重组腺病毒过表达Notch1受体胞内结合域（NICD1）外源性激活Notch信号通路

目的：构建Notch1受体胞内结合域（Notch1 intracellular domain,NICD1）的重组腺病毒AdNICD1,探讨外源性过表达AdNICD1对Notch信号通路激活的影响。方法：利用高保真PCR（high fidelity PCR,Hi?Fi PCR）扩增NICD1编码区,并通过Gibson Assembly方法将其克隆至腺病毒载体中,经过菌落PCR、测序鉴定后,在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,再次通过质粒PCR鉴定,然后运用PacⅠ酶切线性化后用重组腺病毒载体转染过表达pTP基因的人胚肾293细胞（human embryo kidney 293 cell line,HEK293）中进行包装,收取病毒后使用过表达pTP基因的HEK293细胞扩增重组腺病毒AdNICD1。运用AdNICD1感染脂肪来源的间充质干细胞（immortalized multipotent adipose?derived mesenchymal stem cells,iMAD）,检测病毒感染效率;通过Q?PCR检测NICD1和Notch下游基因表达情况;利用Western blot检测NICD1在蛋白水平的表达情况。结果：成功构建过表达NICD1的重组腺病毒并有效感染iMAD;利用AdNICD1可明显增加NICD1在基因和蛋白水平的表达,并激活Notch信号下游基因的表达。结论：成功构建过表达NICD1的重组腺病毒,并有效激活Notch信号通路。