脑脉利颗粒对斑马鱼血管新生的促进及对血小板聚集性血栓形成的预防作用研究

目的初步研究脑脉利颗粒对斑马鱼血管新生的促进作用与机制,及其对血小板聚集性血栓形成的预防作用,为临床用药提供更有价值的理论支持。方法通过对斑马鱼肠下血管面积、肠下血管出芽数、总RNA浓度和纯度、心脏红细胞染色强度等指标,评价脑脉利颗粒对斑马鱼血管新生的促进作用和血小板聚集性血栓形成的预防作用。结果脑脉利颗粒在250和500μg/ml浓度时有显著的血管新生促进作用,且在500μg/ml浓度时能明显上调VEGFR1基因表达(P0.01),在1 000μg/ml浓度时有显著的血栓形成预防作用(P0.01)。结论脑脉利颗粒具有显著的血管新生促进作用,机制可能与上调VEGFR1的表达有关,且对血栓形成有显著的预防作用。     

非肌性肌球蛋白II-C在斑马鱼胚胎发育过程中的表达*

目的：分析NM II-C在斑马鱼胚胎发育过程中表达的时空变化。方法：收集不同发育阶段的斑马鱼胚胎，应用整体原位杂交技术研究NM II-C在斑马鱼胚胎发育过程中的表达变化情况。结果：受精后17和22小时，NM II-C由原先的广泛表达渐渐集中于前脑、中脑和后脑；受精后26和36小时，NM II-C表达分布到整个中枢神经系统；受精后48小时，NM II-C表达在脊髓变得很弱，主要集中于大脑。结论：揭示了NM II-C基因在斑马鱼胚胎发育过程中的时间和空间上的表达进程，为进一步探讨其在发育中的调控作用提供了实验基础。     

马兜铃酸对斑马鱼的耳毒性及肾毒性研究

目的探讨马兜铃酸对斑马鱼的耳毒性及肾毒性。方法①使用不同浓度的马兜铃酸处理受精后5天(5 dpf)的AB系斑马鱼,探索马兜铃酸对斑马鱼的最大非致死浓度(maximum non-lethal concentration,MNLC)。②依据MNLC选取4个浓度(MNLC、1/2MNLC、1/4MNLC及1/8MNLC)为实验组,2.5μg/ml庆大霉素为阳性对照组,溶剂组[1.0%二甲基亚砜(DMSO)]为阴性对照组,每组分别处理30尾斑马鱼。24 h后,每组取10尾斑马鱼用DASPEI染料对斑马鱼身体侧线毛细胞进行荧光染色,分析马兜铃酸对毛细胞的影响。每组剩余的20尾斑马鱼继续饲养至72 h,观察肾包膜的情况。结果①实验所用马兜铃酸浓度无法得出其MNLC,取其中未出现斑马鱼死亡的最大浓度(3.4μg/ml)为MNLC。②庆大霉素组毛细胞的损伤率为88.5%,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);马兜铃酸MNLC组、1/2MNLC组、1/4MNLC组及1/8MNLC组毛细胞损伤率分别为-7.2%、6.9%、-0.4%、12.4%,与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。③继续处理斑马鱼至72 h后,马兜铃酸MNLC组斑马鱼全部死亡;1/2MNLC组10%的斑马鱼死亡,余下11.1%的斑马鱼出现严重的肾包膜水肿;1/4MNLC组、1/8MNLC组未观察到肾包膜水肿。结论本实验所用浓度的马兜铃酸对斑马鱼有肾毒性,无耳毒性。     

斑马鱼在中医药复方中的应用研究进展

斑马鱼是一种新兴的实验动物。它因获取方便,饲养简单,给药操作便捷,便于观察实验反应过程,生殖周期短,繁殖能力极强,价位较其他实验动物便宜,基因与人类基因具有87%同源性等特点,如此特有的优势引起诸多相关学者的关注。中医药复方是我国传统医学的灵魂所在,具有成分复杂,作用靶点众多,干预多条信号转导通路等特点,是治疗疾病不可或缺的利器,在我国医疗界占有重要的地位。目前,采用斑马鱼复制各个系统疾病的模型,并用中医药复方治疗,观察其疗效,并试图探索其作用机制的形势锐不可当。为了更好地发展传统医学,应该了解已开展过的中医药复方针对斑马鱼疾病模型的研究情况,结合各自的研究方向找到一条新的研究思路。该文通过知网检索到45篇符合使用斑马鱼研究中医药复方的文章,作者分为中枢神经系统类疾病、炎症、心血管疾病、血管损伤类疾病、骨质疏松症、肿瘤、类风湿关节炎、肝损伤8类进行介绍。     

