长白山地区药用植物龙胆DNA条形码鉴定

目的：基于内转录间隔区2（internal transcribed spacer 2，ITS2）碱基序列，运用DNA条形码鉴定技术对长白山地区药用植物龙胆进行鉴别研究，为龙胆药材的基原植物鉴定和药材的真伪鉴别提供参考。方法：采用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）提取法提取龙胆叶片及药材的DNA，对其中特定ITS2碱基序列进行聚合酶链式反应（PCR）扩增，检测后测序，并从GenBank下载同属植物序列，运用SeqMan软件对碱基序列拼接后，采用MEGA 7.0软件对数据进行分析处理及对比，计算Kimura 2-parameter （K2P）遗传距离，建立邻接（NJ）法，进行对比分析。结果：根据NJ聚类树可知，不同种龙胆属植物笔龙胆、三花龙胆、高山龙胆、坚龙胆都自为一支，区分明显，龙胆和条叶龙胆聚在一支未能区分开，同时结合变异位点及K2P遗传距离发现，条叶龙胆和龙胆应用ITS2碱基序列区分时种间差异十分小。吉林省长白山10个不同地区的龙胆种内几乎无差异，经Blast比对确定碱基序列的确为所需要鉴定的品种。结论：运用ITS2碱基序列的DNA分子条形码鉴别方法对龙胆植物及药材进行鉴别有效可行且成功率较高，可以用于龙胆属种间及种内鉴别。     

携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

目的:探讨携带凋亡素基因(apopptin)的溶瘤腺病毒ATV感染对人宫颈癌HeLa 细胞自噬和凋亡的影响。方法: 分别用携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV与对照病毒Ad-MOCK(均为前期工作构建）感染HeLa 细胞后，应用WST-1 法检测ATV感染对HeLa 细胞增殖的影响，流式细胞术检测ATV感染对HeLa 细胞凋亡和细胞周期的影响，Western blotting 法检测ATV感染对HeLa 细胞自噬相关蛋白LC3、P62 与mTOR表达的影响，MDC染色法检测ATV 感染对HeLa 细胞自噬水平的影响。结果:ATV感染后抑制HeLa细胞增殖，并具有一定的时间效应关系；以ATV 100 MOI感染72 h 后抑制率达到59.26%，其抑制能力明显强于同时间段对照组(P<0.01)。ATV 感染48 h，ATV 组HeLa 细胞凋亡率显著高于对照组[(38.995±4.009)% vs (14.680±1.174)%,P<0.01]。感染后的HeLa 细胞，随着ATV 作用时间的延长，S 期出现阻滞，48 h 阻滞最强，显著高于对照组[ 58.490±2.447)% vs (43.235±4.419)%，P<0.05]。与对照组相比，ATV 感染HeLa 后，LC3 表达量6、12 h 逐渐增高，12 h 达到最大值（P<0.01），24 h 表达量最低（P<0.01）；P62 蛋白在24 h 出现最高表达水平（P<0.01）；而mTOR随着作用时间延长逐渐降低（48 h 时，P<0.01）。荧光显微镜下可见HeLa细胞核周区域MDC阳性染色，随着ATV作用时间延长，自噬小体明显增多；与对照组相比，6、12h 自噬小体数量显著增多(28.000±2.828) vs (8.500±2.121), (37.000±4.243) vs (14.000±1.414)；均P<0.01]，24 h 相对减少[(12.000±2.828) vs (17.000±1.414)，P<0.01]。结论: 携带凋亡素基因的ATV溶瘤腺病毒可促进人宫颈癌HeLa 细胞的凋亡和自噬水平，进而特异性杀伤肿瘤细胞。     

高速逆流色谱分离纯化天然产物中生物碱类成分应用进展

高速逆流色谱（hight-speed counter current chromatography,HSCCC）技术是国际上较新型的液-液分配色谱技术,近几年被广泛应用于天然产物的分离纯化和研制方面,在分离纯化天然产物中生物碱类化合物尤为突出。该文对高速逆流色谱技术在分离纯化天然产物生物碱类化学成分、活性成分;pH-区带精制逆流色谱在分离纯化生物碱的应用状况;以及高速逆流色谱与其他分析检测技术的联用进行了综述。     

