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1.
背景与目的:不育α基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1(sterile alpha motif and histidine/aspartic acid domain-containing protein 1,SAMHD1)具有抑制多种肿瘤细胞生长的作用,但其调节肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的作用及机制尚未见报道。探究SAMHD1调控p27的表达对HCC细胞Huh7的增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:首先通过蛋白质印迹法(Western blot)检测正常肝细胞和不同类型HCC细胞中SAMHD1的表达情况。利用基因修饰技术构建过表达SAMHD1、dNTP酶活性位点突变体(SAMHD1-D207N)和磷酸化位点突变体(SAMHD1-T592E)的重组质粒,然后利用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测过表达SAMHD1及其突变体或siRNA干扰沉默SAMHD1对HCC细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡情况。在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中分析SAMHD1和p27表达的相关性。结果:HCC细胞中SAMHD1表达上调,过表达SAMHD1、SAMHD1-D207N和SAMHD1-T592E可以抑制Huh7细胞增殖,细胞周期停滞在G 1 /G 0 期;相反,干扰SAMHD1后细胞增殖加快,细胞周期停滞在G 2 /M期。机制研究表明,SAMHD1上调细胞周期蛋白激酶抑制因子p27的表达。在HCC组织中,p27的表达与SAMHD1表达呈正相关。结论:过表达SAMHD1可以上调p27的表达,导致细胞周期停滞在G 1 /G 0 期,从而抑制HCC细胞增殖,这种抑制作用不依赖于其dNTP酶活性和磷酸化修饰。  相似文献   
2.
《国际检验医学杂志》2020,(9):1116-1122
精准医疗时代背景下的新型分子诊断技术和方法为肝癌的个体化诊疗提供了新的契机,通过检测原发或转移性肝癌自发脱落或外源因素诱导脱落进入外周血液循环系统中的肿瘤细胞,即循环肿瘤细胞(CTCs),可为肝癌的早期筛查、辅助诊断、预后判断、疗效评估和复发转移等提供重要的指导。与传统检测方法相比,CTC检测具有无创、实时、方便、高效等显著特点,有望为肝癌患者开辟一条个性化的精准治疗之路。本文将对CTC在肝癌精准诊疗中的研究进展作一概述和展望,以期为临床提供重要的参考。  相似文献   
3.
目的 了解重庆地区门诊腹泻患儿感染诺如病毒(NV)流行株的变迁及基因重组情况。方法 采集2012年1~12月就诊于重庆医科大学附属儿童医院的疑似病毒性腹泻患儿的粪便标本。采用JVl2/JVl3、GⅠ SKF /GⅠ SKR(COG2F/GⅡ SKR)两对引物,对NV基因组的部分RNA依赖的RNA聚合酶区和衣壳蛋白的N/S区分别进行RT-PCR核酸检测,所有阳性产物进行回收纯化、测序,用DNAstar和MEGA 5.05软件对序列分别进行比对和构建进化树。并将疑似重组株的标本再用JVl2/GⅠ SKR(JVl2/GⅡ SKR)进行PCR扩增,用SimPlot软件对序列进行重组鉴定。结果 384例腹泻患儿粪便标本进入本文分析,男248例,女136例,年龄(13.1±14.4)个月。①NV阳性84/384例(21.9%),<60月龄组NV阳性构成比为96.4%(81/84)。NV在6、8和9月份检出率较高,3和4月份检出率最低。②84例NV阳性标本capsid的N/S区基因片段测序显示,GⅡ.4 2006b型37例,GⅡ.4 New Orleans 2009型1例,GⅡ.4 Sydney 2012型27例,GⅡ.3型12例,GⅡ.6型3例, GⅡ.13型3例,GⅡ.5型1 例;1~7月份 GⅡ.4 2006b型为主要流行株,8~12月GⅡ.4 Sydney 2012型为主要流行株;③共检出44株重组株,分别是GⅡ.e/GⅡ.4 Sydney 2012型27株、GⅡ.7/GⅡ.6型1株、GⅡ.22/GⅡ.5型1株、GⅡ.12/GⅡ.3型12株,GⅡ.16/GⅡ.13型3株。结论 重庆地区NV重组现象非常明显,2012年8~12月NV优势株逐渐由GⅡ.4 2006b型转为GⅡ.e/GⅡ.4 Sydney 2012型的重组株,并检出GⅡ.22/GⅡ.5型和GⅡ.16/GⅡ.13型2种新型重组株。  相似文献   
4.
