液相色谱-电喷雾串联质谱分析人全血中环孢素的基质效应评估及其机理探究

目的： 评估液相色谱-电喷雾串联质谱（LC-ESI-MS/MS）分析人全血中环孢素的基质效应，并探究其发生机理。方法： 全血裂解物的蛋白沉淀上清液用作全血基质。分别用乙腈水溶液和全血基质配制等浓度环孢素A（CyA）、环孢素C（CyC）的质控样品。分别在添加H⁺、NH₄⁺和Na⁺的流动相中，用LC-ESI-MS/MS的MRM模式检测质控样品中CyA，CyC的[M+H]⁺、[M+NH₄]⁺和[M+Na]⁺（M=CyA，CyC）峰面积，以其计算基质效应因子；用MS Scan模式检查质控样品中CyA、CyC色谱流出峰的质谱离子组成情况，用于判断基质效应原因。结果： 在添加H⁺、NH₄⁺和Na⁺的流动相中，全血基质中CyA、CyC基质效应因子分别为-76.6%~-54.0%、-86.0%~-55.3%和-42.8%~-34.1%。在加H⁺、加NH₄⁺流动相中，标准液加全血基质的CyA、CyC色谱峰的质谱中出现丰度很高的[M+Na]⁺和[M+K]⁺，在加Na⁺流动相中它们出现丰度很高的[M+K]⁺，而对应的定量离子[M+H]⁺、[M+NH₄]⁺或[M+Na]⁺的丰度显著降低。结论： 全血基质对环孢素的LC-ESI-MS/MS分析产生明显的基质效应，其原因与基质中Na⁺、K⁺同添加在流动相中用于辅助电离的H⁺、NH₄⁺或Na⁺竞争与环孢素加合，导致定量目标加合离子丰度显著降低有关。     

LC-MS/MS同时测定人血浆中14种胆汁酸及其在环孢素肝毒性研究中的应用

目的建立UPLC-MS/MS同时定量检测人血浆中14种胆汁酸的浓度,探索环孢素肝毒性与胆汁酸的关系。方法采用蛋白沉淀法处理血浆样本,使用ACQUITY UPLC? HSS T3(2. 1 mm×150 mm,1. 8μm)色谱柱,流动相为水(4mmol·L^-1乙酸铵)-95%乙腈,梯度洗脱,流速0. 3 mL·min-1,检测时间15 min。检测系统采用电喷雾离子源,负离子模式。结果 14种胆汁酸的线性范围良好,批内和批间RSD均<15%,准确度均在87%~116%之间,提取回收率在101%~120%之间。以胆酸(CA)为主的胆汁酸与环孢素的浓度相关性良好,提示环孢素改变患者的肝毒性可能与胆汁酸相关。结论该方法方便准确、灵敏度高,能够满足人血浆中多种胆汁酸的含量测定,可以用于环孢素引起肝毒性的进一步基础研究。     

小剂量环孢素A与小剂量雄激素在慢性再生障碍性贫血治疗中的临床效果

目的:探讨对慢性再生障碍性贫血采用小剂量环孢素A与小剂量雄激素进行联合治疗的临床疗效.方法:选取我院收治的70例慢性再障患者,随机分为对照组和观察组,两组患者均给予环孢素A与雄激素治疗,对照组为标准剂量,观察组为小剂量,治疗2个月后比较疗效.结果:治疗后,两组患者外周血中的白细胞、血红蛋白、血小板等指标均有明显改善(P＜0.05),两组比较差异无显著性(P＞0.05);两组患者的药物副作用发生情况相比,观察组低于对照组(P＜0.05);两组的治疗有效率无显著差异(P＞0.05).结论:针对慢性再障采用小剂量环孢素A与小剂量雄激素进行治疗,临床疗效显著,药物副作用的发生率明显较低,具有推广价值.     

