PIK3R1对多发性骨髓瘤细胞侵袭转移的影响及其机制初探

目的:观察应用RNA干扰(RNAi)技术敲低PIK3R1表达后在体外对人类多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞侵袭的抑制作用。方法:将重组质粒表达载体pGenesil-1.1-PIK3R1转染至RPMI8226细胞。Realtime PCR和Western blot分别检测转染前后目的基因mRNA和蛋白的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞外基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的浓度变化。Transwell实验评价肿瘤细胞侵袭能力的变化。结果:pGenesil-1.1-PIK3R1可以有效抑制PIK3R1mRNA及蛋白的表达,MMP-2、MMP-9表达下调,基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-2表达上调,ELISA证实细胞外MM9-2、MMP-9浓度在治疗组明显减低。Tramwell穿过细胞数:对照组(115.5±3.9)和无义序列组(112.8±6.0),pGenesil-1.1-PIK3R1转染组(73.7±4.0)。结论:靶向PIK3RI的RNAi技术可以序列特异性地抑制PI3KR1表达,在体外明显抑制RPMI8226细胞的侵袭能力。     

米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226增殖与凋亡的影响

本研究探讨米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将米托蒽醌作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT-PCR检测BCL-2、BAX及caspase-3 mRNA表达量的变化,Western blot检测BCL-2、BAX和caspase-3 mRNA蛋白表达量变化。结果表明,米托蒽醌可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0.924）和浓度（r=0.947）依赖性增强。米托蒽醌作用24 h后在光学显微镜下可见米托蒽醌组细胞数量减少,排列紊乱,细胞形态变得不规则,可见凋亡细胞;在48 h后电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变,凋亡小体形成。流式细胞术检测结果显示,在米托蒽醌组RPMI8226细胞凋亡率明显增高（P〈0.05）;米托蒽醌作用48 h后,在低浓度1.0μg/ml组RPMI8226细胞阻滞于G2/M期（P〈0.05）,在高浓度2.0μg/ml组RPM I8226细胞阻滞于S期（P〈0.05）;米托蒽醌作用48 h,BCL-2 mRNA与BCL-2蛋白表达量减少（P〈0.05）,BAX、caspase-3mRNA及蛋白表达量增加（P〈0.05）。结论：米托蒽醌可诱导RPM I8226细胞凋亡,此细胞凋亡可能与细胞周期阻滞,激活细胞内、外源性凋亡的通路有关。     

2-甲氧基雌二醇逆转K562/AO2细胞耐药及其机制的初步研究

 目的研究2-甲氧基雌二醇(2-ME)对K562/AO2细胞耐药性逆转作用及其可能机制。方法利用不同浓度的2-ME作 用于K562及K562/AO2细胞,MTT法检测细胞对阿霉素的耐药性,计算耐药倍数及逆转倍数;利用AnnexinV /PI双染色 法检测K562/AO2细胞的凋亡效应。结果与K562细胞相比,K562/AO2细胞的耐药倍数为50倍;2-ME可显著降低阿霉素 对K562/AO2细胞的IC50,逆转倍数为5.9倍。AnnexinV /PI双染色法检测显示,1、4、16 μmol/L的2-ME处理 K562/AO2细胞后细胞凋亡率分别为10.32%、21.56% 和16.45%, 而对照组凋亡率仅为6.68%。结论2-ME能够逆转 K562/AO2阿霉素耐药,其机制可能与诱导K562/AO2细胞凋亡有关。     

