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1.
2.
目的 建立一种能够快速鉴定人参和西洋参的双重实时荧光PCR方法。方法 通过对人参属及其近似种基因序列的分析比对,设计特异性的引物探针,建立双重实时荧光PCR检测方法。PCR反应体系为Premix Ex Taq (Probe qPCR) 10 μL,人参上下游引物各0.5 μL,西洋参上下游引物各0.3 μL,人参与西洋参特异性探针各0.4 μL,DNA模板2 μL,灭菌去离子水补至20 μL。反应条件为95℃预变性30 s;然后以95℃变性5 s,60℃退火延伸30 s进行40个循环。应用该方法测试了27份DNA样品,包括7份人参、6份西洋参、4份人参与西洋参混合样、10份其他人参属样品及其他常见中药材样品的DNA,以确定该方法的特异性。将人参与西洋参样品DNA混合后10倍稀释成不同浓度后进行检测,用以确定该方法的灵敏度。结果 人参及西洋参样品均在特定的荧光通道下出现典型的阳性扩增曲线,人参与西洋参混合样品均同时出现两条阳性扩增曲线,其它对照样品及空白对照均没有出现阳性扩增曲线。灵敏度检测结果显示该方法检测人参及西洋参的最低检测限均为2 pg DNA/反应。结论 本实验建立的双重实时荧光PCR方法能够同时快速、准确、灵敏地鉴别出人参和西洋参。  相似文献   
3.
田冶  葛帅娜  李军  陶天柱 《武警医学》2022,33(2):140-143
 目的 探讨人参皂苷Rg1对海水淹溺性肺损伤的保护作用及其机制。方法 128只雄性SD大鼠随机均分为4组:空白对照组(C组)、生理盐水组(S 组)、20 mg/kg低剂量人参皂甙Rg1组(L组)、100 mg/kg高剂量人参皂苷Rg1组(H组)。L组和H组分别经尾静脉注射人参皂苷20或100 mg/kg, S组尾静脉注射等容的生理盐水,给药2 h后建立海水淹溺性肺损伤模型。分别于吸入海水前(基础值T0)、吸入海水后30 min(T1)、1 h(T2)、2 h(T3)和4 h(T4)各时间点检测动脉血PaO2和PaCO2的动态变化;于建模后2 h和4 h取出肺组织和外周血标本,检测肺湿干重比(W/D)、肺泡灌洗液蛋白定量(BALF)、超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)和细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度,取建模后4 h的右肺下叶组织行HE病理检查。结果 T0时4组的动脉血 PaO2、PaCO2差异均无统计学意义。T1~T4时S和L组PaO2明显低于 H组(P<0.05),S和L组PaCO2明显高于H组(P<0.05)。T3和T4时,S、L和H组肺组织 W/D比值均明显高于C组(P<0.05),H 组肺组织 W/D明显低于S组和L组(P<0.05)。H 组 MDA浓度和MPO活性明显低于S组和 L组(P<0.05), H 组SOD活性明显高于S组和 L组(P<0.05)。H 组血清中炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显低于S组和L组。HE病理染色显示H 组肺泡塌陷、水肿及炎性细胞浸润较S组明显减轻。结论 预防性使用人参皂苷Rg1(100 mg/kg)能显著减轻海水淹溺导致的早期(4 h内)肺损伤,其保护机制与减轻肺内的炎性反应和氧化应激相关。  相似文献   
4.
目的:评估基于分离胶的两种前处理方法联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix?assisted laser desorption ionization?time of flight mass spectrometry,MALDI?TOF MS)直接鉴定血培养阳性病原菌的临床应用价值。方法:收集2020年5—11月南京医科大学第一附属医院血培养阳性标本302例,分离胶?皂甙法和分离胶沉淀法分别处理后对阳性血培养标本进行快速鉴定,结果分别与培养鉴定结果比较。结果:分离胶?皂甙法可在45 min内完成鉴定,分离胶沉淀法需20 min;单数菌感染标本288例,使用两方法直接鉴定的准确率均为86.81%(250/288),其中两方法分别鉴定革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌、革兰阳性杆菌、真菌的准确率差异无统计学意义(P > 0.05);复数菌感染标本14例,仅分离胶?皂甙法1例与培养鉴定结果一致,其余标本两种方法均仅可准确鉴定其中的一种细菌。结论:两种基于分离胶的前处理方法联合质谱均可直接、快速、准确地鉴定血培养病原菌,分离胶沉淀法可作为本实验室血培养快速鉴定常规的前处理方法。  相似文献   
5.
