沉默hnRNP A2/B1基因后通过Bcl-2/Bax影响宫颈癌CaSki细胞的凋亡

目的 探索沉默核内不均一核糖核蛋白A2/B1（hnRNP A2/B1）基因后对宫颈癌CaSki细胞的增殖、凋亡的 影响及其相关作用机制。方法 建立稳定沉默 hnRNP A2/B1 的 CaSki 细胞株,分为未沉默 hnRNP A2/B1 的空白组 （CaSki 组）、转染阴性序列的阴性对照组（CaSki-NC 组）、转染阳性 hnRNP A2/B1 干扰序列的实验组（CaSki-shRNA 组）。运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及蛋白印迹法（Western blot）对各组细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达 水平进行验证,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖能力,细胞克隆实验检测各组细胞克隆形成能力,流式细 胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达变化。结果 与CaSki组、 CaSki-NC相比较,CaSki-shRNA组细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达水平均明显减低,细胞的增殖能力在48 h 降低,克隆形成能力下降,凋亡率增加,Bcl-2蛋白的表达减低,Bax表达升高（P＜0.01）,而CaSki组与CaSki-NC组之 间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 沉默hnRNP A2/B1基因后能抑制宫颈癌CaSki细胞的增殖能力,且可能通过 Bcl-2/Bax影响宫颈癌CaSki细胞的凋亡。     

胃黏膜组织中恶臭假单胞菌临床意义的探讨

目的探索恶臭假单胞菌在幽门螺杆菌感染相关胃肠疾病中的意义。方法采集14 C尿素呼气试验阳性患者病变胃黏膜354例,进行细菌的分离培养。根据菌落形态、革兰染色、尿素酶试验及幽门螺杆菌特异性16SrRNA基因片段的PCR进行幽门螺杆菌的鉴定,同时提取胃黏膜组织DNA,通过幽门螺杆菌特异性PCR进行快速诊断。将非幽门螺杆菌转种于营养琼脂培养基,进行快速尿素酶试验。尿素酶阳性的非幽门螺杆菌染色体DNA利用细菌16SrRNA基因通用引物进行PCR扩增、测序及序列比对。使用全自动细菌鉴定仪对经测序比对为恶臭假单胞菌的菌株进行鉴定。采用K-B纸片扩散法进行药物敏感性试验。结果从354例样本中分离出革兰阴性、尿素酶阳性的恶臭假单胞菌10株,经16SrRNA基因测序和序列比对,与GenBank中恶臭假单胞菌的相似性≥98%。10株恶臭假单胞菌的胃黏膜标本中,6例标本幽门螺杆菌特异性PCR为阳性,4例为阴性。传代存活的7株恶臭假单胞菌的K-B法药物敏感试验显示对左氧氟沙星均敏感,1株对四环素敏感,5株对阿莫西林耐药,6株对克拉霉素耐药,7株对甲硝唑、氨苄青霉素均耐药。7株菌经全自动细菌生化鉴定仪鉴定结果均为恶臭假单胞菌。结论病变胃黏膜中分离出尿素酶阳性且对治疗幽门螺杆菌感染的多种抗生素耐药;可能造成临床上14 C-尿素呼气试验假阳性,并继发感染影响胃肠疾病的进展。     

蓝莓促进人肝细胞mitofilin/Mic60表达抑制超氧化物生成减轻代谢功能障碍相关肝病的肝损伤

目的 研究蓝莓调控代谢功能障碍相关肝病(MAFLD)体外模型中线粒体内膜蛋白mitofilin/Mic60的作用及其机制。方法 游离脂肪酸(FFA)诱导L02人肝细胞建立MAFLD细胞模型，设立正常组、模型组、80μg/mL蓝莓原浆处理组、Mic60短发夹RNA(Mic60 shRNA)转染组、Mic60敲低联合80μg/mL蓝莓原浆处理组。油红O染色观察细胞内的脂质沉积情况；噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度蓝莓原浆对FFA处理的L02细胞存活率的影响；可见分光光度法检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和脂代谢指标甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量。荧光显微镜观察肝细胞内活性氧(ROS)的情况；采用实时定量PCR及Western blot法分别检测Mic60的mRNA及蛋白表达。结果 FFA诱导刺激L02细胞24 h后，L02细胞胞质内有大量红色脂滴沉积；80μg/mL蓝莓原浆处理的细胞存活率较高；蓝莓原浆处理组的ALT、AST、TG、TC、MDA检测结果和ROS的荧光强度显示均低...     

miRNAs调控乳腺癌血管生成的研究进展

乳腺癌的发展和转移依赖于血管生成,当血管生成发生时,原发部位肿瘤向周围组织扩散会形成新的血管,因此,血管生成也是乳腺癌患者预后不良的主要原因。微小核糖核酸(miRNAs)是参与各种生物过程的非编码核糖核酸。它们可以与靶基因的3′-UTR结合,通过抑制靶基因的表达来充当癌基因或肿瘤抑制因子,其中一些基因直接或间接参与了血管生成信号通路,阻止其表达。miRNAs通过改变许多生物学途径来控制内皮细胞的活性,在乳腺癌进展和血管生成中起着关键作用。肿瘤衍生的细胞外囊泡通过向内皮细胞传递miRNAs直接参与肿瘤血管生成的调控。近年来在乳腺癌治疗中,miRNAs显示出抑制血管生成的巨大前景。本综述展示了乳腺癌血管生成中miRNA调节的信号通路,强调了在体内和体外研究中用于抑制血管生成的新疗法。     

吴茱萸碱作用mTOR信号通路引起胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

吴茱萸碱(evodiamine)是中药吴茱萸最主要的具有抗肿瘤活性的生物碱之一,研究初步探讨吴茱萸碱作用哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用机制,为其抗肿瘤机制的探索及胃癌临床治疗奠定基础。采用MTT法观察吴茱萸碱单独作用对SGC-7901细胞及对人外周血单个核细胞(PBMCs)的细胞毒效应。Real-time PCR,Western blot分别检验吴茱萸碱单独或联合胱天蛋白酶抑制剂(z-VAD-fmk)作用后,mTOR,p70S6K和4EBP1基因表达以及mTOR和p-mTOR蛋白表达。结果表明,吴茱萸碱抑制SGC-7901细胞增殖存在时间剂量依赖性,且对人PBMCs无细胞毒作用。吴茱萸碱及联合z-VAD-fmk分别作用后,细胞变圆,漂浮于培养基中;与对照组比较,2种处理方法均能抑制mTOR,p70S6K和4EBP1基因表达,存在显著性差异,且与吴茱萸碱单独作用比较,联合z-VAD-fmk作用对基因表达抑制率加强;Western blot结果显示吴茱萸碱可以抑制mTOR和p-mTOR蛋白的表达无论是否有z-VAD-fmk的参与,且z-VAD-fmk阻断胱天蛋白酶作用后,抑制率增强。综上说明吴茱萸碱可能通过mTOR信号通路促进胃癌SGC-7901细胞凋亡。