健脾疏肝降脂方对过度喂养导致的肥胖斑马鱼脂质代谢的影响

目的研究斑马鱼作为治疗肥胖药物筛选模型的可行性以及健脾疏肝降脂方对肥胖斑马鱼脂质代谢的影响。方法将受精14 d的斑马鱼分为对照组、模型组(0 mg/L)、高剂量组(1 600 mg/L)、中剂量组(400 mg/L)和低剂量组(100 mg/L),对照组正常喂养,其余4组过度喂养。过度喂养后的斑马鱼在相应浓度的药液中浸泡,每天浸泡8 h。药物干预56 d后测量斑马鱼的体长、体质量,计算肥满度,检测斑马鱼总胆固醇和三酰甘油水平、肝脏的组织学变化以及脂肪堆积情况。结果模型组斑马鱼质量、肥满度和三酰甘油水平均比对照组高(P0.05);与模型组比较,高剂量组斑马鱼质量、肥满度和三酰甘油水平均降低,差异有统计学意义(P0.05);中剂量组斑马鱼三酰甘油水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。模型组肝脏组织学变化、脂肪堆积明显,健脾疏肝降脂方组斑马鱼肝脏组织学变化、脂肪堆积少于模型组。结论斑马鱼可成功用于建立肥胖模型;健脾疏肝降脂方可有效降低斑马鱼体脂水平,降脂效果明显。     

去水卫矛醇对斑马鱼神经发育毒性评价

目的 探讨去水卫矛醇(dianhydrogalactitol,DAG)诱导斑马鱼胚胎及幼鱼神经发育毒性作用及其机制。方法 在一般毒性评价的基础上,对斑马鱼胚胎进行相应的分组暴露给药,采用幼鱼的自主运动反应、光照刺激反应等试验观察DAG对斑马鱼神经及行为的影响;通过脑部组织病理学检查、吖啶橙染色,观察DAG对斑马鱼脑部的组织影响;利用实时荧光定量PCR方法测定斑马鱼幼鱼体内多巴胺神经元相关基因(DAT、TH、GCH1)及神经抑/促凋亡相关基因(Bax、Bcl-2)的相对表达量。结果 DAG在20,40,75 mg·mL^-1下能明显抑制斑马鱼的自主运动,且自主运动抑制率呈现明显的浓度相关性;DAG在20,40,75 mg·mL^-1下对斑马鱼反应速度有较明显的抑制作用,反应能力下降率呈现浓度相关性;DAG各浓度组斑马鱼脑组织形态变小,但组织结构均未见显著异常;采用吖啶橙染色检测斑马鱼整体胚胎细胞凋亡情况,发现给药组头部绿色荧光比对照组明显,说明细胞凋亡增多,且细胞凋亡呈剂量依赖性增加,与表观一致;DAG在75,150,300,425,600 mg·L^-1下可导致斑马鱼幼鱼多巴胺能神经元相关基因DAT、TH、GCH1的mRNA相对表达量下调,Bax/Bcl-2的RNA相对表达量随着给药浓度增加而上升。结论 高浓度DAG对斑马鱼胚胎和幼鱼具有神经发育毒性作用,可能与多巴胺能神经元的抑制作用有关。     

补骨脂酚的提取纯化工艺优选及其对骨质疏松症的治疗作用分析

目的:优选补骨脂酚的提取纯化工艺,并考察其对骨质疏松症的治疗作用。方法:使用乙醇回流法提取,经D101型大孔树脂纯化,通过单因素试验优选工艺条件,冷冻干燥后得到补骨脂酚;采用斑马鱼体内试验评价补骨脂酚对骨密度和骨骼发育钙化的影响。结果:优选的工艺条件为加8倍量85%乙醇浸泡过夜,回流提取3次,每次2 h,边搅拌边往补骨脂酚粗提物中加入0.2%氢氧化钠水溶液至完全溶解,过预处理好的D101型大孔树脂柱处理,上样流速1 BV·h~(-1),静置4 h,加水6 BV洗脱,用60%乙醇2 BV洗脱,加95%乙醇4 BV洗脱,收集95%乙醇的洗脱液;制备的补骨脂酚质量分数80%,收率10%。斑马鱼体内活性研究表明补骨脂酚能提高斑马鱼骨质疏松症的骨密度,且能促进正常斑马鱼骨骼发育钙化。结论:此工艺具有绿色环保、操作简便等优点,所得补骨脂酚的纯度和收率均比较理想,可开发成预防或治疗骨质疏松症的药品和食品。     

