超声造影剂联合超声介导耐药基因反义寡脱氧核苷酸转染肝癌细胞逆转多药耐药效应的研究

目的 探讨超声造影剂联合超声介导mdr1、mrp基因反义寡脱氧核苷酸(ASODN)转染QGY耐药肝癌细胞对多药耐药(MDR)的逆转.方法 分别将mdr1、mrp-ASODN+超声造影剂+超声辐照转染QGY/CDDP肝癌细胞,检测转染后细胞贴壁率、药物敏感性、耐药基因mRNA表达和相应耐药蛋白表达变化.结果 mdr1-ASODN转染后,细胞贴壁率和耐药基因mRNA表达变化大(P＜0.05),细胞药物敏感性和耐药蛋白P-gp、MRP表达变化小(P＞0.05).实验组(2组)作用更大(P＜0.05).mrp ASODN转染后,细胞贴壁率、药物敏感性、耐药基因的mRNA表达和耐药蛋白P-gp、MRP表达均变化明显(P＜0.05),实验组(2组)作用更大(P＜0.05).结论 mdr1、mrp-ASODN+超声造影剂+超声辐照能够低毒部分逆转肝癌细胞MDR,是潜在肿瘤基因治疗方法.     

睾酮对青春期大鼠病理性攻击行为及前额叶皮质PSD-95和GAP-43表达的影响

目的 探讨去势后睾酮水平对青春期大鼠病理性攻击行为和前额叶皮质突触可塑性的影响.方法 将30只出生后21 d的雄性SD大鼠随机分为去势组、模型组和对照组.去势组和模型组大鼠采用国际通用应激方法建立病理性攻击模型,持续到青春期.采用居住-入侵实验检测青春期大鼠攻击行为,ELISA法检测睾酮水平,蛋白质印迹分析检测前额叶皮质突触后致密物质95(PSD-95)和生长相关蛋白43(GAP-43)表达水平.结果 居住-入侵实验结果显示,去势组攻击潜伏期显著低于模型组和对照组(P＜0.01,P＜o.01),屈服后继续攻击次数高于模型组和对照组(P＜0.01,P＜0.01).ELISA检测结果显示,去势组睾酮水平显著低于模型组和对照组(P＜0.01,P＜0.01),且睾酮水平与攻击各指标呈中-高度负相关(P＜0.01).蛋白质印迹结果显示,去势组前额叶皮质PSD-95和GAP-43表达水平均低于模型组和对照组(P＜0.01,P＜0.01).结论 低水平血清睾酮对青春期大鼠前额叶皮质结构可塑性有损伤,可能与其病理性攻击行为相关.     

耐药基因反义寡脱氧核苷酸经声学微泡及超声介导转染对QGY/CDDP细胞多药耐药的影响

肿瘤细胞多药耐药(MDR)是影响肝癌治疗效果的重要因素,因此逆转MDR成为研究肝癌治疗方法的热点之一.目前没有一个有效、靶向的肿瘤MDR逆转方法[1].本研究以声学微泡+超声+mdrl或mrp反义寡脱氧核菅酸(ASODN)逆转QGY/CDDP细胞多药耐药,探讨MDR的逆转方法及其机制.     

钙释放激活钙通道调节分子1促进结肠癌细胞系SW480的增殖

目的 探讨钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)对结肠癌细胞系SW480增殖的影响及其机制.方法 以ORAI1干扰慢病毒感染SW480细胞,分别用实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞中ORAI1mRNA和蛋白的表达,通过MTT法、集落形成实验和倍增时间检测细胞的增殖,流式细胞仪检测其周期,激光共聚焦显微镜检测细胞钙内流(SOCE),Western blot法检测细胞中ERK1/2、p-ERK1/2和CyclinD1蛋白表达.结果 SW480转染ORAI1干扰慢病毒72 h后,可见明显的荧光表达;干扰组较空病毒组和对照组,ORAI1的表达降低(P＜0.01)、细胞生长减慢(P＜0.05)、集落形成能力减弱(P＜0.01)、倍增时间延长(P＜0.01)、G1期细胞比例增高(P＜0.05)、SOCE内流峰值降低(P＜0.05)、p-ERK1/2和CyclinD1的蛋白表达量降低(P＜0.01).结论 ORAI1可能通过SOCE调节胞内Ca2+浓度,并进一步通过MAPK信号通路促进SW480细胞的增殖.     

下调PTEN基因对全脑缺血大鼠学习记忆能力和CREB表达的影响

目的:探讨下调第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)对全脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力及转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element- binding pro...     

