA方法检测54例SLE、36例其他自身免疫病患者及40例健康对照者血清IgG、3种抗CyP A抗体并结合活动性评分、系统损害进行分析。结果:54例SLE患者中23例检出IgG型抗CyP A抗体,15例IgM型、3例IgA型抗CyP A抗体。IgG型抗CyP A抗体的灵敏度为42.6%,特异性为55.6%,IgM型CyP抗体的灵敏度为27.8%,特异性为36,1%。SLE三重度活动组两型抗CyP A抗体检出率高于稳定期及轻、中度活动组。IgG型及IgM型抗体与血中低补体及免疫球蛋白升高有关,IgG型抗CyP A抗体与SLE关节肌肉症状及白细胞减少有关。结论:IgG型抗CyP A抗体检出的临床价值优于IgM型抗体。CyP A抗体非SLE三特异性抗体,但可作为判断SLE病情活动性的参考指标之一。  相似文献
4.
亲环素A抑制剂研究进展   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
亲环素A是亲环素家族重要成员,是重要的免疫抑制药物环孢素A的体内结合蛋白,除了具有肽脯氨酰顺反异构酶活性,亲环素A在一系列生物途径中发挥作用,如蛋白折叠、装配、转运、神经生长调节和HIV病毒复制。总结了天然产物抑制剂、肽类抑制剂和有机合成分子等亲环素A抑制剂的发现和发展历程,对亲环素A抑制剂的研究进展进行了综述。  相似文献
5.
亲环素A抗原表位氨基酸序列及三维结构研究   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的:研究人抗亲环素A(CyPA)McAb D4识别的抗原表位的氨基酸组成及其在蛋白分子上的三维定位。方法:以抗人亲环素A McAb D4作捕获抗体,对噬菌体展示肽库进行淘筛,并对筛选出的噬菌体中插入片段进行DNA序列测定和氨基到序列分析,再用RasMol蛋白质三维结构分析软件在亲环素A分子的三维结构中查找相应的抗原表位。结果:经过三轮淘筛和扩增,选择7个克隆进行序列,提示该抗原表位是构象性的。用RasMol蛋白质三维结构分析软件在亲环素A分子的三维结构中,找到由W121、S99、L98、Q111、S110、F112、L122构成的疏水代状结构,可能就是McAb D4的抗原表位。结论:人亲环素A分子上W121、S99、L98、Q111、S110、F112、L122构成一个构象型抗原表位。  相似文献
6.
亲环素A蛋白表达水平与人脑胶质瘤分级相关性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:探讨亲环素A(CypA)蛋白表达水平与人脑胶质瘤分级之间的关系.方法:采用免疫组化ABC法观察不同病理级别人脑胶质细胞瘤标本45例和正常脑组织10例中CypA蛋白表达情况,比较各级之间表达率的差异.结果:正常脑组织CypA蛋白表达率为0,45例脑胶质瘤组织CypA蛋白总阳性表达率为60.0%,较正常脑组织有显著差异;各级脑胶质瘤CypA蛋白表达阳性率分别为Ⅰ级16.7%,Ⅱ级40.0%,Ⅲ级69.2%,Ⅳ级81.3%,低级别(Ⅰ~Ⅱ级)组为31.3%.高级别(Ⅲ~Ⅳ级)组为75.9%,两组之间CypA蛋白表达有显著差异(P<0.01).结论:CypA蛋白的表达水平与人脑胶质瘤病理分级相关.  相似文献
7.
目的:建立用于临床的环孢素A的放射受体测定法,并与荧光偏振免疫测定法进行比较。方法:利用亲环素A(CyPA)能在体外与环孢素A(CsA)高效结合的特性,以重组人亲环素A(rhCyPA)作为特异性的结合蛋白,3H-CsA作为示踪剂,建立CsA的放射受体测定法。结果:方法的有效测定范围为43.8~2800μg/L,灵敏度为43.8μg/L,批内变异系数为8.2%(n=8),批间变异系数为10.6%(n=8),标本提取与测定方法的全程回收率分别为104.2%和106.3%;对CsA及其几种类似物与rhCyPA的亲和力进行比较,以CsA与rhCyPA的亲和力为最佳;在实际应用中与荧光偏振免疫测定法进行比较(n=30),二者测值高度相关,r为0.9642,回归方程为y=39.112+0.99x。结论:该方法具有灵敏可靠,特异性、重复性、稳定性和经济性好等优点,适用于CsA全血浓度的临床测定。  相似文献
8.
目的 :用基因重组技术表达人亲环素 A( Cy PA) ,以避免从人组织材料中提取纯化该蛋白的麻烦。  方法 :应用反转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术从人淋巴细胞系 ( MT4 )总 RNA中扩增得到 Cy PA基因片段 ,并用重组 DNA技术对该基因片段进行克隆 ,构建表达载体 ,转入大肠杆菌进行表达。  结果 :DNA序列分析表明 ,得到的基因片段与设计编码 Cy PA的结构基因序列完全相同。所构建的表达载体 p ET11/Cy PA转入大肠杆菌获得表达 ,重组蛋白表达量占菌体可溶性蛋白的 4 1% ,经测定具有肽基脯氨酸顺 /反异构酶活性。  结论 :利用基因重组技术使大肠杆菌高效表达出有生物活性的人 Cy PA。  相似文献
9.
亲环素A(CyPA)是免疫抑制药物环孢素A的受体,是胞质内一种具有肽基-脯氨酸顺/反异构酶活性的蛋白质。CyPA在HIV-1的生命周期中能掺入病毒颗粒,其掺入为HIV-1的感染性所必需。本文简要综述CyPA在HIV-1复制中的作用,以及这方面的研究对抗HIV-1治疗的意义。  相似文献
10.
亲环素A是一种在生物体内普遍存在的蛋白质,具有肽脯氨酰顺反异构酶活性,并作为一种分子伴侣,参与体内多种蛋白的成熟、折叠、活化、稳定及定位。亲环素A具有很多生物学功能,包括免疫调节、细胞生长、肿瘤发生和血管疾病。其中,它在心血管疾病中的作用涉及环孢霉素A和MAPK家族。本文就亲环素A在心血管系统中的作用作一综述。  相似文献
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