斑马鱼模型在药物非临床毒代动力学研究中的应用

斑马鱼是一种简单的生物实验动物,拥有和哺乳动物相似的生物结构与生理功能。斑马鱼模型在药物毒代动力学的研究应用前景十分广阔,采用斑马鱼模型研究药物在体吸收、分布和代谢过程,能够减少实验研究的假阴性或假阳性结果,提高实验准确性;采用斑马鱼模型进行一般毒理学实验的毒代动力学研究,有助于一般毒理学实验研究的剂量选择和靶器官确定;采用斑马鱼模型进行生殖与发育毒性实验的毒代动力学研究,可以提高生殖与发育毒性实验的预测性。本文主要就以上几个方面对药物在斑马鱼体内的吸收、分布和代谢过程以及该模型在药物非临床毒代动力学中的应用进行论述。     

模式动物斑马鱼在组织屏障发育及功能研究中的进展

斑马鱼作为一种新型的模式动物,以其独特的优势,已经成为现代遗传学、发育生物学等研究的重要模式生物。与人类及其它高等脊椎动物相似,斑马鱼同样具有不同的组织屏障系统。近年来,此领域的研究者利用斑马鱼对血脑屏障等组织屏障的研究取得了重要的进展。这对揭示诸多生理屏障相关的人类疾病的发病机制,以及探讨通过调控组织屏障通透性来达到药物有效投递的可行性等研究具有重要的启示作用。本文将介绍近年来斑马鱼作为模式动物在血脑屏障、血-视网膜屏障、皮肤表皮屏障、肠粘膜上皮屏障等组织屏障发育和功能研究中的最新进展。     

Midkine-a通过限制心肌细胞总数的方式阻碍斑马鱼胚胎心脏生长

目的 探讨一种可溶性的外分泌因子Midkine-a在斑马鱼胚胎心脏发育过程中的功能。方法 在整体胚胎上做Midkine-a RNA的原位杂交实验;利用原有的转基因斑马鱼系Tg (pMidkine-a:EGFP),动态观察胚胎从出生到心脏发育成形这一段时间心脏荧光表达情况;将原有的转基因斑马鱼体系 Tg (phsp:Midkine-a:EGFP) 胚胎进行热休克而过表达Midkine-a,观察胚胎心脏表型;利用Tg (pcmlc2:dsRed)鱼系胚胎的心肌细胞核带有红色荧光,能进行单个心脏心肌细胞计数这一特点,将杂合的Tg (phsp:Midkine-a:EGFP)鱼系与纯合的Tg (pcmlc2:dsRed)鱼系交配,以得到Tg (phsp:Midkine-a:EGFP/pcmlc2:dsRed)的杂合胚胎,对其进行热休克而过表达Midkine-a,计算每个胚胎心脏内心肌细胞的总数; 用吗啉寡聚核苷酸 （Morphonino,MO）阻碍新生胚胎内的Midkine-a mRNA 表达,观察胚胎心脏表型。结果 原位杂交试验证实Midkine-a在胚胎48hpf （hours post fertilization, 受精后小时,用来标记斑马鱼胚胎年龄）大时表达于心脏;转基因Tg (pMidkine-a:EGFP)胚胎在72hpf时其EGFP表达于心脏;Tg(phsp:Midkine-a:EGFP) 胚胎在过表达Midkine-a后心脏变小;吗啉寡聚核苷酸敲除Midkine-a对胚胎心脏发育无影响;最后在Tg (phsp:Midkine-a:EGFP/pcmlc2:dsRed)鱼系胚胎内过表达Midkine-a导致其单个心脏内心肌细胞数目变少,与其小心脏外形吻合。结论 Midkine-a在斑马鱼胚胎发育过程中表达于胚胎心脏;过表达Midkine-a导致胚胎心脏内心肌细胞总数减少及心脏变小;敲除Midkine-a则对胚胎心脏发育无影响。