HPLC法同时测定环孢素注射液的含量和有关物质

目的:建立同时测定环孢素注射液含量和有关物质的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Merck Hibar?C18,流动相为四氢呋喃-0.05 mol/L磷酸溶液(45∶55,V/V),流速为1.0 ml/min,检测波长为220 nm,柱温为75℃,进样量为10μl。结果:环孢素C、环孢素B、环孢素、环孢素G、环孢素H、异环孢素H、异环孢素A质量浓度分别在1.95~195.00、2.03~203.00、0.25~9.90、1.83~182.80、1.26~125.80、1.81~180.80、2.02~202.40μg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 9、0.999 9、0.999 9、0.999 9、0.999 9、0.999 8、0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤0.3%;环孢素平均回收率为99.94%,RSD=0.10%(n=3)。结论:本方法准确、可靠、灵敏度高、专属性强,可用于环孢素注射液的质量控制。     

霉酚酸酯联合环孢素治疗难治性肾病综合征12例疗效分析

肾病综合征(NS)是肾内科常见的肾脏疾病,主要表现是大量蛋白尿,临床上大量蛋白尿是导致肾功能恶化的独立危险因素。无论是原发性还是继发性,还是不同病理类型的NS,若大量蛋白尿得不到有效控制,将导致肾组织进行性纤维化,继而逐渐发展至终末期肾病。有报道[1]约有57%表现为频繁反复型肾病综合征(FRNS)或激素依赖型肾病综合征(SDNS)。激素抵抗性肾病综合征(SRNS)     

霉酚酸酯与环孢素A治疗原发性难治性肾病综合征的效果比较

目的 探究霉酚酸酯(MMF)与环孢素A(CsA)分别联合泼尼松治疗原发性难治性肾病综合征(RNS)的效果及安全性.方法 选取2017年6月至2020年6月周口市中心医院儿科收治的82例RNS患儿,所有患儿按照就诊顺序进行编号,采用1～100随机数字表选取前41例为观察组,剩余41例为对照组,两组患儿均给予泼尼松治疗,观察组在此基础上加用MMF,对照组加用CsA,3个月后观察两组患者的治疗疗效,尿蛋白减少<50％者停止用药,超过50％者继续治疗至6个月时将MMF和CsA降低为维持剂量,总疗程为12个月,比较两组治疗效果、肾功能、免疫功能、复发情况以及药物不良反应.结果 观察组和对照组治疗6个月时缓解率分别为89.47％和94.59％,差异无统计学意义(P>0.05).观察组达到缓解时间长于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗6个月时,两组患者血肌酐(Scr)和24 h尿蛋白定量(24 h-Upro)较治疗前均降低(P<0.05),清蛋白(ALB)水平较治疗前升高(P<0.05),外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞占比以及CD4+/CD8+比值较治疗前均升高(P<0.05),两组间各指标差值比较,差异均无统计学意义(P>0.05).观察组和对照组治疗6个月后中位随访时间分别为18(14,29)个月和19(13,30)个月,两组患儿复发次数、频复发率和维持缓解时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);观察组毛发/齿龈增生发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组患儿感染、肝毒性、胃肠不适、白细胞减少和肾毒性发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 MMF和CsA治疗RNS患儿均具有良好效果,CsA起效时间更快,MMF不良反应相对较少.     

环孢素对小鼠牙龈上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的观察环孢素(CsA)对小鼠牙龈上皮细胞增殖和凋亡的影响,探讨环孢素导致龈增生的机制。方法CsA胃饲小鼠8d后注射5-溴-2-尿嘧啶核苷(BrdU),在不同时间取小鼠牙龈及腭黏膜组织作BrdU染色,光镜下观察其上皮中阳性细胞的数目、分布以及完全代谢的周期,并与对照组比较。结果实验组小鼠的牙龈上皮中阳性细胞数与对照组比没有差异,但其生长周期比对照组长。其腭黏膜上皮细胞生长周期较牙龈黏膜上皮细胞无明显延长,阳性细胞数与对照组比较无差异。结论CsA可抑制小鼠牙龈上皮细胞的凋亡,但对细胞增殖没有影响。     