肾癌细胞来源的exosomes诱导Jurkat T细胞凋亡

目的 体外研究肾癌786-0细胞来源的exosomes介导肿瘤免疫逃逸的机制.方法 采用CCK-8法检测肾癌786-0细胞来源的exosomes对Jurkat T细胞生长的影响,瑞氏-姬姆萨染色检测Jurkat T细胞形态变化,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测Jurkat T细胞凋亡率,ELISA法检测Jurkat T细胞分泌功能,可溶性Fas阻断实验检测exosomes 对Jurkat T细胞凋亡率的影响,Western blot检测exosomes中FasL、及Jurkat T细胞caspase、Bax及Bcl-2蛋白的表达.结果 肾癌786-0细胞来源的exosomes可抑制Jurkat T细胞生长,10 μg/mL exosomes作用于Jurkat T细胞24 h,生长抑制率为(19.64 ±0.92)％,72 h为(36.24±1.12)％;400 μg/mL exosomes作用24 h,生长抑制率为(55.96±1.35)％,72 h为(76.51 ±1.37)％.Exosomes诱导Jurkat T细胞凋亡,10 μg/mL exosomes作用于Jurkat T细胞8h,凋亡率为(7.31±1.32)％,24h为(20.19±1.47)％;400 μg/mL exosomes作用8h,凋亡率为(27.28±1.29)％,24h为(41.72±0.88)％.Exosomes还明显抑制JurkatT细胞IL-2、IFN-γ、IL-6、IL-10的分泌水平;exosomes高表达FasL,可溶性Fas阻断实验能逆转Jurkat T细胞的凋亡;凋亡诱导过程中caspase-3、caspase-8、caspase-9被激活,Bax/Bcl-2上调.结论 肾癌786-0细胞分泌的exosomes能诱导JurkatT细胞凋亡,介导肿瘤免疫逃逸.     

5-HT1A受体激动剂对青春期大鼠病理性攻击行为和前额叶皮质、海马内脑源性及胶质细胞源性神经营养因子的影响

目的 探索5-羟色胺1A(5-HT1A)受体激动剂8-OH-DPAT对青春期大鼠病理性攻击行为及对前额叶皮质、海马内脑源性神经营养因子(BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的影响.方法 出生后21 d的雄性SD大鼠42只随机分为6组(n=7):模型组、正常组、模型+药物组、模型+生理盐水(NS)组、正常+药物组、正常+NS组.模型组、模型+药物组及模型+NS组采用早年慢性应激建立病理性攻击模型,余3组正常饲养.建模成功后对模型+药物组、正常+药物组及模型+ NS组、正常+NS组分别行2周的8-OH-DPAT(0.5mg/kg)或生理盐水(2 mL/只)腹腔注射.用居住-入侵实验检测大鼠攻击行为,蛋白质印迹分析检测大鼠脑前额叶皮质及海马内BDNF、GDNF蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型组攻击潜伏期缩短(P＜0.01)、攻击持续时间及攻击总数增加(P＜0.01).模型+药物组攻击潜伏期较模型+NS组延长(P＜0.05);模型+药物组攻击持续时间较正常+药物组增加(P＜0.05);药物干预后攻击总数组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).模型组前额叶皮质、海马内BDNF及GDNF表达水平均低于正常组(P＜0.01),模型+NS组较正常+NS组降低(P＜0.05,P＜0.01),模型+药物组较模型+NS组升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 前额叶皮质及海马内BDNF、GDNF可能与早年慢性应激所致青春期大鼠病理性攻击行为的发生有关.5-HT1A受体激动剂可上调前额叶皮质及海马内BDNF、GDNF的蛋白表达,并在一定程度上减轻早年慢性应激所致青春期大鼠病理性攻击行为.     

重组质粒pBud-CD44v6的构建及其在胃癌细胞内的表达

目的 构建含人的肿瘤侵袭和转移的特异性抗原CD44v6编码基因的真核表达的重组载体,进行核苷酸序列分析,并在肿瘤细胞中表达.方法 ①以pBud作为真核表达载体,选择CD44v6编码基因进行RT-PCR扩增,构建重组表达质粒,进行酶切鉴定和测序分析.②在Lipofectamine 2000的介导下,将构建成功的pBud-CD44v6重组表达质粒转染到肿瘤细胞中,通过免疫组织化学方法检测CD44v6的表达.结果 经酶切鉴定和测序分析表明,插入的目的 基因片段为CD44v6的编码基因,长为129 bp,与GenBank中登录的cDNA相比较,同源性高达100%,且方向正确;重组质粒pBud-CD44v6转染对数生长期胃癌细胞株SGC-7901,进行免疫组织化学检测结果显示,与空质粒转染组对比,重组质粒组肿瘤细胞的细胞质中可见大量CD44v6基因编码的表达,其蛋白呈棕黄色,而对照组呈阴性.结论 成功构建了pBud-CD44v6真核表达的重组载体,并在肿瘤细胞中表达.     