 目的:研究凋亡抑制因子6(Api6)在高脂高胆固醇饮食所致C57BL/6J小鼠肺部炎症反应中的作用。方法:6~8周龄的C57BL/6J雄性小鼠喂养于SPF环境中,随机分成2组,分别给予普通饮食和高脂高胆固醇饮食喂养。喂养16周后收集肺组织并采用免疫组织化学和ELISA法鉴定肺组织的炎症状态。实时定量PCR和Western blotting鉴定Api6 mRNA与蛋白的表达水平,流式细胞术检测小鼠支气管肺泡灌洗液细胞凋亡情况。体外培养巨噬细胞RAW264.7,流式细胞术检测Api6对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)引起的细胞凋亡的影响。结果:高脂高胆固醇饮食喂养小鼠16周后,C57BL/6J小鼠肺组织出现以巨噬细胞蓄积以及肿瘤坏死因子α和单核细胞趋化蛋白1升高为主的炎症反应。与普通饮食组相比,高脂高胆固醇饮食喂养小鼠肺组织的Api6 mRNA和蛋白表达水平都显著上调(P<0.01),同时支气管肺泡灌洗液中的巨噬细胞凋亡水平明显下降(P<0.01)。体外实验证实500 μg/L的重组Api6处理RAW264.7细胞可显著抑制oxLDL引起的细胞凋亡(P<0.05)。结论:高脂高胆固醇饮食可致C57BL/6J小鼠肺组织巨噬细胞蓄积,其机制可能与Api6抑制巨噬细胞的凋亡有关。  相似文献   
5.
<正>【据《Hepatology》2019年3月报道】题:泛素结合酶UBE2L3功能位点维持cccD NA稳定性并促进HBV复制的机制研究(作者Zhou L等)尽管以往研究通过全基因关联分析(GWAS)发现多个HBV易感性基因,但是缺乏对这些基因或位点的生物学意义和临床价值的深入研究,并多集中于成人乙型肝炎队列研究。重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室Zhou等建立了上千人的HBV高危暴露儿童队列和HBV慢性感染儿童的病例样本库;并在儿童队列中鉴定了一  相似文献   
6.
目的:研究SIRT1抑制剂sirtinol、曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响,并探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)在HBV复制过程中的作用。方法:运用MTS分析HepG2.2.15细胞对sirtinol、TSA的耐受程度;real-time PCR和Southern blot验证sirtinol和TSA对HepG2.2.15细胞中HBV复制中间体表达的影响;Western blot和ELISA分析sirtinol对HBV核心蛋白(HBc)和HBsAg、HBeAg表达的影响。结果:sirtinol能抑制HBV复制中间体、HBc的表达和HBsAg、HBeAg的分泌,TSA可以促进HBV的复制。结论:SIRT1抑制剂sirtinol具有抗病毒作用。  相似文献   
7.
目的:高效表达人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)重组蛋白并制备其多克隆及单克隆抗体。方法:人工合成经密码子优化的NGAL基因,构建原核表达重组质粒pW28-NGAL,IPTG诱导表达后分离纯化并分析在溶液中的聚集状态;获得的rhNGAL抗原免疫兔子制备多克隆抗体,免疫小鼠筛选高效价的特异性单克隆抗体并鉴定抗体亚型;Protein G亲合柱纯化,等温滴定量热法及非竞争ELISA法检测抗体的亲和力,SDS-PAGE分析纯度;最后运用Western blot、免疫荧光和免疫组化对抗体进行鉴定。结果:高效获得高纯度NGAL重组蛋白,主要以单体形式存在;成功制备兔多抗,同时筛选获得6株高效价单克隆抗体;其中,25号单抗为IgG1亚型,余者均属IgG2a亚型,且19、35号单抗的亲和常数分别为3.06×109、2.14×109。SDS-PAGE分析表明纯度均大于90%。进一步的鉴定结果表明制备的抗体皆具有良好免疫反应性及特异性,且单抗的特异性明显高于多抗。结论:本研究利用密码子优化技术高效表达制备了NGAL重组蛋白,获得了其高效价多克隆抗体和高特异性单克隆抗体,为NGAL的病理生理作用等功能研究提供了良好的实验材料,为NGAL临床免疫检测诊断试剂的国产化奠定了有力的基础。  相似文献   
8.