目的:探究人参皂苷Rg3对肝癌细胞增殖的影响及其作用机制.方法:以人肝癌细胞系HepG2为研究对象,分为对照组(Control)、人参皂苷Rg3组(G-Rg3)、人参皂苷Rg3+Dickkopf相关蛋白3无关片段组(G-Rg3+DKK3-NC)以及人参皂苷Rg3+Dickkopf相关蛋白siRNA组(G-Rg3+DKK3-siR-NA).其中G-Rg3组细胞给予G-Rg3(40mg/L)干预48h;G-Rg3+DKK3-NC组细胞转染DKK3-NC 24h,后G-Rg3干预48h;G-Rg3+DKK3-siRNA组细胞转染DKK3-siRNA后,G-Rg3干预48h;Control组细胞正常培养.MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质免疫印迹法检测DKK3、Wnt、β-连环蛋白(β-catenin)表达.结果:与Control组相比,G-Rg3组细胞凋亡指数显著升高(P<0.01)、细胞增殖显著降低(P<0.01)、DKK3表达显著升高(P<0.01),Wnt和 β-catenin表达均显著降低(P<0.01);与G-Rg3组相比,G-Rg3+DKK3-siRNA组细胞凋亡指数显著降低(P<0.01)、细胞增殖显著增加(P<0.01)、DKK3表达显著降低(P<0.01),Wnt和β-catenin表达均显著升高(P<0.05或P<0.01).结论:G-Rg3能够抑制肝癌细胞增殖,促进凋亡,其机制与促进DKK3表达,抑制Wnt/β-catenin信号传导相关.  相似文献   
6.
目的:应用简单重复序列(SSR)标记对人参属植物人参、西洋参和三七进行鉴别。方法:利用EGassembler对NCBI的EST数据库进行预处理,SSRIT网站寻找SSR位点后用Primer3设计特异性引物。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳2种方法筛选并验证EST-SSR引物的通用性。应用筛选的SSR引物构建标准指纹图谱并对市售商业参类产品的原材料进行鉴定。结果:应用生物信息学的方法共筛选出7对EST-SSR标记可以用于人参、西洋参和三七的鉴定。在市售商业产品的检测中,以引物P2和Q11的联合检测阳性率最高。结论:SSR标记具有较高的重复性和准确性,可以作为人参属植物可靠的分子标记。  相似文献   
7.
目的 优化大孔吸附树脂分离纯化血人参总黄酮的工艺条件,研究血人参总黄酮对酪氨酸酶的抑制作用。方法 以吸附率、解吸率等为考察指标,采用静态吸附-解吸试验对6种不同型号的大孔吸附树脂进行筛选,优选最佳的树脂型号。采用单因素试验考察上样液pH、上样液浓度、上样体积、上样体积流量、洗脱溶剂、洗脱液体积流量、洗脱剂体积对血人参总黄酮纯化的影响,确定最佳纯化工艺;以L-酪氨酸、L-多巴为底物,测定血人参总黄酮对酪氨酸单酚酶和二酚酶的抑制作用,并对其抑制机理和抑制类型进行分析。结果 AB-8型大孔吸附树脂对血人参总黄酮的分离纯化效果最好。最佳纯化工艺参数为:上样液pH为4、上样体积为70 mL(4.7 BV)、上样体积流量为1 mL·min-1、上样液浓度为5.38 mg·mL-1、洗脱溶剂为70%乙醇、洗脱剂体积流量为3 mL·min-1、洗脱剂体积为120 mL(8 BV),血人参总黄酮对酪氨酸单酚酶和二酚酶均有抑制作用,其最大半数抑制浓度分别为88.78 mg·L-1和36.46 mg·L-1,对二酚酶的抑制类型为可逆非竞争性抑制。结论 AB-8型大孔吸附树脂可用于纯化血人参总黄酮,纯化后血人参总黄酮的纯度为46.01%,建立的工艺条件稳定可靠。纯化后的血人参总黄酮对酪氨酸酶有抑制作用,抑制类型为可逆非竞争性抑制。  相似文献   
8.
目的 研究人参-陈皮配伍治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的主要活性成分和潜在的分子作用机制。方法 从TCMSP数据库中获取人参、陈皮的活性成分和潜在靶点,疾病靶点利用DrugBank、TTD、GeneCards数据库获取。“药物-化合物-靶点”互作网络可视化由Cytoscape3.6.1软件完成。通过绘制韦恩图得到人参、陈皮和COPD的共有靶点,运用Cytoscape平台获取共有靶点相互作用关系。通过DAVID数据库对共有靶点进行GO、KEGG富集分析。活性成分和关键靶点的分子对接由autodock vina实现,并采用体外抗炎活性实验进行验证。结果 从人参和陈皮中共筛选得到27个活性成分,800个疾病靶点,药物和疾病共有靶点70个。GO功能富集分析得到GO条目213个(P<0.01),KEGG通路富集筛选得到99条信号通路(P<0.01)。分子对接结果显示,甾醇类成分和黄酮类成分与关键靶点有较高的结合性。体外抗炎活性验证结果表明,川陈皮素、山奈酚、柚皮素、人参皂苷rh2能够减少炎症因子的分泌。结论 人参-陈皮配伍可通过多成分、多靶点和多通路调控炎症因子释放,达到治疗COPD的效果。  相似文献   
9.