PSD-95信号通路介导5-HT1A受体激动剂改善大鼠病理性攻击行为的调控机制

目的 探索突触后致密物-95(postsynaptic density-95,PSD-95)信号通路是否参与并介导5-HT1A受体激动剂对大鼠病理性攻击行为的改善作用及调控机制.方法 将成功构建的24只病理性攻击大鼠按照抽签法分为4组,分别为8-OH-DPAT组、8-OH-DPAT+ZL006组、ZL006组、NaCl组,5-HT1A受体激动剂(8-OH-DPAT)以1 mg/kg每日腹腔注射并持续2周、PSD-5阻断剂(ZL006)以1mg/kg每隔3天腹腔注射并持续2周.分别在给药前、给药1周后及给药2周后用居住-入侵实验测试大鼠病理性攻击行为变化,且每次居住-入侵实验前取大鼠眼眶后静脉血.取前额叶皮层、大鼠海马及下丘脑组织,用Western blot检测各脑区五羟色胺1A受体(serotonin 1A receptor5-HT1AR)、PSD-95及糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的表达,并采用ELISA试剂盒检测血清糖皮质激素含量.结果 8-OH-DPAT组大鼠攻击总数、攻击持续时间及攻击要害部位比在给药1周及2周后均有明显下降(P＜0.05);8-OH-DPAT+ ZL006组大鼠仅在给药1周后有降低(P＜0.05).Western blot检测结果显示8-OH-DPAT组、8-OH-DPAT+ ZL006组前额叶皮层及海马5-HT1A受体表达均高于其余两组(P＜0.05);8-OH-DPAT组大鼠前额叶皮层及海马PSD-95表达高于其余3组(P＜0.05);且该组海马GR表达低于其余3组(P＜0.05);各组大鼠下丘脑5-HT1AR、PSD-95表达差异无统计学意义(P＞0.05).ELISA结果显示:给药2周后8-OH-DPAT组血清糖皮质激素浓度有明显上升(P＜0.05),而其余3组在干预前后血清糖皮质激素无明显变化(P＞0.05).结论 PSD-95信号通路参与并介导了5-HT1A受体激动剂(8-OH-DPAT)对大鼠病理性攻击行为的改善作用,可能是通过对血清糖皮质激素的调控而发挥作用.     

Lrg1基因敲除损伤小鼠睾丸睾酮产生与生精功能

目的 利用富亮氨酸α-2-糖蛋白1(leucine-rich-alpha-2-glycoprotein 1,Lrg1基因敲除小鼠模型,对Lrg1在睾丸中的生物学功能进行研究.方法 通过Crispr/cas9技术制备Lrg1基因敲除小鼠.6只4月龄Lrg1基因敲除雄性小鼠与6只4月龄野生型雄性小鼠分别作为实验组与对照组,HE染色方法观察两组小鼠睾丸形态变化,采用ELISA方法测定小鼠促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)与睾酮水平.利用高通量测序方法分析睾丸组织基因转录谱表达变化.结果 LRG1表达于睾丸精原细胞与精母细胞.免疫荧光与Western blot实验结果表明LRG1蛋白在敲除小鼠睾丸中表达缺失.Lrg1敲除影响睾丸发育:生精小管直径降低[(196.22±27.88) μm vs(183.67±26.32) μm,P＜0.05],退化生精细胞增多[(26.17 +±5.03)vs(196.00 ±40.34),P＜0.01],平均每生精小管圆形精子数量减少[(76.00±12.45)vs(60.00±11.40),P＜0.01].血清睾酮水平下降[(2.90±0.92) ng/mL vs(1.90±0.29) ng/mL,P＜0.05].附睾精子数量减少,活力降低.生物信息学分析显示Lrg1敲除导致差异表达的基因集中于有丝分裂、减数分裂、染色体分离及代谢程序.具有转录调控作用的48个C2H2锌指蛋白家族成员和17个miRNA在Lrg1敲除睾丸中表达异常,提示睾丸转录调节网络失调.结论 Lrg1基因在小鼠睾丸中参与生精功能与睾酮合成.