对比硫化砷对两种白血病细胞株凋亡和hTERT-mRNA表达的影响

目的:对比硫化砷对慢性粒细胞白血病细胞株K562和急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4两种细胞的作用是否存在差异及其机制.方法:PCR-ELISA法测定端粒酶活性;半定量RT-PCR检测hTERT mRNA的表达;流式细胞术测量细胞周期、凋亡.结果:0.15～0.6 mg/L硫化砷(72 h)可在诱导NB4细胞凋亡的同时,下调细胞端粒酶活性和hTERT-mRNA表达,同样作用对于K562细胞需要硫化砷浓度达到0.3～3 mg/L.0.3 mg/L硫化砷(72 h)可引起NB4细胞出现G2/M期细胞比例增高.而K562细胞需要在1.5mg/L硫化砷诱导下出现G2/M期细胞比例增高.结论:端粒酶系统可能是硫化砷诱导NB4和K562细胞凋亡的途径之一;由硫化砷诱导的G2/M期阻滞可能与端粒酶活性的显著下降相关.NB4和K562细胞对硫化砷的敏感性存在明显差异,具体机制有待进一步研究.     

IFN-α和IFN-γ逆转MR2细胞维甲酸耐药的实验研究

目的:探讨IFN-α和IFN-γ与全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合逆转MR2细胞对ATRA耐药的可能性及其机制。方法:IFN-α、IFN-γ及ATRA单独或两种IFN分别与ATRA联合作用于对ATRA耐药的细胞株MR2后,采用MTT比色法检测细胞的增殖,用光镜观察、NBT还原实验及流式细胞仪检测细胞的分化,用间接免疫荧光法检测早幼粒细胞白血病(promyelocytic leukemia,PML)蛋白的表达。结果:两种IFN均能抑制MR2细胞的增殖;IFN与ATRA联合应用时抑制作用更加显著;但两种IFN无论是单独应用还是与ATRA联合应用,二者之间均无统计学意义(P>0.05)。两种IFN也能诱导MR2细胞发生一定程度的分化;二者分别与ATRA联合应用时作用更加显著,但IFN-γ ATRA组诱导MR2细胞分化的作用明显强于IFN-α ATRA组(P<0.05)。两种IFN都能诱导PML蛋白的表达。结论:IFN-γ与ATRA联合应用逆转MR2细胞对ATRA耐药的作用强于IFN-α与ATRA的联合,可能与IFN-α和IFN-γ信号传导途径的不同有关。     

小鼠脾细胞在混合骨髓移植中的作用

目的:观察同异基因小鼠脾细胞输注比例和输注量在混合半相合骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)和嵌合状态的影响.方法:受鼠全身照射后,经尾静脉回输同基因和半相合异基因供鼠骨髓及两者不同比例脾细胞.A组未加入异基因供鼠脾细胞,B组加入的同异基因供鼠脾细胞量相等,C组加入异基因供鼠脾细胞量是同基因供鼠脾细胞量的两倍.回输后观察GVHD临床表现,取肝、皮肤、小肠送病理学检查评定GVHD分级.测定 70天、 150天嵌合率.监测造血重建和受鼠生存率.结果:混合骨髓移植各组小鼠生存期均超过50天.其中A组,临床和病理无GVHD表现, 150天嵌合水平大幅度下降.B组,临床和病理无明显GVHD表现, 150天嵌合水平中等幅度下降.C组病理有GVHDⅡ级表现, 150天嵌合水平下降不明显.半相合骨髓移植对照组小鼠出现典型的GVHD临床和病理表现,仅20%小鼠生存期超过50天.结论:小鼠混合半相合骨髓移植中,同异基因小鼠脾细胞输注比例和输注量对移植排斥和GVHD有协调作用.     

