间充质祖细胞源性的神经元样细胞肌内移植后自身特性的维持

目的探讨间充质祖细胞(mesenchymal progenitor cells,MPCs)源性的神经元样细胞肌内移植后能否维持其自身特性。方法取3周龄健康GFP转基因C57小鼠后肢长骨进行MPC培养及鉴定,选取生长良好的第3代MPC,采用神经元原代培养上清液进行神经元样细胞诱导分化后收集细胞,并制备成5×105/μL细胞悬液备用。选取12周龄健康C57小鼠24只,按随机数字表法分为损伤+移植细胞组、损伤+生理盐水组、假手术+移植细胞组、假手术+生理盐水组。损伤+移植细胞组及假手术+移植细胞组:将制备的5μL MPC悬液散点注入小鼠三头肌内;损伤+生理盐水组和假手术+生理盐水组:同法注入等量生理盐水。术后4周取材,荧光显微镜下观察肌内移植细胞存活情况,电镜观察肌肉超微结构的变化,免疫荧光染色检测神经元特异性标志物NSE、NeuN及神经胶质特异性标志物GFAP的表达情况。结果肌内移植细胞生长良好且均匀分布于肌细胞间隙,并抑制了肌细胞核、线粒体、内质网的退变及肌肉纤维化的发生。损伤+移植细胞组定植存活的移植细胞阳性表达:NSE(58.35±1.37)%、NeuN(60.22±0.16)%及GFAP(13.32±1.65)%,损伤+生理盐水组、假手术+移植细胞组、假手术+生理盐水组均无阳性细胞表达。结论 MPC具有良好的生物学活性,经体外诱导分化为神经元及神经胶质样细胞后移植于失神经支配肌内可定植存活,并能够维持神经元及神经胶质样细胞的特性,同时有效抑制了肌细胞核、线粒体、内质网的退变及肌肉纤维化的发生。     

乳腺癌基因芯片实验数据分析与挖掘

目的 对公共数据库上下载得到的乳腺癌基因芯片试验结果进行数据分析,找出在正常组织与癌组织中呈现差异表达的基因,并寻找差异表达基因的相关基因.方法 综合运用显著性分析(SAM)、顶级评分基因对(TSP)、关联规则挖掘等方法,对数据进行处理.结果 筛选出若干呈现差异表达的基因,并且寻找了其中一部分基因的可能高度相关的基因....     

重庆地区5个miniSTR基因座群体遗传学研究

目的：建立荧光标记D1S1676、D2S441、D3S4529、D22S1045、amelogenin 5个mini短串联重复序列（Short tandem repeat,STR）基因座复合扩增体系,并对重庆地区汉族200名无关个体此5个基因座的遗传多态性进行研究分析。方法：分别用 5’TAMRA标记D1S1676引物,5’6-FAM标记D2S441和D3S4529引物,5’HEX标记 D22S1045引物,5’TET标记amelogenin引物,构建及优化符合扩增体系,运用3130基因分析仪检测并收集电泳结果数据,通过Gene Mapper v3.2.1 软件计算扩增产物片段相对大小以及进行样本基因型分型。结果：5个miniSTR基因座荧光标记复合扩增体系每个位点都获得清晰的分型结果。对重庆地区汉族无关个体 200份血样进行分型,5个基因座分别检出9、9、8、9、2个等位基因和103种基因型,其基因型分布均符Hardy-Weinberg平衡。其中D1S1676、D2S441、D3S4529、D22S1045基因座在重庆汉族群体的杂合度（Heterozygosity,Ho）分别依次为0．710、0．765、0．730、0．710;多态信息含量（Polymorphism information content,PIC）分别依次为：0．660 041、0．798 329、0．753 177、0．797 888;累计非父排除率（Exclusion probability of paternity,EP）为0．924 800 4,累计个人识别率为 0．999 955 1。结论：荧光标记D1S1676、D2S441、D3S4529、D22S1045、amelogenin 5个miniSTR基因座复合扩增体系,每个基因座可获得准确分型;重庆汉族群体该5个基因座的遗传学数据,可作为群体遗传学和法医学研究与应用的基础资料。     

1062例道路交通事故伤的伤残评定分析

目的探讨道路交通事故受伤人员伤残发生、分布特点,以及合理评定时限。方法应用GA35-92标准,对1062例道路交通事故伤进行伤残评定和分析。结果1062例中,男性656例(61．8％),女性406例(38．1％),25～40岁年龄段占总人数的51．2％;7～10级伤残者占总伤残人数的87．7％;四肢、头面部伤残人数较高;乘客、行人伤残人数均较多,但伤残烈度较驾车人低。入院科室以骨科、脑外科为主(83．1％);手术治疗者伤残烈度较高;伤后评定时间中位数188天,四分位间距202天。结论道路交通事故伤残预防应注重对青壮年男性与行人的安全防护及教育,加强安全设施研究,建立以骨科、脑外科为主的及时有效的统一救治体系。伤残评定时机选择需综合判断。     

