柱前衍生-液质联用法测定过氧化物还原酶2模拟肽中Asp外消旋化研究

目的建立了一种柱前衍生-液质联用测定过氧化物还原酶2(Prx2)模拟肽中天冬氨酸(Asp)外消旋化的方法,测定不同p H条件下,天冬氨酸外消旋化速率常数。方法采用6.0 mol·L~(-1)盐酸水解八肽,水解液减压干燥至干,加水溶解,以L-2-氨基丁酸为内标物,GITC为柱前衍生试剂,在p H 11.0碳酸氢钠溶液中衍生化。色谱条件:分离柱为YMC-PACK ODS-AQ(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为5%冰醋酸溶液(A)和乙腈-甲醇(90∶10)(B),梯度洗脱(0～22 min,20%～27.5%B;22～22.01 min,27.5%～95%B;22.01～27 min,95%B;27～27.01 min,95%～20%B;27.01～30 min,20%B),流速为1 mL·min~(-1);质谱条件:采用电喷雾离子源及正离子单离子监测模式(SIM)定量,天冬氨酸GITC衍生化物m/z 523,内标GITC衍生化物m/z 493。结果 D/L-Asp质量浓度在1.010～200.2μg·m L~(-1)时,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸的质量浓度之间的线性关系良好(r> 0.999),最低定量限(LLOQ)为1.010μg·m L~(-1);LLOQ、低、中和高浓度(LQC、MQC和HQC)日内和日间精密度RSD分别为0.98%～9.7%、3.3%～10.9%,加样回收率为100.2%～108.1%。在p H 3.0～10.0,天冬氨酸外消旋化的速率常数为0～6.24×10~(-4)·d~(-1)。结论该方法准确、快速,可用于Prx2中D/L-Asp检测。     

Nrf2激活剂在阿尔茨海默病治疗中的应用

阿尔茨海默病是一种不可逆的神经退行性疾病,以细胞外老年斑(SP)中β淀粉样蛋白的异常沉积、tau蛋白过度磷酸化形成的细胞内神经原纤维缠结(NFT)为特征,病因尚不明确,氧化应激被认为是导致AD发生发展的重要因素。Keap1-Nrf2-ARE信号通路是机体抗氧化和/或亲电应激的最重要的防御机制之一,激活此通路可诱导一系列细胞保护基因的转录,减少氧化应激,发挥神经保护作用。本文概述了黄酮类、酚类、羧酸类、酯类及其他类Nrf2激活剂对阿尔茨海默病的治疗作用。     

蛋白质中氨基酸外消旋化的研究进展

蛋白质结构中L-氨基酸可通过外消旋化转化为D-氨基酸,蛋白质中氨基酸的外消旋化可影响蛋白质的空间结构和功能,并证实与一些疾病的发生相关。随着分析仪器技术的不断发展,蛋白质中氨基酸外消旋化分析方法及检测技术也在不断地更新。本文综述了蛋白质中氨基酸外消旋化与疾病的关系、影响外消旋化的因素以及氨基酸外消旋化的检测方法,并对蛋白质中氨基酸外消旋化的研究方向进行了展望。     

衍生化LC-MS/MS法测定大鼠血浆中内源性谷胱甘肽的含量

建立一种巯基衍生化LC-MS/MS法测定大鼠血浆中内源性谷胱甘肽含量的方法。血浆样品经衍生化处理后采用电喷雾离子源(ESI)-三重四极杆质谱仪于正离子模式下进行选择反应检测(SRM)。色谱柱为Zorbax HILIC PLUS(4.6 mm×100 mm,3.5 μm);流动相为乙腈-水(含0.1%甲酸)(75∶25);流速为1 mL/min;柱温为35 ℃。甘氨酰酪氨酸作为内标物,4-(N-马来酰亚胺)苯基三甲基碘化铵(MPTA)作为衍生化试剂。方法学验证结果表明:衍生化后的谷胱甘肽在3.000~2 000 ng/mL范围内线性良好,r=0.997 1,最终定量下限约为10 pmol/L。准确度、提取回收率和基质效应均符合生物样本分析的要求。该方法对生物体内谷胱甘肽准确的定量、定性分析,以及其存在状态的正确评价有着重要的临床意义。     

作用于polo-box结构域的拟肽类polo样激酶1抑制剂的设计、合成及其生物活性

为寻找新型的作用于polo-box结构域的拟肽类polo样激酶1（Plk1 PBD）抑制剂,将先导化合物（PLHSpT）结构中的磷酸基团替换为羧基,并采用非天然氨基酸进一步改造与优化,设计合成了一系列不含磷酸基团的拟肽类Plk1 PBD抑制剂（化合物7a~7u)。设计合成的21个拟肽类化合物均对Plk1 PBD抑制作用较强,其中化合物7l高选择性地抑制Plk1 PBD,IC₅₀为0.285 μmol/L,体外对HeLa肿瘤细胞株的生长抑制作用优于含磷酸基团的化合物。经过非天然氨基酸修饰和改造,化合物在大鼠血浆中的稳定性得到了提高。实验证明,用羧基替换磷酸基团并进行肽链的结构改造,可以获得成药性更好的选择性Plk1 PBD抑制剂。     

多肽色谱保留预测及其在蛋白质组学中的应用

基于串联质谱的蛋白质组学分析方法往往依赖于实际谱图和理论谱图的匹配打分,而大量共洗脱肽的干扰会降低多肽和蛋白的鉴定及定量的准确性。多肽保留时间预测可将多肽色谱保留行为转变为稳定独立的特征时间属性,作为多肽鉴定的辅助和验证指标,改善多肽鉴定的准确性。复杂体系中多肽色谱保留预测也对优化蛋白质组学测定条件、提高数据非依赖采集中质谱数据的检出率和重复性具有重要意义。本文针对未修饰多肽及修饰多肽常用的色谱保留预测方法（包括基于标准化索引、多肽分子模型、氨基酸残基参数和机器学习等）进行了综述,总结各种方法的原理及其特点,并对其在蛋白质组学中的应用及发展方向进行了展望。     

过氧化物还原酶2及其潜在的临床应用价值研究进展

过氧化物还原酶2（peroxiredoxins,Prx2）是过氧化物还原酶家族的重要一员,在人体多种组织器官中都有表达,红细胞内含量极其丰富。Prx2在清除过氧化物、信号转导、分子伴侣等方面发挥着重要作用。Prx2结构和表达量的改变与多种疾病直接相关,是临床诊断及药物开发领域的新关注点。本文从Prx2的生理功能及其与不同疾病的相关性、不同存在形式、Prx2的检测手段3个方面进行综述,为进一步探究Prx2与疾病调控机制及其在疾病诊断和潜在临床应用的研究方面提供参考。