[目的] 观察人参皂甙-Rb1(ginsenoside-Rb1,GS-Rb1)对大鼠创伤性颅脑损伤(traumatic brain injury,TBI)的治疗作用与神经元线粒体自噬激活的关系。[方法] 将80只体质量350~400 g的SD雄性大鼠随机分为假手术组、TBI组、治疗(TBI+GS-Rb1)组和自噬阻断[TBI+GS-Rb1+6-氨基-3-甲基嘌呤(3-methyladenine,3-MA)]组,每组20只。以液压打击仪建立TBI模型,根据上述分组,分别给予腹腔注射GS-Rb1及自噬抑制剂3-MA。每组选10只大鼠进行行为学检测,并以苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色行神经元形态学检测。其余10只分离海马区皮质,以免疫印迹法检测自噬相关轻链蛋白3-Ⅱ/轻链蛋白3-Ⅰ(light chain 3-Ⅱ/ light chain 3-Ⅰ,LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ)、自噬接头蛋白(sequestosome-1,P62)、线粒体功能相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子-1 alpha(peroxisome proliferators-activated receptor γ coactivator-1 alpha,PGC-1α)、线粒体外膜转位蛋白20(translocase of outer mitochondrial membrane 20,TOM20)及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白(B cell lymphoma-2 associated X protein,Bax)、裂解的半胱天冬酶3(cleaved-cysteinyl aspartate specific proteinase 3,cleaved-caspase 3)的表达;采用黄嘌呤氧化酶法、硫酸代巴比妥法、二硫代硝基苯甲酸缩合法分别检测氧化应激相关因子超氧物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平。[结果] 与TBI组比较,治疗组神经损伤严重程度评分(neurological severity score,NSS)明显下降(P<0.05),神经元损伤程度明显缓解,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ比例明显升高,而P62表达明显降低,线粒体功能及结构相关蛋白PGC-1α、TOM20则明显升高,MDA水平明显降低,而SOD和GSH则呈相反趋势(P<0.05),凋亡促进因子Bax及cleaved-caspase 3表达明显降低(P<0.05)。采用自噬抑制剂3-MA可明显抑制GS-Rb1对TBI后神经功能及形态损伤的治疗效应(P<0.05)。[结论] GS-Rb1可能通过促进神经元线粒体自噬,抑制凋亡途径,从而保护神经元,以起到对TBI的治疗作用。  相似文献   
10.
人参药材等级标准   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:通过对人参药材的性状与主要化学成分指标进行分析,探索人参药材性状与成分指标间的关联性,建立新的人参等级评价标准,为人参药材的质量评价提供更加全面而科学的依据。方法:对48批人参样品的外观性状特征进行量化测量,测定9种人参皂苷指标性成分的含量,将内外指标测定结果进行相关性分析、主成分分析及聚类分析,依据分析结果合理划分人参药材等级并构建等级评价标准。结果:一等人参药材:主根直径1.72 cm,芦头长度2.61 cm,单支参重14.15 g,人参皂苷Rb_1质量分数0.612 1%,人参皂苷Re质量分数0.385 8%,人参皂苷Rg_1质量分数0.320 8%,无破疤、杂质、虫蛀、霉变。二等人参药材:主根直径为1.55~1.72 cm,芦头长度1.74~2.61 cm,单支参重10.24~14.15 g,人参皂苷Rb_1质量分数0.496 8%~0.612 1%,人参皂苷Re质量分数0.323 3%~0.385 8%,人参皂苷Rg_1质量分数0.263 6%~0.320 8%,无破疤、杂质、虫蛀、霉变。三等人参药材:主根直径为1.29~1.55 cm,芦头长度1.34~1.74 cm,单支参重6.90~10.24 g,人参皂苷Rb_1质量分数0.389 5%~0.496 8%,人参皂苷Re质量分数0.235 2%~0.323 3%,人参皂苷Rg_1质量分数0.217 1%~0.263 6%,无杂质、虫蛀、霉变。四等人参药材:主根直径为1.29 cm,芦头长度1.34 cm,单支参重6.90 g,人参皂苷Rb_1质量分数0.389 5%,人参皂苷Re质量分数0.235 2%,人参皂苷Rg_1质量分数0.217 1%,无杂质、虫蛀、霉变。结论:以主根直径、芦头长度、单支参重为人参药材等级标准划分的外观指标,以人参皂苷Rg,Re,Rb_1的含量作为药材内在质量评价指标。制定人参商品规格分为4级,综合了外观和内在指标,具有科学性、全面性的特点,可作为人参药材等级标准的划分依据。  相似文献   
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