环孢素联合重组人促红细胞生成素治疗慢性再生障碍性贫血的疗效评价

目的 比较环孢素(CsA)联合重组人促红细胞生成素(rhEPO)和单用CsA治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)的疗效和安全性。方法 回顾性分析2016年1月至2018年6月北京协和医院血液科收治的79例初治CAA患者的临床资料,其中45例采用CsA+ rhEPO治疗,34例仅采用CsA治疗。入选患者使用CsA至少1.5~2.0年,并随访至少1.0年。比较CsA+ rhEPO组和CsA组患者的疗效、不良反应和长期转归,分析可能的疗效影响因素。 结果 CsA+rhEPO组45例患者中,男14例,女31例,中位年龄43(19,73)岁;CsA使用的中位时间为26(12,38)个月,rhEPO使用的中位时间为4(3,6)个月,中位随访时间为24(12,42)个月。CsA组34例患者中,男16例,女18例,中位年龄36(16,85)岁;CsA使用的中位时间为24(12,40)个月,中位随访时间为25(12,40)个月。两组患者治疗前各临床特征比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。治疗后6个月,CsA+rhEPO组患者的部分缓解(PR)(53.3%比25.0%;χ²=6.181,P=0.019)和总反应(OR)(55.6%比31.3%;χ²=4.456,P=0.040)均明显高于CsA组,两组的完全缓解(CR)差异无统计学意义(2.2%比6.3%;χ²=0.810,P=0.567);CsA+rhEPO组和CsA组患者在治疗后3、12个月和随访期末的CR、PR及OR差异均无统计学意义(P均>0.05)。 CsA+rhEPO组患者在治疗6个月时的血红蛋白水平明显高于 CsA组[(102.6±24.0)g/L比(90.3±29.1)g/L;t=2.017,P=0.047],在治疗3、12个月及随访期末与 CsA组差异均无统计学意义(P均>0.05)。 rhEPO组11.1%(5/45)的患者出现注射部位疼痛,两组患者在肌酐升高、胆红素轻度升高、转氨酶升高、牙龈轻中度增生、胃肠道反应和肌颤等不良反应方面差异均无统计学意义(P均>0.05)。在随访期内,两组患者的克隆演变率相仿,均无死亡病例。未发现影响rhEPO疗效的临床预测因素。结论 与CsA单药治疗相比,CsA联合rhEPO治疗CAA在6个月时有更高的有效率及血红蛋白水平,两组不良反应无明显差别。     

玉屏风颗粒联合泼尼松和环孢素治疗特发性膜性肾病的临床研究

目的 分析玉屏风颗粒联合泼尼松和环孢素治疗特发性膜性肾病的临床疗效。方法 选取河池市中医医院在2020年3月—2022年7月收治的90例特发性膜性肾病患者,随机分为对照组和治疗组,每组各45例。对照组口服醋酸泼尼松片,起始剂量为1 mg/(kg∙d),共服用4周,此后每周减量10 mg维持;同时口服环孢素胶囊,剂量为3～5 mg/(kg∙d),1次/12 h。治疗组在对照组方案基础上口服玉屏风颗粒,5 g/次,3次/d。两组患者治疗3个月。观察两组患者临床疗效,比较治疗前后两组患者中医证候积分,肾功能指标24 h尿蛋白定量（24 h UP）、血尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）和血清白蛋白（Alb）,及Th17/Treg免疫平衡指标。结果 治疗后,治疗组临床有效率为（91.11%）明显高于对照组（73.33%,P＜0.05）。治疗后,两组患者中医症候积分均有降低（P＜0.05）;治疗组主要中医证候积分均明显低于对照组（P＜0.05）。治疗后,两组患者24 h UP、BUN、Scr、Th17、Th17/Treg明显低于治疗前,而Alb和Treg高于治疗前（P＜0.05）,且治疗组肾功能指标和免疫指标明显好于对照组（P＜0.05）。结论 玉屏风颗粒联合泼尼松和环孢素治疗特发性膜性肾病临床疗效显著,可改善患者主要中医症候和肾功能指标,调节Th17/Treg免疫平衡态,治疗安全性较好。