奥沙利铂诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡机制的实验研究

本研究探讨奥沙利铂对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将奥沙利铂作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT—PCR检测Bcl-2、caspase-8及caspase-3mRNA表达量的变化,Western blot检测Bcl-2蛋白表达量变化。结果表明,奥沙利铂可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0．979）和浓度（r=0．949）依赖性增强;24h后在光学显微镜下可见奥沙利铂组细胞数量减少,排列紊乱,细胞形态变得不规则,体积变小,细胞碎片增多,可见凋亡细胞;48h电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变,凋亡小体形成。流式细胞术检测结果显示,奥沙利铂组RPMI8226细胞凋亡率明显增高（P〈0．05）;奥沙利铂作用24h后,骨髓瘤细胞被阻滞于S期（P〈0．05）;而作用48h后G0／G1期细胞所占比例明显增高（P〈0．05）;奥沙利铂作用48h,细胞既l-2mRNA与Bcl-2蛋白表达量未见明显变化,caspase-8及caspase-3mRNA表达量增加（P〈0．05）。结论：奥沙利铂可诱导RPMI8226细胞凋亡,其机制可能与其将细胞阻滞于S期,上调caspase-8、caspase-3mRNA表达有关;奥沙利铂诱导RPMI8226细胞凋亡可能不通过调节bcl-2基因表达实现。     

异基因造血干细胞移植中巨细胞病毒潜伏感染的防治

目的:观察依据异基因造血干细胞移植前受者巨细胞病毒(CMV)血清学检测结果采取不同的CMV感染防治方案的临床效果。方法:行异基因造血干细胞移植的37例患者,移植预处理前1周依据受者CMV血清学检测结果,对于移植前PP65抗原、CMV抗体及CMV-DNA定量均阴性的受者,应用阿昔洛韦预防CMV感染;移植前PP65、IgM抗体及DNA定量阴性,IgG抗体阳性的受者应用静脉更昔洛韦预防CMV感染。预处理中及移植后均采用阿昔洛韦进行病毒感染的预防,并定期检测PP65及CMV-IgM和CMV-DNA定量,当出现PP65阳性和/或CMV-IgM阳性、病毒复制增加时,给予更昔洛韦或膦甲酸钠联合人免疫球蛋白治疗。结果:36例受者移植后检测CMV抗体IgG均为阳性,巨细胞病毒血症占18.9%(7/37),CMV病占10.8%(4/37),CMV感染的时间为移植后+27～+65d,CMV感染多见于非血缘、HLA不全相合及发生aGVHD的患者,经更昔洛韦和或膦甲酸钠治疗后无一例因CMV病死亡。应用不同预防CMV感染方法的患者间造血重建时间无明显差异。结论:依据受移植前受者血清学检测结果给予不同的预防方案并结合预先治疗方案防治CMV感染可以明显减少CMV潜伏感染转变为CMV病的概率,且对造血重建无影响。     

血栓性血小板减少性紫癜诊断与误诊分析

血栓性血小板减少性紫癜(thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)属于罕见病,容易误诊,病情多变而凶险,如得不到及时诊治病死率达90%。其特征性的五联征包括血小板(platelet,PLT)减少、微血管病性溶血性贫血、神经精神症状、肾脏损害和发热。现对我院诊治的TTP患者8例进行回顾,着重分析其中6例误诊患者的诊断和误诊情况及其对疗效的影响。     

三氧化二砷对人胃癌裸鼠移植瘤VEGF—C及其受体VEGFR-3表达的影响

本研究探讨As2O3对肿瘤VEGF—C和VEGFR-3表达的影响，揭示As2O3在肿瘤淋巴道形成和转移中的作用。建立人胃腺癌裸鼠移植瘤模型，实验分2．5mg／kgAs2O3组，5mg／kgAs2O3组和注射等体积生理盐水的对照组。采用免疫组织化学方法检测VEGF—C和VEGFR-3表达，并采用图像信号采集与分析系统进行图像扫描分析。结果表明：治疗组VEGF—C和VEGFR-3的表达均较对照组明显减弱；高剂量As2O3组VEGF—C和VEGFR-3的表达明显弱于低剂量组，图像灰度统计分析显示差异具有显著性意义。结论：As2O3对人胃癌移植瘤细胞VEGF—C及其受体VEGFR-3表达均有抑制作用．提示As2O3可能通过抑制VEGF—C及其受体表达抑制肿瘤淋巴管的生成。