目的:筛选DEx D/H-box家族中可能影响HBV增强子或核心启动子转录活性的基因,初步研究DHX15对HBV复制的调控作用。方法:克隆DEx D/H-box家族基因到表达质粒PCH9,并构建由HBV增强子和核心启动子驱动的海肾荧光素酶报告质粒pcore-Rluc;分别将各种DDX表达质粒与pcore-Rluc共转染HepG2细胞,筛选影响Rluc荧光素酶活性的DDX家族成员。在HepG2细胞中共转染HBV1.3倍体质粒和DHX15表达质粒,通过Western blot检测DHX15在细胞中的表达,用 South-ern blot、Northern blot检测过表达DHX15对细胞中HBV复制水平和转录水平的影响。构建HBV增强子与核心启动子截短突变体,确定DHX15在HBV增强子或核心启动子上的作用区域。结果:成功构建30种DEx D/H-box家族基因克隆;筛选出对HBV增强子/核心启动子有明显影响的基因DHX15(P=0.042);与对照组相比,过表达DHX15能促进HBV DNA的复制水平;并且能上调HBV RNA转录水平;成功构建HBV核心启动子截短突变体,发现DHX15促进HBV的复制是通过增强子实现的(t=8.292,P=0.001;t=5.215,P=0.006)。结论:过表达DHX15可通过影响HBV增强子的活性从而促进HBV复制。  相似文献   
9.
目的:探究sirtuin 6(SIRT6)对肝癌细胞增殖的影响。方法:RT-q PCR检测200例肝癌病人及50例健康人外周血中的SIRT6的mRNA表达水平,并将肝癌病人外周血SIRT6的mRNA表达水平与多个临床病理参数相结合进行统计学分析。Western blotting检测SIRT6在原代肝细胞、永生化肝细胞及肝癌细胞系中的蛋白表达水平。在肝癌细胞中利用shRNA干扰SIRT6基因的表达,并通过Western blotting验证沉默效率;MTS实验检测SIRT6基因沉默对肝癌细胞活力的影响。Ed U标记实验检测SIRT6基因沉默对肝癌细胞DNA合成的影响;平板集落实验检测SIRT6基因沉默对肝癌细胞集落形成能力的影响;软琼脂集落形成实验检测SIRT6基因沉默对肝癌细胞锚定非依赖生长能力的影响。结果:SIRT6在肝癌病人的外周血中表达明显增高,且SIRT6的表达量增高与肿瘤的大小、肿瘤的分级以及肿瘤的血管侵袭相关。进一步验证发现SIRT6在肝癌细胞系中表达水平较原代肝细胞PHH及永生化肝细胞MIHA增高。在2个肝癌细胞系中沉默SIRT6可以抑制肝癌细胞的活力及DNA合成能力,也可抑制肝癌细胞集落形成能力及锚定非依赖生长能力。结论:SIRT6促进肝癌细胞的增殖及恶性转化。  相似文献   
10.
目的 研究转化生长因子(TGF) β1的小干扰RNA (siRNA)对CCl4诱导肝纤维化大鼠TGFβ1/Smad信号通路的影响.方法 以前期研究的TGFβ1siRNA治疗前后肝纤维化大鼠肝脏组织作为研究对象,分为正常组、模型组、TGF β 1 siRNA 0.125 mg/kg组、TGFβ1 siRNA 0.25 mg/kg组和阴性对照组(0.25 mg/kg非特异性靶序列).用免疫组织化学和Western blot检测Smad2、3、4、7的蛋白表达;Real-time PCR法检测Smad2、3、4、7的mRNA表达.多组间数据比较用方差分析,两两比较采用q检验. 结果 免疫组织化学结果显示TGF-β1 siRNA 0.25mg/kg组及0.125 mg/kg组Smad2/3、4的蛋白表达量较模型组、阴性对照组明显减少(F值分别为115.538,117.178,P< 0.01),TGFβ 1 siRNA 0.25 mg/kg组表达量较0.125 mg/kg组少(P<0.05).TGFβ 1 siRNA 0.25 mg/kg组及0.125 mg/kg组Smad7的蛋白表达量较模型组、阴性对照组增加(F=125.34,P< 0.01),TGFβ 1 siRNA 0.25mg/kg组表达量较0.125 mg/kg组多(P<0.05).Western blot结果与之相似.Real-time PCR结果显示,与模型组和阴性对照组比较,TGFβ1 siRNA可以明显抑制Smad 2、3、4基因的表达,且TGFβ1 siRNA 0.25 mg/kg组Smad2、3、4的mRNA表达量(相对表达量分别为2.870±0.705、2.904±0.414、2.667±0.466)较TGF β1siRNA 0.125 mg/kg组(相对表达量分别为5.998±0.329、5.827±0.781、5.102±0.102)明显减少(P<0.05).TGFβ1 siRNA 0.25mg/kg组及0.125 mg/kg组Smad7的mRNA表达量较模型组、阴性对照组增加(F=29.615,P<0.01),TGFβ1 siRNA 0.25 mg/kg组表达量较0.125mg/kg组多(P<0.05).结论 TGFβ1 siRNA干扰大鼠TGFβ1表达后,Smad2、3、4表达量明显降低,而Smad7表达仍维持在较高水平,这利于肝纤维化的改善.  相似文献   
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