米非司酮调控乳腺癌细胞增殖的研究

目的研究米非司酮对乳腺癌细胞系MCF-7和T47D的增殖抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测米非司酮对乳腺癌细胞系MCF-7和T47D的半数抑制浓度(IC50)。不同浓度米非司酮(0.25、2.5、25和50μmol/L)分别处理人乳腺癌细胞系MCF-7和T47D1、2、3d后,观察细胞形态变化,以及检测各组细胞生长曲线。结果米非司酮对乳腺癌MCF-7和T47D细胞均有抑制作用,其抑制率均随着米非司酮浓度的增加而变化,存在明显的量效关系。通过对两种细胞抑制率(IR)值直线回归分析,米非司酮对MCF-7细胞的IC50为51.21μmol/L,对T47D细胞的IC50为54.29μmol/L。形态学观察发现,各组细胞体积变小,细胞间的链接消失,细胞内明显有黑色小颗粒聚集。25和50μmol/L浓度米非司酮对MCF-7乳腺癌细胞株生长抑制作用明显,特别是50μmol/L干预24h后在高倍镜下可见明显的核质浓缩。结论米非司酮对病理分型、激素受体型不同的乳腺癌MCF-7和T47D细胞均具有抑制增殖的作用,并呈时间和剂量依赖效应。     

遵义地区汉族人群hsl外显子2单链构象多态性与T2DM的相关性

目的探讨遵义地区汉族人群hsl外显子2（hsle2）单链构象多态性与2型糖尿病（T2DM）的相关性。方法采用聚合酶链式反应—单链构象多态性分析方法检测295例遵义地区汉族人群hsle2多态性,并设正常对照。结果 hsle2检出AA、AB、AC基因型。其各基因型分布及各等位基因频率在T2DM与正常对照间的分布不具有统计学差异（P〉0.05）。结论 hsle2在遵义地区汉族人群中具有多态分布,该位点的多态变化与T2DM易感性无相关性。     

内质网应激--肿瘤治疗的新靶点

内质网是蛋白质合成、折叠、组装、修饰、运输和储存钙离子（Ca2＋）等的场所。多种生理和病理条件下,如缺血、缺氧、氧化还原状态的改变等均可干扰内质网的功能,并引起折叠蛋白/未折叠蛋白在内质网中堆积,产生内质网应激（ERS）。ERS最初可诱导细胞的生存,然而长时间剧烈的ERS可诱导细胞凋亡,即ERS反应性凋亡。针对这一特性,ERS可以作为肿瘤治疗的新靶点。     

吗啡精神依赖大鼠VTA-NAc-PFC神经环路谷氨酸含量和NR2B表达的变化

目的 观察吗啡诱导条件性位置偏爱大鼠中脑腹侧被盖区-伏核-前额叶皮质(VTA-NAc-PFC)神经环路各核团谷氨酸递质含量和N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基NR2B表达的变化,从受体前和受体层面探讨该环路中通过谷氨酸能系统的阿片类精神依赖机制.方法 筛选出合格大鼠32只并按随机数字表法分为生理盐水对照组和吗啡条件性位置偏爱模型组(模型组),模型组采用吗啡剂量递增法建立大鼠条件性位置偏爱模型,分别用比色法和免疫组化染色检测中脑腹侧被盖区、伏核和前额叶皮质内谷氨酸含量和NR2B的表达.结果 与生理盐水对照组比较,模型组大鼠在白箱的停留时间明显延长,VTA-NAc-PFC神经环路各核团谷氨酸含量明显增高,NR2B平均吸光度值明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 VTA-NAc-PFC神经环路谷氨酸递质含量及其受体亚基NR2B表达水平上调在吗啡精神依赖形成中发挥重要作用.

Abstract：

Objective To explore the mechanism of opioid-psychic dependence involving the aspects of pre-receptor and receptor by observing the changeable expressions of glutamate neurotransmitter and NR2B of N-methyl-D-aspartic acid (NMDA) receptor in the neuroanatomical circuit of ventral temental area, nucleus accumbens and prefrontal cortex (VTA-Nac-PFC) of rats subjected to morphine-induced conditioned place preference (CPP). Methods The models of CPP were validated by escalating doses of morphine in rats (n=16). The colorimetry and immunohistochemistry ways were applied to detect the contents of glutamic acid and the expression level of NR2B in VTA, Nac and PFC. Results As compared with those in the control group physiological saline), the prolonged detention time of white compartment in the model group was notably observed (P<0.05), and increased content of glutamic acid and expression level of NR2B in fields of VTA, Nac and PFC in the model group were significantly detected (P<0.05). Conclusion Increased level of giutamic acid and expression level of NR2B in nuroanatomieal circuit of VTA, Nac and PFC could play key roles in inducing morphine-psychic dependent rats.     