血液中痕量乙醇代谢物:乙基葡萄糖醛酸苷的气相色谱质谱法测定

目的 建立气相色谱质谱( GC - MS)检测人体血液中乙醇代谢产物乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)的方法.方法 1ml乙二胺四乙酸二钠( EDTA - Na2)抗凝全血离心后取上层血浆,采用高氯酸去蛋白,并经氨基固相萃取小柱富集净化,提取物经BSTFA +TMCS(99∶1,v/v)衍生化,采用气相色谱-质谱法检测,总离子和选择离子模式(SIM)同时扫描,内标法定量分析.结果 样品在0.2～4.0 mg/L范围内线性关系良好(0.998 8),检出限为0.17 mg/L,绝对回收率位于75.3％～85.6％之间,相对标准偏差(RSD)为5.6％ ～7.6％.结论 该方法灵敏度高,特异性好,分析结果准确可靠,适用于法医学鉴定和临床检验中EtG的分析测定.     

大鼠溺死内参基因筛选和水通道蛋白5的表达

目的：在溺死尸体不同时间点模型中,筛选大鼠稳定表达的内参基因和探讨水通道蛋白5 mRNA（AQP-5 mRNA）的表达。方法：先建立溺死尸体不同时间点模型（0 min,n=6;15 min,n=6;4h,n=6;16h,n=6;48 h,n=6;72 h,n=6）,提取样本总的RNA,逆转录合成cDNA,qRT-PCR定量候选内参基因,geNorm和NormFinder排序各候选内参基因的表达,筛选出最稳定的内参基因,最后定量目的基因AQP-5 mRNA的表达。结果：该模型中筛选出ACTB为最稳定的内参基因,除72 h时间点,AQP-5 mRNA的表达均显著下调（15 min/0 min=0.51,P<0.05;4 h/0 min=0.53,P<0.05;16 h/0 min=0.63,P<0.05;48 h/0 min=0.81,P<0.05;72 h/0 min=0.89,P >0.05）。结论：本研究AQP-5 mRNA在大鼠溺死表达有一定阳性意义,有助于法医溺死鉴定.     

阿尔茨海默病差异表达基因的生物信息学分析

目的：应用生物信息学方法分析阿尔茨海默病(Alzheimer,s disease,AD)不同病情程度的差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）,在分子水平上探讨AD的发病制,为研究AD提供新思路。方法：从基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)下载基因芯片数据集GSE28146,使用在线分析工具GEO2R分别筛选AD轻度组、中度组和重度组与正常对照组比较的DEGs。运用DAVID 数据库对筛选出的DEGs进行基因本体（gene ontology,GO）富集分析和京都基因与基因百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路分析,通过STRING数据库构建蛋白相互作用网络,并采用Cytoscape软件筛选关键基因。结果：AD轻度组、中度组和重度组分别筛选出881、896和1142个DEGs。GO功能富集显示：轻度组与凋亡相关过程的激活、调节免疫反应、蛋白质磷酸化等生物过程密切相关,中度组与炎症反应、凋亡调节、钙离子的释放等生物过程密切相关,重度组与NF-κB的激活、蛋白质磷酸化和去磷酸化、细胞外基质的降解等生物过程密切相关。KEGG分析显示：轻度组主要富集到p53和TGF-β等信号通路,中度组主要富集到癌症途径、自然杀伤细胞介导的细胞毒性、细胞黏附分子等信号通路,重度组主要富集到细胞周期、Hippo信号通路、神经活性配体-受体相互作用等信号通路。蛋白互作网路分析各组富集程度最高的前5个关键基因：轻度组为GART、EHMT2、KRAS、ESR1、CD44;中度组为CBLB、HERC1、UBE2G1、UBE2M、HECW2;重度组为UBE2C、SOCS3、FBXW7、UBE3B、UBA6。结论：采用生物信息学方法分析不同病情程度的AD,所富集的信号通路和筛选出的关键基因可能在AD发生发展过程中起重要作用,为进一步深入研究AD提供了依据和思路。     