米泔水制北苍术炮制工艺及其抗腹泻药效作用研究

目的对米泔水制北苍术的最佳炮制工艺进行优化,并对其抗腹泻作用进行研究。方法以单因素试验为基础,结合Box-Behnken设计-响应面法,以苍术素、浸出物和外观性状为综合评价指标,对米泔水用量、闷润时间、炒制温度和炒制时间4个因素进行考察,确定米泔水制北苍术的最佳炮制工艺。建立脾虚泄泻症大鼠模型,比较给药前后大鼠体质量和粪便含水率变化,并采用酶联免疫吸附法测定血清中二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)和分泌型免疫球蛋白(secreted immunoglobulin,SIgA)含量。结果响应面法得出米泔水制北苍术的最佳炮制工艺为米泔水中米水比例为1∶60,米泔水用量25 mL,炒制温度160℃,炒制时间30 min;与模型组比较,高剂量组米泔水制北苍术醇提取物可使脾虚泄泻大鼠的粪便含水率和DAO含量显著降低(P<0.01),体质量和SIgA含量显著增加(P<0.01),且接近阳性药水平;生苍术醇提取物对脾虚泄泻大鼠的粪便含水率、体质量、SIgA和DAO含量改善效果低于米泔水制北苍术(P<0.05、0.01)。结论响应面法简便稳定、准确可靠,可用于优化米泔...     

五年生鲜人参毒理学研究

目的 对五年生鲜人参的食用安全性进行毒理学评价.方法 采用小鼠、大鼠急性经口毒性试验、遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)、大鼠30d喂养试验.结果 雌、雄小鼠与大鼠经口最大耐受剂量(MTD)均大于19.2g/kg.bw.3项遗传毒性试验结果均为阴性,表明该受试物无致突变作用.在大鼠30d喂养试验中,实验动物均生长发育良好,体质量、摄食量、饮水量、血液学、血液生化学、脏器系数及病理组织学相关指标均未见异常变化.结论 五年生鲜人参属于实际无毒物,未见遗传毒性,长期服用安全.     

人参皂苷Re对UVC辐射损伤细胞的保护作用

目的：研究人参皂苷Re对短波紫外线（UVC）辐射损伤人胚胎纤维芽细胞RSa的保护作用,探讨人参皂苷Re抗UVC辐射的作用机制。方法：采用不同强度的UVC辐射RSa细胞,在辐射前后给予50 mg?L-1的人参皂苷Re（UVC+Re组）,同时设UVC模型组和UVC+Rg1组,利用MTT法检测细胞生存率,采用流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡情况;酶生化法检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）的活性,集落形成分析法检测SOD抑制剂作用细胞后细胞的生存率。结果：MTT法,与UVC模型组比较,UVC+Re和 UVC+Rg1组细胞生存率比较差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。FCM,不同剂量（5、10和15 J?m-2）的 UVC辐射可引起RSa细胞早期的凋亡,UVC+Re组细胞凋亡率小于UVC模型组。细胞周期检测,UVC辐射可导致G2期细胞百分比增加(P<0.01),UVC+Re组G2期细胞百分比例明显小于UVC模型组（P<0.01）。 UVC+Re组SOD活性明显高于UVC模型组（P<0.01）。结论：人参皂苷Re有较好的抗UVC效果,能够有效提高RSa细胞的生存率,减少UVC辐射引起的细胞早期凋亡,增加RSa细胞内SOD活性。     

