复肝丸调控miR-424表达抑制肝窦内皮细胞血管新生的体外研究

目的观察复肝丸调控miR-424表达以抑制肝窦内皮细胞血管新生的作用及其机制。方法以不同剂量(0～2 000 mg/L)的复肝丸与人肝窦内皮细胞(HHSEC)共孵育,CCK8法检测复肝丸对细胞活力的影响,分析复肝丸对细胞无毒性作用的剂量范围,并以此作为后续药效及机制评价的剂量。以CoCl_2诱导HHSEC血管新生模型,分为正常组、模型组、miR-424抑制剂组及复肝丸组,除正常组外,其余各组以CoCl_2诱导细胞血管新生,miR-424抑制剂组及复肝丸组分别以miR-424抑制剂及复肝丸(200 mg/L)与细胞共孵育24 h。采用CCK8法检测细胞活力与增殖情况;Transwell观察细胞迁移变化情况;Matrigel管腔生成实验评价细胞管腔形成情况;定量RT-PCR检测miR-424、HIF-1α、vWF、CD31基因表达;Western blot法检测HIF-1α、vWF、CD31蛋白表达。结果复肝丸剂量小于400 mg/L对HHSCE无明显细胞毒性。与正常组比较,200μmol/L CoCl_2可诱导肝窦内皮细胞缺氧损伤模型,且模型组miR-424、HIF-1α表达增加,细胞迁移和管腔生成增多,vWF、CD31表达增加(P0.01);与模型组比较,miR-424抑制剂与200 mg/L复肝丸干预后,miR-424与HIF-1α表达均不同程度降低,细胞迁移和管腔生成受抑制,vWF、CD31表达降低(P0.01);且复肝丸组综合疗效与miR-424抑制剂相当。结论复肝丸具有良好的抑制肝窦内皮细胞血管新生的作用,其作用机制与抑制miR-424表达相关。     

栀子苷对大鼠肝损伤及血清、肝脏、粪便中胆汁酸的影响

目的 探讨不同剂量栀子苷对大鼠肝脏的毒性,以及对其血清、肝组织及粪便中胆汁酸的影响。方法 60只SD大鼠,雌雄各半,按体质量随机分成空白组及栀子苷（50,100,200,400 mg·kg^-1）组,共5组,每组12只,每天灌胃给药1次,连续7 d,于第8天收集大鼠血清、肝组织和盲肠内容物。检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）,门冬氨酸氨基转移酶（AST）,碱性磷酸酶（ALP）活性,白蛋白（ALB）,总胆红素（TBIL）,总胆汁酸（TBA）,肌酐（Crea）,尿素（Urea）含量,肝脏组织切片分别作苏木素-伊红（HE）染色,免疫组化检测细胞角蛋白7（CK7）,细胞角蛋白19（CK19）蛋白表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）测定肝组织CK7,CK19蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测胆固醇7α-羟化酶（CYP7A1）,胆固醇27α-羟化酶（CYP27A1）,胆固醇12α-羟化酶（CYP8B1） mRNA表达情况,采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS）测定血清、肝脏及盲肠内容物中18种胆汁酸含量。结果 与空白组比较,各剂量栀子苷组TBIL水平显著升高（P<0.01）;400 mg·kg^-1栀子苷组ALT,AST活性和TBA含量明显升高（P<0.05,P<0.01）;HE染色表明,与空白组比较,栀子苷200,400 mg·kg^-1组肝组织的汇管区有胆管反应,胆管周围有炎症细胞的浸润,尤以栀子苷400 mg·kg^-1毒性明显。栀子苷400 mg·kg^-1栀子苷组肝组织中CK7,CK19表达较空白组明显增加（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,400 mg·kg^-1栀子苷组肝组织中甘氨熊脱氧胆酸（GUDCA）,甘氨猪去氧胆酸（GHDCA）含量明显下降（P<0.05,P<0.01）,牛磺鹅去氧胆酸（TCDCA）,猪去氧胆酸（HDCA）,胆酸（CA）,鹅去氧胆酸（CDCA）含量显著升高（P<0.01）,甘氨胆酸（GCA）,甘氨鹅去氧胆酸（GCDCA）,甘氨脱氧胆酸（GDCA）,甘氨石胆酸（GLCA）,牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）,GUDCA,GHDCA,熊去氧胆酸（UDCA）,牛磺石胆酸（TLCA）的含量占比降低,TCDCA,HDCA,CA,CDCA,脱氧胆酸（DCA）的占比增加;血清中GHDCA,石胆酸（LCA）含量显著下降（P<0.01）,牛磺猪去氧胆酸（THDCA）,牛磺胆酸（TCA）,GCA,TCDCA,UDCA,CA,CDCA,DCA含量明显增加（P<0.05,P<0.01）,CA/DCA显著升高（P<0.01）,且CA与CDCA含量占比分别上升19.60%和4.63%;与空白组比较,400 mg·kg^-1栀子苷组盲肠内容物中所有的胆汁酸含量均下降,其中GCA,UDCA,HDCA,GCDCA,GDCA,TLCA,GLCA,CDCA,DCA,LCA含量明显下降（P<0.05,P<0.01）。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,400 mg·kg^-1栀子苷组肝组织中CYP7A1,CYP27A1 mRNA表达明显增加（P<0.05,P<0.01）。结论 400 mg·kg^-1栀子苷灌胃,可导致大鼠明显的肝损伤,其肝脏、血清与粪便中胆汁酸发生显著改变,且同一种胆汁酸在肝脏、血清与粪便中的变化不尽相同。然而,由栀子苷所导致的肝损伤与体内胆汁酸变化间的因果关系尚不清楚,仍有待后续进一步研究给予阐明。     