一种适用于初试者的STZ法建T1DM大鼠模型的技术方案

目的:探索一种适用于初学者的以STZ法复制1型糖尿病(T1DM)大鼠模型的技术方案?方法:100只雄性Wistar大鼠随机分为模型组(DMM)和对照组(NC)?采用有别于现有文献报道的技术方案即分批次建模?DMM组分3批依次分别一次性腹腔注射60 mg/kg(DMM1)?70 mg/kg(DMM2)?55 mg/kg(DMM3)STZ溶液,NC组注射等量的柠檬酸盐缓冲液?DMM1?DMM2建模未成功者均编为DMM3?将72 h后禁食17 h空腹血糖值(FPG)≥11.1 mmol/L和相应生理指标作为成模的判断依据?结果:DMM1建模前后FPG无差异(P > 0.05),DMM1建模失败;DMM2建模前后FPG具有显著差异(P < 0.05),成模率为75%?DMM3补充剂量后建模成功?结论:分批次进行的STZ法建模方案适宜于初学者使用?     

吗啡依赖戒断焦虑大鼠海马突触结构的可塑性

目的:通过对吗啡依赖戒断后焦虑模型大鼠海马突触形态结构可塑性的观察,探讨其焦虑情绪的发生机制。方法:采用剂量递增法建立大鼠吗啡依赖戒断后焦虑模型。取海马CA1、CA3区组织进行透射电镜观察和体视学定量分析。结果:焦虑模型组大鼠海马CA1、CA3区均可见突触密集、数量多,但体积比较小。CA1区突触数密度、面密度均较对照组显著增高,而突触连接带平均面积显著减小;CA3区突触数密度、面密度较对照组同样明显增高,而突触连接带平均面积明显减小。结论:突触形态结构的可塑性变化可能参与了吗啡依赖戒断后焦虑情绪的发生。     

Cuprizone诱导髓鞘损伤再生模型中Sip1的表达变化及其意义

目的:研究Smad相互作用蛋白1(Sip1)在cuprizone诱导髓鞘损伤再生模型中的表达变化及其意义。方法:通过在饲料中掺入cuprizone喂食C57BL/6小鼠建立髓鞘损伤模型,利用黑金(black gold,BG)染色方法及Western Blot方法,检测髓鞘损伤模型是否建立成功;利用Western Blot方法检测在髓鞘损伤及再生过程中Sip1的表达情况。结果:BG染色方法检测到喂药6周后模型组小鼠与对照组相比,着色显著降低,Western Blot方法检测到模型组小鼠MOG(myelin oligodendrocyte glycoprotein)蛋白表达水平显著降低,GFAP(glial fibrillary acidic protein)蛋白表达水平显著增高,证明髓鞘损伤模型建立成功。在模型建立成功后,停止喂药,改用正常饲料喂养4周后,通过Western Blot检测到模型组小鼠MOG蛋白水平显著恢复,证明该阶段髓鞘已再生。利用Western Blot方法检测髓鞘损伤模型建立阶段及髓鞘再生阶段的Sip1蛋白水平,结果显示与对照组小鼠相比,在髓鞘损伤阶段,模型组小鼠的Sip1蛋白水平显著增加,在髓鞘再生阶段Sip1蛋白水平同样显著增加。结论:Sip1在髓鞘损伤再生过程中具有重要作用,本研究为Sip1作为治疗髓鞘相关疾病的靶点提供了理论依据。     

医学细胞生物学设计性实验教学

医学细胞生物学涉及细胞生物学、生物化学、分子生物学、生理学等多门学科知识,是医学生必须掌握的基础学科之一,其实验教学不仅能将实践与理论紧密联系起来,而且对于培养学生树立严肃认真的科学实验作风、提高实验能力、加深理论知识的理解、综合运用知识、开拓创新等方面有非常重要的作用。传统的实验教学方式已不能满足学科发展的需要,因此多元化教学模式是现代教学的必然趋势。我室于2006年9月开始针对临床医学等专业增加设计性实验教学,现将设计性实验教学的优势和体会总结如下。