Survivin在帕金森病大鼠中对神经元凋亡的调控作用

目的：研究生存素（Survivin）在大鼠帕金森病（Parkinson’s disease,PD）模型中对黑质神经元凋亡的调控作用。方法：成年健康雄性SD大鼠,随机分为4组,对照组（n=8）;PD模型组（n=8）;PD模型+腺病毒空载体组（n=8）;PD模型+Survivin治疗组（n=8）。造模成功1周后,对照组和PD模型组不予以处理,PD模型+腺病毒空载体组在大鼠纹状体的同一坐标点注射腺病毒空载体,PD模型+Survivin治疗组在大鼠纹状体的同一坐标点注射携带Survivin基因腺病毒,治疗结束后每周对大鼠颈部皮下注射阿扑吗啡（Apomorphine,APO）进行行为学评价,行为学上出现差异后收集各组大鼠脑组织标本。分别运用TUNEL法观察黑质神经元凋亡情况,qRT-PCR检测Caspase 3和Caspase 9的mRNA表达情况水平,Western blot检测Cleaved-Caspase 3和Cleaved-Caspase 9的蛋白水平,评价Survivin对神经元凋亡的调控作用。结果：治疗结束后第3周,PD模型+Survivin治疗组与同期PD模型组及PD模型+腺病毒空载体组比较,大鼠旋转圈数减少（F=22.315,P=0.000,P=0.000）;TUNEL结果显示,与对照组比较,PD模型组及PD模型+腺病毒空载体组大鼠脑黑质神经元细胞凋亡明显;与PD模型组及PD模型+腺病毒空载体组比较,PD模型+Survivin治疗组黑质神经元细胞凋亡程度明显减轻（F=38.912,P=0.000,P=0.000）;此外,qRT-PCR和Western blot的结果显示,与PD模型组及PD模型+腺病毒空载体组比较,Survivin能够显著抑制神经元细胞中Caspase 3/9在mRNA水平（F=338.429,P=0.000,P=0.000;F=283.352,P=0.000,P=0.000）和Cleaved-Caspase 3/9在蛋白水平（F=640.262,P=0.000,P=0.000;F=354.210,P=0.000,P=0.000）的表达。结论：Survivin能够通过抑制PD大鼠脑组织中Caspase 3和Caspase 9的表达,减少脑内黑质神经元的凋亡,进而达到对脑黑质退行性病变的治疗作用,减轻PD相关症状     

重庆地区驾驶员血液中乙醇浓度与驾驶能力的关系

目的　探讨重庆地区驾驶员血液中乙醇浓度 (BAC)和驾驶能力的关系 ,为交通安全立法提供科学依据。　方法　随机选择重庆地区 59名驾驶员志愿者 ,建立饮酒后驾车模型、科学的BAC测定以及驾驶能力评价体系 ,对不同BAC下驾驶能力进行测评。　结果　受试者出现驾驶能力损害时的BAC均数为 685.9mg/L ,最小值 190 .0mg/L ,最大值 152 0 .0mg/L ,总体均数 95%可信区间为 60 2 .4～ 70 9.5mg/L。汉族和土家族间、汉族男性和女性间、2 3～ 3 5岁和 3 6～ 56岁年龄组间差异无显著性意义 (P >0 .0 5) ,而既往饮酒量不同的三个组别间差异有显著性意义 (P <0 .0 5)。随着BAC增高 ,驾驶能力受损人数增加。在 2 0 0 .0mg/L有 3 % (2 / 59)的受试者驾驶能力降低 ,80 0 .0mg/L则达到 68% (40 / 59)。　结论　随着BAC增高 ,重庆地区驾驶员驾驶能力受损人数比例增加 ,出现驾驶能力明显损害时BAC为 60 2 .4～ 70 9.5mg/L ,既往酒量较大人群中该值较高     

电损伤与烧伤皮肤上皮细胞极性化改变的研究

目的:探讨电损伤、热烧伤皮肤上皮细胞极性化改变的机制,并为其诊断提供客观量化指标.方法:对380 V交流电组、220 V交流电组、220 V直流电组、火焰烧伤组、金属灼伤组及正常对照组进行HE染色、EGFR染色及透射电镜观察,图像分析系统测定极性化上皮细胞核周长、长径、短径及长/短径比值,并进行统计学分析.结果:电损伤与热烧伤上皮细胞超微结构改变一致;极性化上皮细胞与正常上皮细胞EGFR在胞浆内分布较均匀;各损伤组皮肤上皮细胞核变长;各电损伤组上皮细胞核周长及长/短径比值两两比较无显著性差异(P＞0.05);2组热烧伤组比较也无显著性差异(P＞0.05);而各电损伤组分别与各热烧伤组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:电、热损伤上皮细胞极性化改变主要系热效应作用所致;定量测定损伤皮肤上皮细胞核周长及核长/短径比值,可推断该损伤系低压电损伤或烧伤.