刘平治疗乙型肝炎肝硬化食管静脉曲张1例

<正>肝硬化是各种慢性肝病发展的晚期阶段,病理上以肝脏弥漫性纤维化、再生结节和假小叶形成为特征~([1])。门静脉高压致食管胃底静脉曲张是病情发展的表现,预后不佳,进展至后期可致血管破裂出血,危及患者生命~([2])。现将吾师刘平教授治疗肝硬化食管静脉曲张病例一例,与同道分享,以供参考。1病案实录     

HPLC法同时测定艾叶中7种成分

目的建立HPLC法同时测定艾Artemisia argyi Levl.et Vant.叶中新绿原酸、隐绿原酸、绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的含有量。方法艾叶50%甲醇提取液的分析采用Prevail C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;检测波长325 nm;柱温30℃。结果 7种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率98.28%~101.11%,RSD 1.04%~2.59%。结论该方法简便准确,重复性好,可用于艾叶的质量控制。     

表皮生长因子影响舌苔形成的机制研究进展

舌象是中医临床辨证论治的重要依据,舌苔是舌象重要组成部分。舌苔形成和变化的生理病理机制是一个重要的科学问题。近年来的研究表明,在舌苔形成过程中除了凋亡相关的基因,表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)同样发挥着重要的作用。本文从EGF影响舌苔形成的机制角度做一综述,以期为今后的研究提供思路与参考。     

123例维持性血液透析患者矿物质及骨代谢水平的调查分析

目的调查分析上海中医药大学附属曙光医院肾病科透析中心维持性血液透析(MHD)患者矿物质和骨代谢水平,进行相关因素分析并探讨调控方法。方法采用横断面研究方法调查123例MHD患者矿物质和骨代谢指标达标情况,分析各指标与调查对象年龄、性别、透析时间、血红蛋白、尿素氮、碱性磷酸酶等因素之间的相关性。结果 123例MHD患者68.29%血钙达标,28.46%血磷达标,56.10%全段甲状旁腺素(i PTH)达标,所有指标全部达标者仅13例,达标率为10.57%。骨代谢紊乱与年龄、肾功能、血β2-微球蛋白、高血压、铁蛋白、碱性磷酸酶、Kt/V有相关性;高碱性磷酸酶与高水平i PTH相关,低水平i PTH与糖尿病相关。结论 MHD患者矿物质和骨代谢水平紊乱的发生率较高,本中心调查结果与指南的要求仍然存在较大的差距,患者的年龄、透析时间、高血压、血红蛋白、i PTH、血磷、钙磷结合剂的使用、活性维生素D的使用等是影响MHD患者矿物质和骨代谢水平的主要相关因素,仍然需要进一步加强防治。     