川贝母对大鼠油酸型急性呼吸窘迫综合征的影响

目的：观察川贝母对油酸所致急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）大鼠肺组织的影响。方法：通过静脉注射油酸法建立大鼠ARDS模型。将40只模型大鼠随机均分为ARDS模型组,川贝母低剂量组,川贝母高剂量组,地塞米松组。另取10只Wistar大鼠作为空白对照组。在造模后0.5 h首次给药,1次/d,连续3 d。川贝母高、低剂量组分别给予5.0,2.5 mg/kg川贝母生药灌胃,空白对照组与模型组给予生理盐水灌胃,1 mL/100 g,地塞米松组给予地塞米松灌胃,10 mg/kg。测定各组大鼠左肺湿/干重比值（W/D）,检测肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量;酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）的含量。结果：与空白对照组相比,模型组大鼠左肺W/D、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高,SOD活性降低（P均〈0.05）;与模型组相比,川贝母高、低剂量组及地塞米松组大鼠左肺W/D、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低,SOD活性升高（P均〈0.05）。结论：川贝母可减轻油酸所致ARDS大鼠的肺组织病理损害程度,其机制可能是通过阻止体内脂质过氧化过程而实现。     

人参糖肽的结构及其对Aβ25-35处理PC12细胞的抗凋亡作用

目的：研究人参糖肽的结构,探讨其对β淀粉样蛋白_25-35（Aβ_25-35）处理PC12细胞凋亡的保护作用,为开发人参抗阿尔茨海默病（AD）药物奠定理论基础。方法：采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）与Q ExactiveOrbitrap质谱联用分析人参糖肽结构。将鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞分为6组,加入含不同浓度（0、6.25、12.50、25.00、50.00和100.00 μmol·L^-1） Aβ_25-35的培养基,采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法测定PC12细胞的存活率。将PC12细胞分为空白对照组、模型组和给药组,模型组加入含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基,给药组加入不同浓度（0.03、0.10、0.30和1.00 g·L^-1）人参糖肽和含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基。采用CCK-8法测定PC12细胞的存活率,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI法测定人参糖肽和Aβ_25-35处理后PC12细胞的凋亡率。将PC12细胞分为空白对照组、模型组和人参糖肽给药组,模型组加入含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基,给药组加入不同浓度（0.10和0.30 g·L^-1）人参糖肽和含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基,采用流式细胞术测定不同细胞周期PC12细胞的百分比。结果：人参糖肽结构分析得到肽链为NLSHYHSGSS、糖基为N1-HexNAc,肽链为SGSSSSSSSEDDGMGR、糖基为S6-HexNAc等20多个人参糖肽结构。当Aβ_25-35浓度为50 μmol·L^-1时,PC12细胞存活率为（55.45±2.34）%;与空白对照组比较,不同浓度Aβ_25-35处理组PC12细胞存活率明显降低（P<0.01）。与空白对照组比较,模型组PC12细胞存活率明显降低（P<0.01）;与模型组比较,给药组细胞存活率明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较,模型组PC12细胞凋亡率升高（P<0.01）;与模型组比较,给药组细胞凋亡率降低（P<0.05）。与空白对照组比较,模型组S期PC12细胞百分比升高（P<0.05）;与模型组比较,给药组S期PC12细胞百分比降低（P<0.05）。结论：利用质谱法分析得到人参糖肽结构。人参糖肽可有效抑制Aβ_25-35处理PC12细胞的凋亡,具有神经细胞保护作用,其抗凋亡活性作用可能与抑制细胞S期阻滞有关。     

柳松茸薏苡仁固体双向发酵物中多糖和蛋白质含量测定

目的：建立柳松茸与薏苡仁固体双向发酵产物中多糖、蛋白质的含量测定方法。方法：采用紫外分光光度法测定多糖和蛋白质含量,检测波长分别为530nm和595nm。结果：多糖浓度在0.008~0.080mg/mL范围内与吸收峰面积具有良好线性关系,回归方程为Y=15.986X-0.0126,r=0.9993,发酵产物多糖含量为54.54%;蛋白浓度在0.0078~0.0321mg/mL范围内与吸收峰具有良好线性关系,回归方程为Y=20.08263X＋0.14522,r=0.9993,发酵产物中蛋白含量为0.0994%。结论：该研究建立的方法简便、快速、准确、重复性好,为柳松茸薏苡仁固体双向发酵产物中多糖及蛋白质的含量测定提供了参考依据。