祛湿化瘀方通过调节AMPK活性改善高脂饮食诱导的实验性脂肪肝肝脏脂肪代谢

目的:研究祛湿化瘀方对高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝AMPK蛋白活性及其相关脂肪代谢靶蛋白活性的影响,以探讨该方防治实验性脂肪肝的作用机制。方法:采用高脂饲料饮食诱导大鼠脂肪肝模型,造模大鼠给予高脂饮食4周后,按随机数字表随机分为模型组及祛湿化瘀方组,分别灌胃给予饮用水及中药祛湿化瘀方4周。实验8周末取材后观察:1)肝组织三酰甘油(Triglyceride,TG)、游离脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA)含量,2)肝组织病理变化(HE染色、油红染色),3)肝组织腺苷酸活化的蛋白激酶(AMP-Activated K inase,AMPK)及磷酸化AMPK、肝组织总蛋白及核蛋白固醇调节元件结合蛋白-1c(Sterol Regulatory Element Binding Protein-1c、SREBP-1c)、肝组织总蛋白及核蛋白碳水化合物反应元件结合蛋白(Carbohydrate Response Element Binding Protein、ChREBP)含量、肝组织乙酰辅酶A羧化酶(Acety1 Co A Carboxylase,ACCase)及磷酸化ACC蛋白含量,4)肝组织AMPKα1、AMPKα2、SREBP-1、ACCα、SREBP-1c及ChREBP基因表达水平。结果:1)模型组肝组织TG、FFA含量显著升高,肝组织出现明显大泡样脂肪变性;模型组肝组织AMPK蛋白磷酸化水平降低、核蛋白SREBP-1与ChREBP表达增加、ACC蛋白磷酸化水平降低蛋白活性升高。2)祛湿化瘀方组肝组织TG、FFA含量较模型组显著降低,肝组织炎症及脂肪变性程度减轻;祛湿化瘀方能显著升高肝组织AMPK、ACC蛋白磷酸化水平、降低核蛋白SREBP-1及ChREBP含量。结论:祛湿化瘀方通过调节AMPK活性及其相关靶蛋白活性改善高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝肝脂肪代谢,这可能是该方有效防治实验性脂肪肝的重要作用机制之一。     

扶正化瘀组分复方抑制血管新生的抗肝纤维化作用机制

目的:本研究旨在探讨扶正化瘀组分复方的抗肝纤维化作用及其作用机制。方法:采用DMN诱导小鼠肝纤维化模型,以扶正化瘀方为阳性对照。以天狼猩红染色和羟脯氨酸含量评估肝纤维化程度;肝脏微血管成像和CD31标记微血管密度评价肝脏血管新生;western blot法检测肝组织VEGF-R2表达;通过计数转基因斑马鱼功能性节间血管数和碱性磷酸酶活性验证药物对血管的影响。结果:扶正化瘀组分复方可显著改善纤维化小鼠血清肝功能(P<0.01):减少肝组织胶原沉积(P<0.01);减少肝脏微血管数量(P<0.01);下调VEGFR2蛋白表达(P<0.01);抑制斑马鱼碱性磷酸酶活性。结论:扶正化瘀组分复方具有抑制DMN诱导小鼠肝纤维化模型肝组织纤维化的作用,其作用机制可能与抑制血管新生有关。     

健脾清化方对CKD2～3期患者慢性微炎症状态的随机对照多中心研究

目的:研究健脾清化方对慢性肾脏疾病(CKD)2～3期脾虚湿热患者慢性微炎症状态的作用。方法:3个中心的随机对照临床研究,随机分成中药组和对照组,并设20例健康体检患者为正常组。对照组予西医常规治疗,中药组在对照组基础上加用健脾清化方。共随访8周,观察治疗前后血肌酐(Scr)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-17(IL-17)、干扰素-γ(IFN-γ)的变化。结果:最终中药组有74例、对照组有73例完成研究。治疗前两组的hs-CRP、IL-17、IFN-γ比正常组显著升高(P<0.05)。8周的治疗后,中药组的Scr有显著下降(P<0.05)。中药组hs-CRP平均下降了26.4%(P<0.05),而对照组有上升的趋势。中药组IL-17平均下降了73.5%(P<0.05),对照组平均下降了25.6%。中药组IFN-γ平均下降了48.3%(P<0.05),而对照组平均下降了23.3%。结论:CKD2～3期的脾虚湿热患者存在慢性微炎症状态,健脾清化方能明显改善微炎症状态。